【摘要】：目的TRPM8是一種屬于TRP（transient receptor potential）瞬時(shí)受體電位蛋白家族的溫度覺非選擇性陽(yáng)離子通道，具有較高的Ca+通透性，薄荷醇、Iclin是其高效激動(dòng)劑，也可以被冷刺激（8-28℃）、PIP2等激活，研究表明，在CCI神經(jīng)病理性疼痛動(dòng)物模型中神經(jīng)損傷同側(cè)背根神經(jīng)節(jié)（DRG）TRPM8的蛋白表達(dá)顯著增多，與冷痛覺敏化變化一致， TRPM8參與神經(jīng)病理性疼痛痛覺敏化的形成與維持。已經(jīng)證實(shí)，降低皮膚溫度及外用薄荷醇可以減輕皮膚瘙癢臨床癥狀，同時(shí)有學(xué)者報(bào)道薄荷醇及Iclin可緩解實(shí)驗(yàn)性或疾病相關(guān)的瘙癢，提示TRPM8可能有中樞性抗瘙癢作用。本研究旨在評(píng)估神經(jīng)病理性疼痛是否抑制瘙癢神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)減少搔抓行發(fā)作，并探討TRPM8在其中的作用。 方法KM雄性小鼠,20-30g,實(shí)驗(yàn)采用坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷的方法制備神經(jīng)病理性痛模型（SNI）和氯喹（CQ）皮下注射誘導(dǎo)瘙癢模型。第一階段觀察SNI病理性疼痛對(duì)瘙癢影響及建立疼痛瘙癢共病模型，分為6組：神經(jīng)病理性疼痛組（SNI）、假手術(shù)組（Sham）、瘙癢組（CQ）、瘙癢溶媒組（NS）、疼痛瘙癢共病組（SQ）及空白對(duì)照組（CON）。SNI組及SQ組通過暴露分離小鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)和其3個(gè)末端分支：腓腸神經(jīng)、腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)，結(jié)扎并切斷腓總神經(jīng)和脛神經(jīng)，建立神經(jīng)病理性疼痛模型， Sham組只暴露分離神經(jīng)不進(jìn)行損傷神經(jīng)操作。CQ予以小鼠頸背部皮下注射200ug/50ul氯喹。SQ組是建立SNI疼痛模型后第五日頸背部注射等劑量容積的氯喹。NS組在小鼠頸背部皮下注射50ul生理鹽水對(duì)照。CON組是不進(jìn)行任何操作。第二階段分為疼痛瘙癢共病模型+AMTB（SQ-A）組和疼痛瘙癢共病模型+AMTB溶媒對(duì)照組（SQ-V）。-A組行腰段鞘內(nèi)注射TRPM8特異性阻斷劑AMTB30ug/kg，-V組行腰段鞘內(nèi)注射TRPM8特異性阻斷劑AMTB溶媒（3.2%DMSO+生理鹽水）。SNI、Sham、SQ組在術(shù)前1天，術(shù)后1天、3天及5天觀察左后足機(jī)械痛縮足反射閾值（MWT）、冷板抬足次數(shù)和時(shí)間及熱板縮足反射潛伏期(PWL)的變化，CON組每間隔一天測(cè)定疼痛行為學(xué)變化。 CQ、NS、SQ組脫毛后，在分別注射氯喹或生理鹽水后觀察30分鐘內(nèi)定向注射點(diǎn)搔抓發(fā)作潛伏期和搔抓發(fā)作次數(shù)，CON組觀察30分鐘內(nèi)對(duì)脫毛處的搔抓次數(shù)。第二階段疼痛模型建立第5天分別鞘注AMTB及溶媒前后測(cè)定疼痛行為學(xué)，然后注射氯喹和生理鹽水，觀察搔抓發(fā)作潛伏期及30分鐘內(nèi)的搔抓次數(shù)。觀測(cè)動(dòng)物行為學(xué)后，CON組、Sham組、SNI組、SQ組、SQ-A組及SQ-V組每組隨機(jī)取6只小鼠麻醉后取左側(cè)L4-6背根神經(jīng)節(jié)（DRG），采用Western blotting方法測(cè)定TRPM8的蛋白表達(dá)水平。CON組、NS組、CQ組、SQ組、SQ-A組及SQ-V組隨機(jī)取6只小鼠麻醉后快速取頸部脊髓采用Westernblotting方法測(cè)定GRPR的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果疼痛行為學(xué)：SNI組及SQ組在術(shù)后第1天冷痛抬足次數(shù)及時(shí)間明顯增加，冷痛閾值變化在第三天最顯著，MWT也在術(shù)后1天降低，并在第5天達(dá)較低值，而PWL僅在術(shù)后1天下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05或P0.001）。SNI組及SQ組較Sham組及CON組同一時(shí)間點(diǎn)MWT、冷痛閾值明顯降低（P0.001），PWL組間無明顯差異(P0.05)。SQ-A組較SQ-V組鞘注后冷痛閾值顯著降低，MWT升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01或P0.001)，兩組PWL變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。瘙癢行為學(xué)：與NS組及CON組相比，CQ組定向搔抓次數(shù)顯著增多，搔抓潛伏期縮短，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)，SQ組搔抓次數(shù)明顯低于CQ組(P0.05)，但搔抓潛伏期無差異(P0.05)。SQ-A組搔抓次數(shù)顯著高于SQ-V組（P0.05），但搔抓潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P0.05)。蛋白表達(dá)：SNI組、SQ組及SQ-V組術(shù)側(cè)L4-6背根神經(jīng)節(jié)TRPM8表達(dá)水平較CON組、Sham組及SQ-A組增加，而GRPR在CQ組及SQ-A組頸部脊髓的表達(dá)增多。 結(jié)論神經(jīng)病理性疼痛在瘙癢疼痛共病中能夠抑制瘙癢神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)，，延遲并減少了瘙癢行為學(xué)的發(fā)作，其機(jī)制可能與在SNI神經(jīng)病理性疼痛模型鼠的背根神經(jīng)節(jié)TRPM8受體表達(dá)上調(diào)有關(guān)，TRPM8受體特異性阻斷劑AMTB可減輕痛覺敏化行為及及增加搔抓次數(shù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2458863