發(fā)布時(shí)間：2019-06-03 09:14

【摘要】：一直以來，人們對胃腸道的研究多集中在營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收方面，隨著基礎(chǔ)及臨床研究的不斷深入，胃腸道黏膜屏障功能越來越受到重視。腸黏膜屏障功能的穩(wěn)定直接影響消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，并且腸黏膜屏障在抵御內(nèi)外致病因素侵入機(jī)體方面顯示了重要作用。腸黏膜屏障由上皮細(xì)胞緊密連接、分泌的黏液、腸道常駐菌群及腸道分泌型抗體、相關(guān)性淋巴樣組織等構(gòu)成。其中黏蛋白(Mucin, MUC)是一種高分子質(zhì)量的糖蛋白, MUC2由結(jié)腸、小腸等的杯狀細(xì)胞分泌，也被叫做腸黏蛋白，是正常腸道黏液的主要組成部分，在一定狀態(tài)下黏性很高。MUC3是跨膜黏蛋白，主要在小腸、結(jié)腸絨毛上皮細(xì)胞中表達(dá), MUC5AC主要在胃黏膜上皮細(xì)胞表達(dá)，而在一些病理情況下如炎性腸病、腫瘤等，也可表達(dá)于腸黏膜。黏蛋白可以潤滑腸道，在腸黏膜形成保護(hù)性屏障，黏附致病性因子，在細(xì)胞間信號傳導(dǎo)及抗原呈遞過程中也發(fā)揮一定作用，保護(hù)腸上皮。腸三葉因子(TFF3)在腸道中廣泛存在，可與黏蛋白共同組成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，保護(hù)黏膜，抵御機(jī)械及化學(xué)損傷，也可以驅(qū)動(dòng)上皮細(xì)胞遷移，修復(fù)損傷，保持腸黏膜完整。黏蛋白和三葉因子在腸道黏膜屏障中都發(fā)揮了積極作用。腸道內(nèi)的常駐菌群為腸道形成了一道生物屏障，可以防止致病菌侵襲，使得腸道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境平衡穩(wěn)定。腸黏膜T淋巴細(xì)胞及分泌型抗體如sIgA，可以通過免疫反應(yīng)抑制、排除致病因子，中和毒素，通過其免疫屏障作用保護(hù)黏膜功能。腸黏膜各屏障之間相互協(xié)調(diào)，相互依賴，形成統(tǒng)一的屏障體系保護(hù)機(jī)體，抵御各種致病因素。中醫(yī)學(xué)理論中脾為后天之本，脾自身具有重要的生理作用，又能為其他臟腑及營衛(wèi)運(yùn)行提供物質(zhì)基礎(chǔ)，保衛(wèi)機(jī)體健康。脾的功能直接影響機(jī)體防御疾病的能力，因此有脾主為衛(wèi)，脾虛則百病內(nèi)生之說。 腸黏膜屏障作為胃腸的防御機(jī)制，與中醫(yī)“脾為之衛(wèi)”具有相同的病理生理基礎(chǔ)。本研究在“脾為之衛(wèi)”理論基礎(chǔ)上，從不同角度觀察脾虛大鼠腸黏膜屏障功能的變化，及益氣健脾中藥中經(jīng)典方劑四君子湯對其作用，進(jìn)而探討脾虛對腸道黏膜屏障功能的影響及中藥的防治作用。 第一部分脾虛大鼠腸黏膜變化及四君子湯對其影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：分析脾虛與腸黏膜屏障功能改變之間的相關(guān)性，觀察脾虛大鼠腸黏膜病理學(xué)變化情況及益氣健脾中藥對其影響。 材料與方法：SPF級2-3月齡SD大鼠共48只，隨機(jī)分成4組，分別為正常對照組、脾虛模型組、自然復(fù)健組和四君子湯組，在造模期間采用標(biāo)準(zhǔn)固體飼料喂飼各組大鼠,對各脾虛模型組進(jìn)行復(fù)合因素造模，同時(shí)，等量生理鹽水灌飼正常對照組大鼠，造模時(shí)間共計(jì)7周。采用勞倦過度、飲食不節(jié)與藥物損傷相結(jié)合的方法建立脾虛模型，在模型組造模成功的基礎(chǔ)上施加中藥治療，符合納入標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物取材備檢。腹主動(dòng)脈取血后處死大鼠，取腸黏膜組織經(jīng)常規(guī)脫水、包埋、染色，制作切片。懫用光鏡觀察各組大鼠腸黏膜病理學(xué)改變。 結(jié)果：400x光鏡下觀察，正常對照組大鼠腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，紋理清晰,無炎性反應(yīng)及損傷；脾虛模型組腸黏膜缺損，固有層、黏膜下層血管擴(kuò)張充血、出血，黏膜下層為漿細(xì)胞浸潤。自然復(fù)健組腸黏膜缺損，炎細(xì)胞浸潤，血管擴(kuò)張充血；黏膜下層水腫，血管擴(kuò)張充血，炎細(xì)胞浸潤。四君子湯組大鼠腸黏膜厚度基本恢復(fù)正常,腺體排列較整齊。 結(jié)論： 采用勞倦過度、飲食不節(jié)與藥物損傷相結(jié)合的方法可誘導(dǎo)脾虛大鼠模型，脾虛狀態(tài)下，腸黏膜結(jié)構(gòu)完整性破壞，而益氣健脾中藥湯劑四君子湯能夠修復(fù)腸黏膜基本結(jié)構(gòu)。 第二部分脾虛大鼠腸黏膜黏蛋白（MUC2，MUC3，MUC5AC）及三葉因子(TFF3)變化及四君子湯對其影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察脾虛大鼠腸黏膜黏蛋白、三葉肽因子的變化，并觀察中藥方劑四君子湯對其影響，從腸黏膜機(jī)械、化學(xué)屏障功能變化等角度，，探討脾虛證“脾為之衛(wèi)”作用的發(fā)生機(jī)制。 材料與方法：同第一部分處理大鼠，取回腸及結(jié)腸黏膜組織分別采用Western-Blot法及免疫組化方法檢測正常對照組及脾虛模型各組大鼠腸黏膜黏蛋白(MUC2，MUC3，MUC5AC)及三葉肽因子蛋白表達(dá)的變化， RT-PCR法檢測大鼠腸黏膜黏蛋白(MUC2，MUC3，MUC5AC)mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸組織中MUC2，MUC3蛋白表達(dá)均有降低(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜組織中MUC2，MUC3蛋白表達(dá)較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。 與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸黏膜組織中MUC2mRNA表達(dá)降低(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜組織中MUC2mRNA表達(dá)較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸組織中MUC5AC蛋白及mRNA均有表達(dá)，經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜組織中MUC5AC蛋白及mRNA表達(dá)較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。 