【摘要】：目的：本研究旨在探討補(bǔ)腎法預(yù)防糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松癥(GIOP)的研究機(jī)制。通過回顧性臨床病例研究,分析GIOP的中醫(yī)證型總體分布特點(diǎn),探究腎虛型GIOP的分布規(guī)律及其與相關(guān)發(fā)病因素的內(nèi)在關(guān)聯(lián),為中醫(yī)藥從“腎”論治GIOP的科學(xué)內(nèi)涵提供依據(jù)。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),測(cè)定GIOP大鼠血清骨代謝指標(biāo)、骨密度、骨生物力學(xué)性能及骨組織中LRP5、RUNX2、RANKL、NF-κB、β-catenin mRNA的表達(dá),闡明補(bǔ)腎法預(yù)防大鼠GIOP的作用機(jī)制及效果,為中西結(jié)合預(yù)防GIOP提供依據(jù)。方法：1、臨床研究：收集自2014年1月至2014年12月就診于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院脊柱骨的118例GIOP患者的病例資料,包括性別、年齡、體重指數(shù)(BMI),骨密度等,分析GIOP患者的中醫(yī)證型分布特點(diǎn)及其與相關(guān)發(fā)病因素之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,測(cè)量數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間比較采用單因素方差分析,分類資料的比較采用卡方檢驗(yàn)。2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：將45只大鼠隨機(jī)分為5組：空白組9只,模型組9只、西藥組9只、中藥組9只、中西藥聯(lián)合組9只,成功建立糖皮質(zhì)激素性大鼠骨質(zhì)疏松模型后,空白組給予蒸餾水灌胃5 ml/kg/d;模型組予皮下注射潑尼松,給藥劑量為5mg/kg/d;西藥組在皮下注射潑尼松(5mg/kg/d)的基礎(chǔ)上,予阿侖膦酸鈉灌胃,給藥劑量為lmg/kg/7d;中藥組在皮下注射潑尼松(5mg/kg/d)的基礎(chǔ)上,應(yīng)用的補(bǔ)腎方按照人與大鼠體表面積折算,予每天灌胃給藥濃度為0.25 g/mL,給藥劑量為2.5 g/kg/d;中西藥聯(lián)合組予皮下注射潑尼松5 mg/kg/d、補(bǔ)腎方2.5 g/kg/d聯(lián)合阿侖膦酸鈉lmg/kg/7d。干預(yù)措施連用12周后麻醉處死大鼠。2.1大鼠血清骨代謝指標(biāo)測(cè)定：采用ELISA法檢測(cè)GIOP大鼠血清中骨形成標(biāo)記物Ⅰ型前膠原氨基端前肽(PINP)、骨吸收標(biāo)記物Ⅰ型膠原羥基端肽(β-CTx)的表達(dá)。2.2大鼠骨密度檢測(cè)：大鼠處死后,迅速完整分離GIOP大鼠腰1-3椎體,采用雙能X線吸收骨密度檢測(cè)儀(美國(guó)hologic公司)檢測(cè)腰1-3整體的骨密度(BMD)、骨礦含量(BMC)。2.3大鼠骨組織Micro-CT檢測(cè)：采用u CT80型Micro-CT機(jī)掃描GIOP大鼠腰4椎骨,獲得大鼠腰4椎體骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)：骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV,%),骨小梁厚度(Tb.Th,mm)、骨小梁數(shù)量(Tb. N,1/mm),骨小梁分離度(Tb.Sp, mm),結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(SMI)。2.4大鼠骨組織生物力學(xué)參數(shù)檢測(cè)：GIOP大鼠腰4椎骨完成Micro-CT機(jī)掃描后,采用萬(wàn)能材料試驗(yàn)機(jī)(Electropuls E1000 test system,Instron Corporation,USA)對(duì)大鼠腰4椎骨進(jìn)行壓縮試驗(yàn),測(cè)定大鼠椎骨的壓縮剛度(N/mm),壓縮強(qiáng)度(N)等相關(guān)力學(xué)參數(shù)。2.5 大鼠骨組織中LRP5、RUNX2、RANKL、NF-κB、β-catenin mRNA的表達(dá)：取GIOP大鼠腰6椎體、左脛骨組織進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)。參照TAKARA公司提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量試劑盒進(jìn)行操作,檢測(cè)大鼠骨組織中LRP5、RUNX2、RANKL、NF-κB、β-catenin mRNA的表達(dá)。