【摘要】：背景： 多項大規(guī)模流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),適量飲酒可以有效預(yù)防動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)的發(fā)生,降低冠心病的(coronary heart disease, CHD)發(fā)病率和死亡率。近來研究發(fā)現(xiàn),主要是酒類飲品中的乙醇成份介導(dǎo)了飲酒對心血管系統(tǒng)的保護作用。 乙醛脫氫酶2(aldehyde dehydrogenase, ALDH2)是酒精代謝途徑中的關(guān)鍵酶,可以將乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸排出體外。近些年來,ALDH2新的生物學(xué)功能也逐漸被發(fā)現(xiàn)。我們課題組和國內(nèi)外多項研究證實突變型ALDH2基因是急性冠脈綜合征發(fā)病的獨立危險因素。一些國內(nèi)外研究初步探討了ALDH2參與AS進程的機制,多涉及其對機體HDL-C、炎癥因子及氧化應(yīng)激水平的整體調(diào)控。 我們前期研究發(fā)現(xiàn),適量乙醇可通過激活A(yù)LDH2進而增加人主動脈內(nèi)皮細胞eNOS的活性。eNOS來源的NO是重要的心血管保護因子,具有調(diào)節(jié)血流動力學(xué)、拮抗動脈粥樣硬化形成及進展的作用。然而,乙醇是否可通過ALDH2這一機制發(fā)揮抗AS的作用還需要進一步研究。 因此,我們提出以下假說：適量乙醇可通過增強ALDH2酶活性來影響動脈粥樣硬化的形成,可為防治AS疾病提供新靶點。 目的： 建立ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型,探討ALDH2是否參與乙醇拮抗動脈粥樣硬化斑塊形成的作用。 方法： 1.動物喂養(yǎng)與處理：6周齡ApoE基因敲除小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后進行高脂飲食喂養(yǎng),構(gòu)建動脈粥樣硬化斑塊模型,隨機分為生理鹽水組(NS組)、乙醇組(ETOH組)、乙醇+NC-siRNA組(ETOH+NC-siRNA組)、乙醇+ALDH2-siRNA組(ETOH+ALDH2-siRNA組)。乙醇按0.3g/kg腹腔內(nèi)注射,生理鹽水同比例注射,每天一次；通過小鼠尾靜脈注射小分子干擾RNA慢病毒,乙醇+NC-siRNA組注射陰性對照病毒懸液,乙醇+ALDH2-siRNA組注射ALDH2-siRNA病毒懸液,繼續(xù)高脂喂養(yǎng)16周。 2.超聲檢查：行體表主動脈根部超聲,測出主動脈根部斑塊面積。 3.一般檢查：取材前,用電子秤測量小鼠體重,從左心室抽取血液留取血清檢測小鼠膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。 4.組織學(xué)染色：預(yù)處理16周后,麻醉小鼠,取小鼠主動脈并固定后,將胸腹主動脈剝?nèi)ネ饽?進行大體油紅0染色；對主動脈根部進行冰凍切片后,行切片油紅染色及HE染色。 5.蛋白質(zhì)印跡：提取組織蛋白后,用western blotting的方法對目的蛋白ALDH2進行檢測,利用GADPH作為內(nèi)參進行定量分析。 6. ALDH2活性測定：用酶標板測定主動脈ALDH2活性。 7.統(tǒng)計學(xué)方法：各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(Mean±S. E.)表示,運用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。各獨立實驗至少重復(fù)3次。多個組之間的比較采用單因素方差檢驗(one-way ANOVA),采用SNK檢驗進行多組均數(shù)兩兩之間的比較。變量間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化模型。 2.一般檢查結(jié)果：乙醇干預(yù)或加小分子干擾RNA慢病毒處理對小鼠體重沒有明顯影響(P＞0.05)；與NS組相比,ETOH組HDL-C明顯升高(P＜0.05)；與ETOH組和ETOH+NC-siRNA組相比,ETOH+ALDH2-siRNA組HDL-C降低(P＜0.05)；乙醇干預(yù)或加小分子干擾RNA慢病毒處理對TC、TG及LDL-C水平無明顯影響,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 3.體表超聲顯示：與NS組相比,ETOH組斑塊明顯減少；與ETOH組和ETOH+NC-siRNA組相比,ETOH+ALDH2-siRNA組斑塊增多。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。 4.組織染色顯示：大體油紅0與主動脈根部切片油紅0染色結(jié)果一致,與NS組相比,ETOH組主動脈粥樣硬化斑塊的形成減少；與ETOH組和ETOH+NC-siRNA組相比,ETOH+ALDH2-siRNA組斑塊明顯增多。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。HE染色圖片可清楚顯示小鼠主動脈根部形成了明顯的動脈粥樣硬化斑塊。 5.ALDH2蛋白表達顯示：與NS組相比,ETOH組ALDH2蛋白表達增加；與ETOH組和ETOH+NC-siRNA組相比,ETOH+ALDH2-siRNA組ALDH2蛋白表達減少。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。 6. ALDH2的活性檢測顯示：與NS組相比, ETOH組ALDH2活性明顯增加；與ETOH組和ETOH+NC-siRNA組相比,ETOH+ALDH2-siRNA組ALDH2活性減低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。