【摘要】：目的：觀察芎芍膠囊對動脈粥樣硬化(AS)兔血管壁AS形成的影響,從促進(jìn)主動脈膽固醇跨膜轉(zhuǎn)運、肝臟膽固醇代謝影響膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(RCT)過程,抑制炎癥反應(yīng)及保護高密度脂蛋白(HDL)抗炎作用等方面探討活血化瘀中藥抗AS的新機制。 實驗方法和結(jié)果：60只新西蘭兔隨機分為6組：空白對照組,模型組,芎芍小、中、大劑量組,辛伐他汀組。采用單純高脂喂養(yǎng)法復(fù)制兔AS模型,分別在給藥前,給藥6周、12周及15周末4個時間點經(jīng)耳緣靜脈采血,15周末麻醉后處死動物,取胸主動脈及肝臟。肉眼觀察大體標(biāo)本各組兔脂紋、脂斑情況,HE染色觀察各組兔AS斑塊形成情況,油紅O染色觀察各組兔動脈壁脂質(zhì)沉積情況；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清白介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、髓過氧化物酶(MPO)、對氧磷酶1(PON1)水平,測定動脈血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)水平,肝臟細(xì)胞內(nèi)肝X受體α(LXRα)水平；凝膠遷移實驗(EMSA)測定核因子·-κB (NF-κB)p65活性；蛋白印跡法(WB)測定主動脈壁內(nèi)小凹蛋白-1(cav-1)、親環(huán)素A表達(dá)量,肝臟B類Ⅰ型清道夫受體(SB-B Ⅰ)表達(dá)量；實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time PCR)測定主動脈壁cav-lmRNA、親環(huán)素A mRNA、NF-κB mRNA表達(dá)量,肝臟SR-BI mRNA, LXRαmRNA表達(dá)量結(jié)果顯示：空白對照組兔主動脈管壁表面光滑,內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)完整,無脂質(zhì)沉積；模 型組兔主動脈管壁滿布脂質(zhì)斑塊,平滑肌層細(xì)胞內(nèi)見大量脂質(zhì)沉積；芎芍小、中、大劑量組隨用藥劑量增加,管壁表面脂紋逐漸減少,顯微鏡下見形成斑塊逐漸減少,管壁細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積減少；其中芎芍大劑量組與辛伐他汀組在大體標(biāo)本及HE染色、油紅O染色結(jié)果上無明顯差異。15周末模型組兔平滑肌細(xì)胞內(nèi)TC較空白對照組明顯升高(P=0.006,P0.01),FC呈現(xiàn)相同的趨勢(模型組與空白對照組比P=0.008,P0.01)。芎芍中劑量組較模型組細(xì)胞內(nèi)TC明顯減少(P=0.035,P0.05),芎芍大劑量降低效果更加明顯(P=0.004,P0.01)。芎芍小劑量組較模型組FC明顯減少(P=0.024,P0.05),芎芍中、大劑量組(P=0.001,P0.01)及辛伐他汀組FC水平降低更明顯(P=0.006,P0.01),模型組兔cav-1表達(dá)量明顯下降(P=0.001,P0.01),芎芍中、大劑量組較模型組表達(dá)增加(P=0.0220.05,P=0.0020.01),辛伐他汀組及芎芍小劑量組與模型組相比cav-1表達(dá)也有增加趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.063,P=0.179)。模型組兔親環(huán)素A表達(dá)量較對照組增加(P=0.013,P0.05),芎芍中、大劑量組及辛伐他汀組較模型組親環(huán)素A表達(dá)減少(P=0.0170.05,P=0.006,0.0000.01)。與對照組相比,模型組兔明顯下降(P=0.001,P0.01),辛伐他汀組及芎芍大劑量組較模型組增加cav-lmRNA(P=0.014,P0.05；P=0.001,P0.01)。模型組兔親環(huán)素表達(dá)量與對照組相比AmRNA有下降趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.884,P0.05)；芎芍大劑量組及辛伐他汀組與模型組相比明顯增加(P=0.003,P=0.0040.01),余治療組較模型組無明顯差異。肝細(xì)胞測定結(jié)果顯示,模型組兔LXRα表達(dá)量較空白對照組下降(P=0.798,P0.05),但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。