成果：1、本研究發(fā)現(xiàn)GIOP的中醫(yī)證型可分為：腎陽(yáng)虛、腎陰虛、腎陰陽(yáng)兩虛、氣滯血瘀、脾胃虛弱等五種證型,其中腎陽(yáng)虛型占27.12%,腎陰虛型占28.81%,腎陰陽(yáng)兩虛型占10.17%,脾胃虛弱型占14.41%、氣滯血瘀型占19.49%,據(jù)此可知,GIOP患者的中醫(yī)證型主要以腎虛為主,隨著年齡的增長(zhǎng),腎虛的癥候表現(xiàn)日趨明顯,且腎虛型患者骨折發(fā)生率達(dá)80.64%,高于其它兩組證型。2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下：2.1 大鼠血清骨代謝指標(biāo)：與模型組相比較,空白組、西藥組、中藥組及中西藥聯(lián)合組的血清β-CTX與PINP的表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2 大鼠骨密度：與模型組相比較,空白組、西藥組、中藥組、中西藥聯(lián)合組大鼠BMD、BMC的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與空白組相比較,西藥組、中藥組、中西藥聯(lián)合組的BMD、BMC的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.3 大鼠骨組織Micro-CT:與模型組相比較,空白組、西藥組、中藥組及中西藥聯(lián)合組的骨分離度、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組相比較,空白組、中西藥聯(lián)合組的骨小梁數(shù)的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組相比較,空白組、中藥組的骨小梁厚度的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.4 大鼠骨組織生物力學(xué)參數(shù)：與模型組相比較,空白組、西藥組、中藥組及中西藥聯(lián)合組的壓縮強(qiáng)度(N)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組相比較,西藥組、中西藥聯(lián)合組的壓縮剛度(N/mm)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.5 大鼠骨組織中LRP5、RUNX2、RANKL、NF-KB、β-catenin mRNA的表達(dá)：與模型組相比,空白組、西藥組、中藥組及中西藥聯(lián)合組的LRP5、RUNX2、RANKLmRNA的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與模型組比較,空白組、西藥組、中藥組及中西藥聯(lián)合組中NF-KB、β-catenin mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、本研究發(fā)現(xiàn)GIOP的中醫(yī)證型可分為：腎陽(yáng)虛、腎陰虛證、腎陰陽(yáng)兩虛、氣滯血瘀、脾胃虛弱等五種證型,主要以腎虛型為主,且隨著年齡的增長(zhǎng),腎虛的癥候表現(xiàn)日趨明顯。腎虛型患者發(fā)生骨折的比例達(dá)80.64%,高于其它兩組證型的發(fā)生率,故臨床診療中應(yīng)著眼于從“腎”論治,以中醫(yī)補(bǔ)腎為綱,中西并用預(yù)防GIOP及其并發(fā)癥的發(fā)生。2、依據(jù)本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可得出如下結(jié)論：2.1 補(bǔ)腎方可通過上調(diào)GIOP大鼠血清成骨標(biāo)記物PINP的表達(dá)含量、降低破骨標(biāo)記物β-CTX的表達(dá)含量,達(dá)到促進(jìn)成骨、抑制破骨而預(yù)防大鼠GIOP的效果。2.2補(bǔ)腎方干預(yù)后能顯著提高GIOP大鼠的骨密度；在預(yù)防大鼠GIOP上具有確切療效；此外,補(bǔ)腎方聯(lián)合阿侖膦酸鈉運(yùn)用在提高GIOP大鼠的骨密度上優(yōu)于單純運(yùn)用阿侖膦酸鈉或補(bǔ)腎方。2.3補(bǔ)腎方可通過增加GIOP大鼠腰椎骨小梁數(shù),降低骨分離度、結(jié)構(gòu)模型指數(shù),達(dá)到提升骨質(zhì)量,改善骨強(qiáng)度,從而預(yù)防GIOP的發(fā)生。2.4補(bǔ)腎方能明顯提升大鼠骨質(zhì)的壓縮剛度(N/mm)及壓縮強(qiáng)度(N),通過改善GIOP大鼠腰椎骨的生物力學(xué)性能,達(dá)到預(yù)防大鼠GIOP的作用。2.5補(bǔ)腎方能夠提高GIOP大鼠中反映成骨活性的LRP5、RUNX2mRNA、抑制反映破骨活性RANKLmRNA的表達(dá),起到預(yù)防大鼠GIOP的作用。
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R259

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本文編號(hào)：2520340