ALDH2活性與HDL-C濃度呈直線相關(guān)(r=0.675,P＜0.01)。 結(jié)論： 適量乙醇可以減少動脈粥樣硬化斑塊形成；乙醇可以上調(diào)ALDH2活性及表達；抑制ALDH2表達后,乙醇抗AS形成的保護作用明顯減弱,提示乙醇抵抗AS形成主要是通過激活A(yù)LDH2介導(dǎo)的。 背景： 隨著人們生活水平的提高,肥胖癥的發(fā)病率近年來在逐年增加。大量臨床流行病學(xué)資料結(jié)果顯示,肥胖患者發(fā)生高血壓、血脂異常、冠心病、糖尿病的危險性明顯增加,并且肥胖還是心功能不全的獨立危險因素。心肌重構(gòu)是指膠原代謝失調(diào)使膠原纖維在心肌細胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)中過量積聚,引起心肌纖維化,進而使心臟結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變。研究顯示,肥胖可以導(dǎo)致心室重構(gòu),進而使心功能受損。 過氧化物酶體增殖物激活型受體(Peroxisome proliferator-activated receptors,PPAR)是核激素受體超家族的新成員,PPAR α是其中的亞型之一,研究發(fā)現(xiàn),PPAR α活化后可以減輕壓力負荷過重引起的左室肥厚和心肌纖維化。PPAR α的激動劑非諾貝特(fenofibrate)現(xiàn)在應(yīng)用廣泛,關(guān)于非諾貝特對高血壓心肌重構(gòu)的影響已有相關(guān)研究,而對肥胖心肌重構(gòu)的影響報道較少。因此本實驗旨在運用超聲心動圖技術(shù)評價心臟結(jié)構(gòu)與功能,并結(jié)合組織學(xué)改變,來探討非諾貝特對肥胖大鼠心肌重構(gòu)的作用,從而為藥物干預(yù)心肌重構(gòu)提供新思路。 目的： 應(yīng)用超聲心動圖結(jié)合組織學(xué)改變來探討非諾貝特對肥胖大鼠心肌重構(gòu)的作用。 方法： 1.動物喂養(yǎng)與處理：高脂飲食喂養(yǎng)建立20只肥胖大鼠模型,隨機分為肥胖組(OB組,n=10)和非諾貝特組(F組,n=10),同周齡SD大鼠10只作為正常對照組(NC組)。F組以非諾貝特60mg·kg-1·d-1灌胃8周,其余組予以等量生理鹽水灌胃。 2.一般檢查：實驗期間,干預(yù)前后測量大鼠體質(zhì)量并留取數(shù)據(jù)；干預(yù)前后于頸靜脈竇抽血,留作血清學(xué)檢查。實驗?zāi)┨幩来笫?迅速取出心臟,剝?nèi)ビ沂易笥倚姆俊⒅車Y(jié)締組織后,用電子秤測量實際左室質(zhì)量。 3.超聲心動圖檢查：實驗前后,行超聲心動圖檢查,用M型超聲測量舒張末期左室后壁厚度、室間隔厚度及左室舒張、收縮末期內(nèi)徑,計算左室質(zhì)量(LVM)、射血分數(shù)(EF)及左室短軸縮短率(FS)。測量E、A峰血流速度,計算E/A值。 4.組織學(xué)染色：實驗?zāi)┨幩来笫?將大鼠心臟取出,于固定液固定后,對心臟進行石蠟切片,進行HE染色和Masson染色。 5.統(tǒng)計學(xué)方法：各組數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(Mean±S.E.)表示,運用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。各獨立實驗至少重復(fù)3次。對于多個組之間的比較,使用ANOVA檢驗,兩兩比較采用SNK檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.一般檢查結(jié)果：用藥前,OB組和F組體質(zhì)量及超聲測量的左室質(zhì)量較NC組增加(P＜0.01)。用藥后,F組與OB組相比,體質(zhì)量和左室質(zhì)量明顯降低(P＜0.01),超聲所測得的左室質(zhì)量與實體標本測量值呈正相關(guān)(r=0.98,P＜0.01)。血清學(xué)檢查顯示：用藥前,OB組和F組總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇等較NC組增加(P＜0.01),用藥后,F組與OB組相比,總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇及游離脂肪酸均降低(P＜0.01)。 2.超聲心動圖結(jié)果：用藥前,0B組和F組室壁厚度、室間隔厚度較NC組明顯增加,E峰、E/A值明顯減低,EF值明顯減低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。用藥后,F組與OB組相比,室壁厚度、室間隔厚度減低(P＜0.01),E峰、E/A值增加(P＜0.01),EF值增加(P＜0.05)。 3.組織學(xué)檢查結(jié)果：HE染色顯示,與NC組相比,OB組心肌細胞排列紊亂,細胞內(nèi)可見肌纖維斷裂；F組較OB組明顯好轉(zhuǎn),心肌細胞排列較規(guī)整,未見明顯的肌纖維斷裂。Masson染色顯示膠原纖維呈藍綠色,與NC組相比,OB組心肌間質(zhì)膠原纖維明顯增生,排列紊亂；F組較OB組心肌間質(zhì)膠原纖維明顯減少。 結(jié)論： 非諾貝特具有改善肥胖大鼠心肌重構(gòu)的作用,超聲心動圖能較全面評價此作用。
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【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R543.5

【參考文獻】

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1 徐丹令;孫愛軍;王時俊;付晗;賈劍國;王克強;鄒云增;葛均波;;乙醛脫氫酶2在大鼠心肌缺氧損傷中的抗凋亡作用[J];中國病理生理雜志;2006年04期

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本文編號：2393889