【摘要】：第一部分室旁核Apelin-13通過激活交感神經(jīng)和促血管加壓素釋放引起自發(fā)性高血壓大鼠血壓升高背景高血壓病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病,發(fā)病率高,治療效果不理想。交感神經(jīng)活動過度增強(qiáng)是高血壓病的重要特征之一。下丘腦室旁核(PVN)是整合和調(diào)控心血管活動和交感神經(jīng)活動的重要中樞核團(tuán)之一。PVN中神經(jīng)元分為小細(xì)胞神經(jīng)元和大細(xì)胞神經(jīng)元。調(diào)節(jié)自主神經(jīng)活動的小細(xì)胞神經(jīng)元發(fā)出纖維投射到腦干延髓頭端腹外側(cè)部(RVLM)和脊髓中間外側(cè)柱(IML)交感節(jié)前神經(jīng)元,調(diào)控心血管和交感神經(jīng)活動。大細(xì)胞神經(jīng)元胞體合成精氨酸加壓素(AVP),神經(jīng)纖維到達(dá)神經(jīng)垂體,在神經(jīng)垂體釋放AVP。我們前期研究表明PVN在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)、腎血管性高血壓大鼠和肥胖性高血壓大鼠的交感神經(jīng)過度激活和血壓升高中起了很重要的作用。生物活性肽Apelin是孤兒G蛋白偶聯(lián)受體(APJ)內(nèi)源性配體,Apelin有多種亞型,其中Apelin-13生物活性最高。Apelin和APJ受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織均有表達(dá)。在外周,Apelin主要通過與APJ受體結(jié)合參與調(diào)節(jié)機(jī)體心血管功能、體液平衡、攝食、細(xì)胞增殖和血管生成等,但PVN中Apelin是否通過APJ受體參與對血壓的調(diào)控尚不明確。本研究采用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR),探討高血壓時Apelin-13異常變化,并探討PVN中Apelin-13對血壓的作用以及探討Apelin-13調(diào)控大鼠血壓的神經(jīng)機(jī)制。目的1.探討自發(fā)性高血壓大鼠PVN中Apelin-13和APJ受體表達(dá)。2.探討自發(fā)性高血壓大鼠PVN中Apelin-13對血壓的作用。3.探討Apelin-13是否通過影響交感神經(jīng)活動和AVP釋放引起血壓升高。4.探討正常血壓大鼠PVN持續(xù)灌注Apelin-13對平均動脈壓(MAP)、腎交感神經(jīng)活動(RSNA)、血漿去甲腎上腺素(NE)和AVP水平的影響。方法實驗在13周齡的雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和Wistar-kyoto大鼠(WKY)上進(jìn)行(由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供)。自然晝夜節(jié)律光照,自由攝食和飲水。大鼠清醒狀態(tài)下采用Powerlab尾動脈測壓系統(tǒng)測量尾動脈收縮壓。急性實驗在麻醉大鼠上進(jìn)行,采用立體定位儀進(jìn)行大鼠雙側(cè)PVN核團(tuán)微量注射藥物。單側(cè)PVN應(yīng)用滲透泵持續(xù)灌注藥物。利用Powerlab生物信號采集系統(tǒng)在體記錄腎交感神經(jīng)放電活動(RSNA)、平均動脈壓(MAP)和心率(HR)。用real-time PCR (RT-PCR)法檢測PVN中Apelin-13和APJmRNA含量。用蛋白質(zhì)免疫分析技術(shù)(Western blotting)檢測PVN中Apelin和APJ受體蛋白表達(dá)。用RT-PCR法檢測心肌組織中心房鈉尿肽(ANP)和p-肌球重鏈(p-MHC)mRNA含量。用酶聯(lián)免疫吸測定法(ELISA)檢測血漿AVP和NE水平。結(jié)果1.與WKY大鼠相比,SHR左心室重量(left ventricular weight, LVW)、左室重量/體重之比(ratio of LVW to body weight)、收縮壓(systolic blood pressure, SBP)以及平均動脈壓(mean arterial pressure, MAP)均顯著升高,但體重和心率無明顯差異。2.與WKY大鼠相比,SHR的PVN中Apelin-13和APJmRNA以及蛋白含量明顯增加。3.SHR和WKY大鼠PVN微量注射Apelin-13均可劑量依賴性增強(qiáng)RSNA和升高M(jìn)AP,且SHR的RSNA和MAP增加效應(yīng)更明顯。PVN微量注射Apelin-13拮抗劑F13A可降低SHR的RSNA和MAP,但對WKY大鼠的RSNA和MAP無明顯影響。