與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸黏膜組織中TFF3蛋白表達(dá)均有降低(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜組織中TFF3蛋白表達(dá)較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸黏膜組織中TFF3mRNA表達(dá)均有降低(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜組織中TFF3mRNA表達(dá)較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.脾虛狀態(tài)下，腸黏膜分泌黏蛋白(MUC2，MUC3)減少，經(jīng)益氣健脾中藥湯劑四君子湯治療后，黏蛋白分泌增加，提示四君子湯可能修復(fù)大鼠腸黏膜機(jī)械、化學(xué)屏障。 2.脾虛可引起TFF3分泌減少，經(jīng)四君子湯治療后，TFF3分泌增加，提示四君子湯對大鼠腸黏膜屏障的修復(fù)作用。 第三部分脾虛大鼠血清內(nèi)毒素變化及四君子湯對其影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察大鼠血清內(nèi)毒素的變化及益氣健脾中藥對其影響。從內(nèi)毒素與腸黏膜生物屏障功能變化角度，探討脾虛證病理狀態(tài)對機(jī)體生物屏障影響。 材料與方法：將大鼠麻醉后，采集腹主動(dòng)脈全血2ml，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）雙抗體夾心法對第一部分中各組大鼠血清中內(nèi)毒素含量進(jìn)行檢測，于450nm處檢測各孔吸光度（OD）值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線及方程，計(jì)算結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組血清中內(nèi)毒素含量均有升高(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組血清內(nèi)毒素含量較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。 結(jié)論： 脾虛時(shí)腸黏膜生物屏障受到損傷，導(dǎo)致腸道細(xì)菌和內(nèi)毒素易位，四君子湯能改善內(nèi)毒素血癥，修復(fù)腸黏膜生物屏障。 第四部分脾虛大鼠腸黏膜分泌型免疫球蛋白A（sIgA）,T淋巴細(xì)胞（CD3）變化及四君子湯對其影響的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察大鼠腸黏膜CD3陽性T淋巴細(xì)胞及sIgA的變化及中藥對其影響，從腸黏膜免疫屏障功能變化角度出發(fā)，研究脾虛狀態(tài)下腸黏膜免疫屏障變化，探討脾虛對機(jī)體免疫功能的影響。 材料與方法：刮取大鼠回腸黏膜組織，收集于試管中,加入PBS溶解，離心后采用ELISA法檢測各組大鼠腸黏膜sIgA變化；用流式細(xì)胞儀檢測各組大鼠腸黏膜中CD3陽性T淋巴細(xì)胞百分比的變化。 結(jié)果：與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸黏膜sIgA含量均有下降(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜sIgA含量較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。與正常對照組比較，脾虛模型組、自然復(fù)健組及四君子湯組腸黏膜中CD3陽性T細(xì)胞百分比均有下降(P＜0.01），經(jīng)四君子湯治療性給藥，四君子湯組腸黏膜中CD3陽性T細(xì)胞百分比較脾虛模型組及自然復(fù)健組有所增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論： 脾虛時(shí)sIgA分泌及CD3表達(dá)減少，局部黏膜免疫功能下降，四君子湯可有效提高大鼠黏膜免疫功能，減少腸黏膜屏障損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R285.5

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 劉海濤;補(bǔ)中益氣湯經(jīng)腸道SGLT1/NHE3調(diào)控作用治療脾虛泄瀉證的機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2017年

2 胡宇聲;苦參露對脂多糖誘導(dǎo)大鼠小腸炎癥的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 李瓊超;基于食物過敏的傣藥“雅解沙把”解“食物毒”作用機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

4 楊斯琴;抑菌蒙藥復(fù)方篩選及其對腸黏膜屏障的作用機(jī)制研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 馬賢德;脾虛模型小鼠對白色念珠菌易感性的細(xì)胞免疫機(jī)制研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 時(shí)玉霞;四君子湯多糖對IEC-6細(xì)胞遷移Ca~(2+)調(diào)節(jié)相關(guān)指標(biāo)的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 譚婉賢;復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊對5-FU誘導(dǎo)小鼠腸黏膜炎保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2018年

3 孫鵬鵬;硼對雛鴕鳥腸管生長發(fā)育、黏膜免疫及Notch1/Jagged1/Hes-1信號通路的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 趙娜妹;從痰飲探討健脾益肺化痰方對COPD模型大鼠氣道黏液高分泌的作用機(jī)制[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

本文編號：2491829