【摘要】：隨著現(xiàn)代分子生物學、動物胚胎學和配子生物工程技術的發(fā)展，多種轉(zhuǎn)基因家畜已經(jīng)研制成功，在生物基礎研究、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護等領域已顯示了廣闊的應用前景。與此同時轉(zhuǎn)基因食品的安全與否也成為了社會各界關注的焦點問題。因此轉(zhuǎn)基因食品安全與否，對于轉(zhuǎn)基因技術的發(fā)展、轉(zhuǎn)基因食品的推廣以及解決全球的糧食短缺問題都具有重要意義。 本研究結(jié)合FDA/WHO發(fā)布的實質(zhì)等同原則、植物轉(zhuǎn)基因安全研究的先例和農(nóng)業(yè)部關于轉(zhuǎn)基因食品安全的國家標準及食品安全標準，從轉(zhuǎn)β防御素3基因牛奶營養(yǎng)成分分析，外源蛋白生物信息學分析和轉(zhuǎn)基因食品飼喂小鼠食用安全性實驗三方面入手，評價轉(zhuǎn)基因牛奶的食用安全性。本研究的實施為轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品的后期應用提供了一定的實驗和理論依據(jù)，為建立轉(zhuǎn)基因動物及其產(chǎn)品安全性檢測體系進行了初步的探索。 1.牛奶營養(yǎng)成分分析 本實驗以轉(zhuǎn)人β防御素3基因牛奶為實驗樣品，以普通牛奶作為對照，對比了兩種牛奶的基本營養(yǎng)成分（包括脂肪、總蛋白含量、乳糖含量、PH、非脂乳固體）、氨基酸、主要礦質(zhì)元素（包括Ca、Mg、P、K、Na、Fe、Zn、Se）、維生素（包括維生素A、維生系E、維生素C、維生素B1、維生素B2）的含量。實驗結(jié)果表明，，轉(zhuǎn)人β防御素3基因牛奶在營養(yǎng)成分方面與普通牛奶比較，其差異沒有統(tǒng)計學意義。 2.生物信息學分析 使用ExPASy網(wǎng)站中的Pepetide Mass、ProtParam tool和Portscale對人β防御素3進行蛋白的結(jié)構(gòu)和理化分析。使用SDAP和Farrp數(shù)據(jù)庫對人β防御素3與致敏性蛋白的同源序列對比；使用PDB和PHYRE數(shù)據(jù)庫進行三維結(jié)構(gòu)管比對，人β防御素3的致敏性。實驗結(jié)果：1)人β防御素3不是來自于公認的八類主要致敏原；2）理化性質(zhì)預測顯示人β防御素3是一種不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)；3）生物信息學分析顯示人β防御素3與數(shù)據(jù)庫中的致敏性蛋白沒有同源性序列，提示β防御素3不具有致敏性。 3.轉(zhuǎn)人β防御素基因牛奶小鼠經(jīng)口30天飼喂實驗 本實驗將小鼠分為三組，分別為灌胃飼喂轉(zhuǎn)人β防御素3基因牛奶組、普通牛奶組、空白對照組。各實驗組小鼠飼喂30天后，腹腔麻醉，經(jīng)心臟采血分別用于血液學常規(guī)檢查和生化指標檢測。采血后，取小鼠腦、心臟、肺臟、肝臟、脾臟、胃、大腸、小腸、腎臟等主要臟器組織制作切片后進行HE染色。實驗結(jié)果顯示，各實驗組血液學指標、血清生化指標無顯著差異，大體解剖和病理學檢查未見異常。
[Abstract]:With the development of modern molecular biology, animal embryology and gametes bioengineering, many kinds of transgenic livestock have been successfully developed, and have shown a broad application prospect in biological basic research, medicine, agriculture, environmental protection and other fields. At the same time, the safety of GM food has become the focus of attention. Therefore, the safety or not of genetically modified food is of great significance to the development of transgenic technology, the promotion of transgenic food and the solution of global food shortage. Based on the principle of substantial equivalence published by FDA/WHO, the precedent of plant transgenic safety research and the national standards and food safety standards of the Ministry of Agriculture on the safety of genetically modified foods, the nutritional composition of milk with 尾 -defensin 3 gene was analyzed. The food safety of transgenic milk was evaluated by bioinformatics analysis of exogenous protein and experiment of food safety of transgenic food feeding mice. The implementation of this study provides a certain experimental and theoretical basis for the later application of transgenic animal products, and provides a preliminary exploration for the establishment of a safety detection system for transgenic animals and their products. 1. Nutritional composition Analysis of Milk in this study, the basic nutritional components (including fat, total protein content, lactose content, PH,) of two kinds of milk were compared using human 尾 -defensin 3 gene milk as experimental sample and ordinary milk as control. Non-fat milk solid), amino acids, main mineral elements (including Ca,Mg,P,K,Na,Fe,Zn,Se), vitamins (including vitamin A, life line E, vitamin C, vitamin B1, vitamin B2). The results showed that there was no significant difference in nutritional composition of human 尾 -defensin 3 gene milk compared with that of common milk. 2. Bioinformatics analysis of human 尾-defensin 3 protein using Pepetide Mass,ProtParam tool and Portscale in ExPASy website. The homologous sequences of human 尾 -defensin 3 and sensitized protein were compared by using SDAP and Farrp databases, and the sensitivities of human 尾 -defensin 3 were obtained by using PDB and PHYRE databases for three-dimensional structural tube alignment. The results were as follows: 1) Human 尾 -defensin 3 was not derived from eight major allergens, 2) the physical and chemical properties predicted that human 尾 -defensin 3 was an unstable protein. 3) Bioinformatics analysis showed that human 尾 -defensin 3 had no homologous sequence with the sensitized protein in the database, suggesting that 尾 -defensin 3 was not sensitized. 3. The mice were divided into three groups: human 尾 -defensin 3 gene milk group, normal milk group and blank control group. After 30 days of feeding, the mice in each experimental group were anesthetized intraperitoneally, and blood was collected from the heart for routine hematological examination and biochemical index detection. After blood collection, the brain, heart, lung, liver, spleen, stomach, large intestine, small intestine, kidney and other main organs of the mice were taken for HE staining. The results showed that there were no significant differences in hematological and serum biochemical indexes among the experimental groups, and there were no abnormalities in gross anatomy and pathology.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：TS252.1

【共引文獻】

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本文編號：2399791