4.SHR和WKY大鼠PVN微量注射F13A預(yù)處理可阻斷Apelin-13增加RSNA和MAP作用,而PVN應(yīng)用losartan預(yù)處理對PVN微量注射Apelin-13誘導(dǎo)的效應(yīng)無顯著影響。5.靜脈注射AAVP、HEX、AAVP+HEX均顯著降低SHR基礎(chǔ)RSNA和MAP,靜脈注射losartan可明顯降低SHR基礎(chǔ)MAP,但對SHR基礎(chǔ)RSNA無顯著影響。6.靜脈單獨注射AAVP或HEX預(yù)處理均減弱PVN注射Apelin-13增加RSNA和升高M(jìn)AP的效應(yīng),且HEX對PVN應(yīng)用Apelin-13誘導(dǎo)效應(yīng)的抑制作用更明顯,AAVP+HEX則完全消除Apelin-13的作用。靜脈注射losartan預(yù)處理對PVN應(yīng)用Apelin-13引起的效應(yīng)無明顯影響。7.SHR血漿中NE和AVP水平顯著升高,SHR和WKY大鼠PVN微量注射Apelin-13均可升高NE和AVP水平,PVN微量注射F13A僅顯著降低SHR血漿NE和AVP水平。8.WKY大鼠PVN中長期灌注Apelin-13可導(dǎo)致清醒大鼠血壓持續(xù)升高,血漿NE和AVP水平升高,心肌組織ANP和β-MHC mRNA表達(dá)增多,但對心率、LVW和左室體重比無明顯影響。結(jié)論1.SHR的PVN中上調(diào)的Apelin-13和APJ受體參與高血壓形成。2.APJ受體而不是AT1受體介導(dǎo)Apelin-13升高血壓效應(yīng)。3.PVN中Apelin-13通過增強(qiáng)交感神經(jīng)活動和促AVP釋放參與SHR高血壓形成。4.正常大鼠PVN中長期注射Apelin-13可升高清醒大鼠血壓。第二部分室旁核NMDA和非NMDA受體介導(dǎo)Apelin-13的交感神經(jīng)激活效應(yīng)背景我們前期的研究表明室旁核(PVN)中Apelin-13和APJ受體活動增強(qiáng)在自發(fā)性高血壓大鼠血壓升高中起了很重要的作用。Apelin-13和APJ受體可通過增強(qiáng)交感神經(jīng)活動和促精氨酸加壓素釋放的雙重作用從而引起高血壓大鼠血壓的升高。既往研究發(fā)現(xiàn)清醒或麻醉大鼠的PVN注射谷氨酸或N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)均可增強(qiáng)腎交感神經(jīng)活動和升高血壓。PVN中NMDA受體和非NMDA型受體都參與正常大鼠交感神經(jīng)活動和血壓的緊張性調(diào)控,而且NMDA受體所起作用更大。PVN中有兩條谷氨酸能升壓通路：一條是由NMDA受體介導(dǎo)的交感神經(jīng)通路,另一條是由非NMDA型受體介導(dǎo)的血管加壓素能通路。但是,PVN中NMDA受體和非NMDA型受體是否介導(dǎo)了Apelin-13增強(qiáng)交感神經(jīng)活動和升高血壓效應(yīng)尚不明確。本研究旨在確定離子型谷氨酸受體是否介導(dǎo)了PVN中Apelin-13的生物學(xué)效應(yīng)。目的1.探討NMDA或非NMDA型受體是否介導(dǎo)Apelin-13交感神經(jīng)激活效應(yīng)。方法實驗選取13周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和Wistar-kyoto大鼠(WKY)(由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供)。自然晝夜節(jié)律光照,自由攝食和飲水。大鼠清醒狀態(tài)下采用Powerlab尾動脈測壓系統(tǒng)測量尾動脈收縮壓。急性實驗在麻醉大鼠上進(jìn)行,采用立體定位儀進(jìn)行大鼠雙側(cè)PVN定位核團(tuán)微量注射藥物, 利用Powerlab生物信號采集系統(tǒng)在體記錄腎交感神經(jīng)放電活動(RSNA)、平均動脈壓(MAP)和心率(HR)。用酶聯(lián)免疫吸測定法(ELISA)檢測血漿AVP水平。結(jié)果1.PVN微量注射AP5、CNQX或AP5+CNQX均可降低SHR基礎(chǔ)RSNA和MAP。2.與PVN微量注射生理鹽水預(yù)處理相比,AP5、CNQX或AP5+CNQX預(yù)處理可顯著抑制Apelin-13增強(qiáng)RSNA和升高血壓的作用,且抑制RSNA變化更明顯。3.PVN微量注射AP5、CNQX或AP+CNQX預(yù)處理對Apelin-13促AVP釋放的效應(yīng)均無明顯影響。結(jié)論1. NMDA和非NMDA型受體均參與了Apelin-13調(diào)控RSNA和血壓效應(yīng)。Apelin-13促AVP釋放的效應(yīng)與NMDA和非NMDA型受體無關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2507749