【摘要】：目的：建立一種去雙前肢直立大鼠腰椎間盤退變模型，使之與人類腰椎間盤突出癥發(fā)病機制相似，在成功的建立此模型的基礎(chǔ)上，觀察骨痹合劑干預(yù)去雙前肢直立誘導(dǎo)大鼠腰椎間盤退變模型的機制。方法：選用孕期15日齡的SD大鼠3只，分籠飼養(yǎng)，把出生第10天的20只幼鼠，隨機分為2組，分別為正常對照組和直立模型組。造模方法：按鹽酸氯氨酮0.1g／kg體重行肌肉注射麻醉，將幼鼠去雙前肢剪毛和清潔后，用碘伏消毒幼鼠上肢皮膚，取前臂近端1/3處橫向切開皮膚，剝離筋膜和肌肉，暴露三角肌下血管神經(jīng)束，并用絲線結(jié)扎，在結(jié)扎處遠端用咬骨鉗咬斷肱骨，再用剪刀剪斷皮膚、肌肉、血管和神經(jīng)，使上肢截斷。將鹽酸慶大霉素滴入切口后，再將肌肉、筋膜、皮膚逐層縫合，最后在切口處涂金霉素眼膏防止感染。手術(shù)后置于飼養(yǎng)籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)。在6月齡時處死兩組大鼠，取下兩組的腰椎，標(biāo)本通過固定、脫鈣、脫水、包埋、切片、展片、烤片，行HE+阿爾新蘭復(fù)染、甲苯胺藍及藏紅固綠染色和CollagenⅠ、CollagenⅩ、TNF-α免疫熒光檢測。評價模型是否成功。在評價模型成功的基礎(chǔ)上，選用孕期15日齡的SD大鼠12只，分籠飼養(yǎng)，把出生第10天的80只幼鼠，，隨機分為2組（6月齡組和9月齡組），每組40只，并全部去雙前肢（造模及喂養(yǎng)方法同前）。在大鼠5月齡時，將其中6月齡組隨機分成4組，每組10只，分別為空白對照組、生理鹽水組、骨痹合劑組、陽性藥物對照組，分別給藥干預(yù)1個月，空白對照組不給藥，生理鹽水組按1ml/100g灌胃，骨痹合劑組按骨痹合劑1ml/100g灌胃，陽性藥物對照組以氨糖美辛1ml/100g灌胃。每隔12小時各給藥一次，連續(xù)4周。在大鼠6月齡時，分別處死4組大鼠，取下腰椎，標(biāo)本通過固定、脫鈣、脫水、包埋、切片、展片、烤片，行HE+阿爾新蘭復(fù)染、甲苯胺藍染色、藏紅固綠染色和CollagenⅠ、CollagenⅩ、TNF-α免疫熒光檢測。9月齡組在8月齡時隨機分為4組（分組方法同6月齡組），給藥方法與6月齡組相同，均連續(xù)給藥4周。在大鼠9月齡時，分別處死4組大鼠，標(biāo)本的觀察和檢測方法同前。 結(jié)果：正常對照組的椎間盤結(jié)構(gòu)正常，髓核居中，纖維環(huán)包繞四周、排列層次清晰呈整齊完整的板層狀結(jié)構(gòu)，終板完整；鈣化層與非鈣化層兩層之間有潮標(biāo)分布；生長軟骨呈柱狀排列，緊貼椎體。直立模型組中椎間盤形態(tài)改變，髓核內(nèi)開始出現(xiàn)裂隙、髓核皺縮，纖維環(huán)內(nèi)層部分纖維扭曲、排列紊亂與髓核的界線模糊，椎體結(jié)構(gòu)有部分破壞，腰椎間盤軟骨細胞發(fā)生變性、壞死，軟骨終板出現(xiàn)鈣化、斷裂等組織形態(tài)學(xué)改變，椎間盤壓縮變低。免疫熒光檢測顯示：直立模型組CollagenⅠ、CollagenⅩ、TNF-α陽性細胞比例均較正常對照組高。進行藥物干預(yù)后，骨痹合劑組的椎間盤較其它三組比較，纖維環(huán)排列扭曲結(jié)構(gòu)尚完整，層次尚清晰。髓核皺縮程度輕，軟骨終版鈣化層、潮標(biāo)向軟骨表層椎進，有部分軟骨細胞染色不均勻，終板鈣化層與非鈣化層兩層之間有潮標(biāo)分布。免疫熒光檢測顯示：骨痹合劑組CollagenⅠ、CollagenⅩ、TNF-α陽性細胞比例較其它三組低。 結(jié)論：成功建立了去雙前肢直立誘導(dǎo)大鼠腰椎間盤退變模型，該模型制作簡便，可重復(fù)性好，與人類腰椎間盤突出癥的發(fā)病機制相似，可為進一步研究腰椎間盤突出癥的發(fā)病機制以及為開發(fā)其有效治療措施奠定基礎(chǔ)。骨痹合劑可延緩去雙前肢直立大鼠誘導(dǎo)腰椎間盤退變模型椎間盤退變過程，可能通過下調(diào)細胞外基質(zhì)CollagenⅠ、CollagenⅩ、TNF-α表達，延緩腰椎間盤的退變進程。
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【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R274.9

【參考文獻】

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本文編號：2345437