芎芍大劑量組較模型組表達(dá)增加(P=0.005,P0.01),余治療組與模型組相比表達(dá)有增加趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義。模型組LXRamRNA較空白對照組表達(dá)量明顯增加(P=0.000,P0.01),各治療組較模型組無明顯差異(P0.05),模型組與空白對照組兔相比肝臟SR-BI蛋白表達(dá)量有減少趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.281,P0.05),而芎芍膠囊各治療組較模型組SR-B Ⅰ蛋白表達(dá)量有增多趨勢,無統(tǒng)計學(xué)差異。辛伐他汀組兔與模型組相比,SR-BI蛋白表達(dá)量增多明顯(P=0.049,P0.05),其與芎芍大劑量組相比表達(dá)量無明顯差異。模型組兔SR-BI基因表達(dá)量較空白對照組明顯增加(P=0.021,P0.05)。各給藥組與模型組相比,基因轉(zhuǎn)錄水平無明顯增多(P0.05)。芎芍中劑量組、大劑量組及辛伐他汀組兔SR-BI基因轉(zhuǎn)錄水平有升高趨勢,且大劑量組較中劑量組更加明顯。 炎癥因子方面,對4個不同時間點的測量結(jié)果顯示,造模及給藥時間長短、不同治療方法均對各組兔IL-2、TNF-α水平產(chǎn)生影響。模型組與空白對照組相比IL-2水平增加,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.790,P0.05),與模型組相比,芎芍中、大劑量組及辛伐他汀組兔血漿IL-2水平均明顯降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.0040.01,P=0.026,P=0.013,P0.05)。模型組兔TNF-α水平較空白對照組升高,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.120,P0.05),芎芍中、大劑量組及辛伐他汀組較模型組兔TNF-α水平明顯降低(P=0.032,P=0.013,P=0.049,P0.05)。模型組比空白對照組兔主動脈NF-κBp65表達(dá)量增多,但并無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.169,P0.05),各給藥組與模型組相比蛋白表達(dá)量減少,其中芎芍大劑量組(P=0.035,P0.05),辛伐他汀組(P=0.001,P0.01)與模型組相比下降更明顯。模型組NF-κBmRNA表達(dá)量與空白對照組相比略有減少,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.893,P0.05),芎芍大劑量組表達(dá)量較模型組增加(P=0.031,P0.05),各給藥組基因表達(dá)量與空白對照組無明顯差異(P0.05)。各治療組兔PON1水平無明顯差異(P0.05),模型組兔與空白對照組兔血漿PON1亦無差異(P=0.697,P0.05)。模型組兔血漿MPO水平與空白對照組相比明顯升高(P=0.025,P0.05),芎芍中劑量組及大劑量組、辛伐他汀組較模型組血漿MPO水平明顯下降(P=0.028,P=0.013,P0.05；P=0.004,P0.01),芎芍中、大劑量組與辛伐他汀組間比較無差異護0.05)。 結(jié)論： 1.芎芍膠囊能夠抑制AS兔主動脈斑塊形成,減少動脈壁細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積。 2.芎芍膠囊能夠通過保護AS兔主動脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)cav-1蛋白表達(dá),增加主動脈細(xì)胞內(nèi)膽固醇跨膜轉(zhuǎn)運促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,從而減少主動脈細(xì)胞內(nèi)TC及FC含量,起到抗AS作用。 3.芎芍膠囊能夠促進(jìn)AS兔肝臟表達(dá)LXRα,促進(jìn)肝臟內(nèi)膽固醇代謝,推動RCT過程,其對SR-BI促進(jìn)作用不明顯。 4.芎芍膠囊能夠降低AS兔血漿IL-2、TNF-a水平,降低主動脈細(xì)胞核內(nèi)NF-κBp65的活性水平,抑制AS中的炎癥反應(yīng)。 5.芎芍膠囊能夠降低AS兔血漿中MPO水平,保護HDL抗炎功能,維持其正常運載脂質(zhì)的作用,其對血漿PON1水平作用不明顯。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2433174