【摘要】：目的：通過(guò)靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，觀(guān)察其對(duì)重癥急性胰腺炎（severeacute pancreatitis，SAP）大鼠胰腺組織中核因子-κB（nuclear transcriptionfactor-κB，NF-κB）表達(dá)的影響，以及腫瘤壞死因子-α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）在血清中的含量變化，探討穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠SAP的治療作用及相關(guān)機(jī)制，為其在臨床SAP的廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：健康SD雌性大鼠30只，體重為200～250克，隨機(jī)分為三組：假手術(shù)組（sham-operation group，SO組），重癥急性胰腺炎模型組（severe acutepancreatitis model group，SAP組）、穿心蓮內(nèi)酯干預(yù)組（andrographolidetreatment group，AND組），每組10只，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前禁食12h，不禁水。腹腔注射1%的戊巴比妥鈉3ml/kg將大鼠麻醉充分后，SAP組和AND組采用3.5％�；悄懰徕c（0.1ml/100g）逆行胰膽管注射（注射速度為0.2ml/min）建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，SO組開(kāi)腹僅翻動(dòng)腸管后即關(guān)腹。造模成功后，AND組于模型制備成功后立即給予穿心蓮內(nèi)酯（5ug/g）尾靜脈注射。SAP組則采用相同方法給予同等劑量的生理鹽水尾靜脈注射。造模6h后采用下腔靜脈抽血，隨后處死各組大鼠。肉眼觀(guān)察并記錄各組大鼠胰腺組織大體形態(tài)、胰周及腹腔腹水情況；檢測(cè)各組大鼠血清淀粉酶（Amylase，AMY）水平；各組大鼠血清TNF-α的含量采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行測(cè)定；對(duì)HE染色后的各組大鼠胰腺組織進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分；兩步免疫組化法（PV法）測(cè)定各組大鼠NF-κB p65蛋白在胰腺組織的表達(dá)情況。所有實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）的格式表示，結(jié)果采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組樣本比較采用方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1、各組大鼠血清淀粉酶水平的變化：在造模后6h，SAP組與AND組血清淀粉酶水平則明顯升高，SO組血清淀粉酶值無(wú)明顯改變（P0.05），AND組血清淀粉酶水平較SAP組明顯降低（P0.05）。2、胰腺組織病理改變：（1）肉眼觀(guān)察：SO組解剖后，胰腺組織形態(tài)未見(jiàn)明顯異常改變，SAP組可見(jiàn)胰腺組織變灰白色，有明顯的充血水腫，局部可見(jiàn)暗紅色出血灶及灰褐色壞死灶，胰周可見(jiàn)皂化斑，并與周?chē)姓尺B，胃腸有脹氣，腹腔有血性腹水，這說(shuō)明牛黃膽酸鈉逆行胰膽管注射誘導(dǎo)的重癥急性胰腺炎大鼠模型成功建立。AND組解剖后，可見(jiàn)淡黃色腹水，胰腺組織也有充血水腫，未見(jiàn)明顯出血樣改變，胃腸有少許脹氣，偶可見(jiàn)胰周有少許皂化斑，與胰周無(wú)明顯粘連等改變，但與SAP組相比較，程度明顯減輕，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（2）光鏡下觀(guān)察：HE染色后，SO組大鼠胰腺組織在光鏡下可見(jiàn)其結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)充血水腫、壞死、出血等改變，胰腺間質(zhì)內(nèi)也未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、滲出等，而SAP組可見(jiàn)其正常的胰腺組織結(jié)構(gòu)被破壞，小葉結(jié)構(gòu)紊亂，葉間隔、小葉間隔增寬，腺泡腫脹，局部可見(jiàn)出血及壞死，間質(zhì)內(nèi)有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。AND組也可見(jiàn)葉間隔及小葉間隔有所增寬，胰腺腺泡細(xì)胞腫脹，有少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，但未見(jiàn)明顯的壞死及出血，胰腺組織病理改變較SAP組不同程度減輕。（3）胰腺組織病理學(xué)評(píng)分：SAP組與AND組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分均高于SO組（P0.05），AND組較SAP組低（P0.05）。3、ELISA法測(cè)定各組大鼠血清TNF-α的結(jié)果：SO組TNF-α水平無(wú)明顯改變，而SAP組與AND組較SO組明顯升高（P0.05），AND組與SAP組相比較血清TNF-α水平有所降低（P0.05）。4、各組大鼠胰腺組織NF-κB p65蛋白的表達(dá)：NF-κB p65在SO組大鼠胰腺組織中無(wú)明顯的陽(yáng)性表達(dá)，而在SAP組胰腺組織中具有高表達(dá)，細(xì)胞核為其陽(yáng)性表達(dá)的主要位置，同時(shí)在細(xì)胞質(zhì)中也有少許表達(dá)，棕黃色、深棕色為其陽(yáng)性表達(dá)染色，AND組及SAP組胰腺組織中NF-κB p65蛋白的表達(dá)較SO組明顯增多（P0.05），，但AND組與SAP組相比較，NF-κB p65蛋白的表達(dá)減弱，染色變淡（P0.05）。 結(jié)論：1、經(jīng)穿心蓮內(nèi)酯治療后，SAP大鼠胰腺組織的病理?yè)p傷減輕，血清淀粉酶也下降，對(duì)SAP具有治療作用。2、穿心蓮內(nèi)酯可以減少SAP大鼠促炎因子TNF-α的大量釋放。3、穿心蓮內(nèi)酯可以抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB p65的活化表達(dá)。4、穿心蓮內(nèi)酯能夠通過(guò)抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB的表達(dá)，減少促炎因子TNF-α的表達(dá)，從而達(dá)到治療SAP的作用，這可能為穿心蓮內(nèi)酯治療SAP的機(jī)制之一。
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【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R576

【參考文獻(xiàn)】

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1 覃林花;鄭智武;孔玲;呂礁;施云星;李永平;;穿心蓮內(nèi)酯對(duì)腫瘤壞死因子-α和白介素-12表達(dá)的抑制作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年07期

2 李明;陳偉強(qiáng);胡太平;張麗蓉;蔡尤彪;古宏標(biāo);;穿心蓮內(nèi)酯對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2010年04期

3 胡瀅;周詠梅;陳幼祥;;重癥急性胰腺炎動(dòng)物模型制作方法的研究進(jìn)展[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年09期

本文編號(hào)：2395957