【摘要】：目的： 本課題在中醫(yī)針灸學(xué)“治未病”理論的指導(dǎo)下，從外周形態(tài)學(xué)、糖代謝和脂質(zhì)代謝水平，及中樞細(xì)胞因子水平，研究電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠血清FIN、 FBG、BW、FFA、TG、TC，和下丘腦PI3K信號(hào)通路相關(guān)分子的調(diào)節(jié)機(jī)制，進(jìn)一步探討和分析電針對(duì)胰島素抵抗模型大鼠的治療效應(yīng)。 方法： 選用清潔級(jí)雄性8周齡Wistar大鼠60只(由湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供，動(dòng)物許可證號(hào): SCXK鄂2008－005，體重180±20g，飼養(yǎng)于湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸研究所動(dòng)物飼養(yǎng)室,（溫度18~25℃，濕度45%~55%）。適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、預(yù)防組、“雙固一通”電針組（簡稱：電針組）、腦室灌注腦脊液組（簡稱：腦脊液組），和腦室灌注阻滯劑組（簡稱：阻滯劑組），每組10只。 正常組給予標(biāo)準(zhǔn)飲食（3.8kcal/g，含70%碳水化合物,20%蛋白質(zhì),10%脂肪）；其余各組采用高脂飼料高脂飼料(總熱能為5.4kcal/g,含38.5%碳水化合物，15%蛋白質(zhì)，46.5%脂肪)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。喂養(yǎng)8周后，大鼠尾靜脈采血檢測FPG、Fins，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)的自然對(duì)數(shù)（IAI）即1/[FPG (mmol/L)×FIN (mIU/L)]為表示，當(dāng)模型組大鼠IAI與正常組比較明顯降低（P0.05）時(shí)為造模成功。 （1）阻滯劑組大鼠稱重后，以10%水合氯醛（30mg/kg）腹腔麻醉。將大鼠固定于腦立體定位儀，頭頂局部常規(guī)備皮、消毒，依照立體定位圖譜進(jìn)行定位，于前囟后0.8mm，在中位顱蓋骨處用牙科鉆鉆一孔直徑2mm的孔。以不銹鋼導(dǎo)管插入（長18.0mm，外徑0.64mm，內(nèi)經(jīng)0.39mm）留置；用帶帽的不銹鋼制導(dǎo)絲（長17.0mm，直徑0.33mm），插入已經(jīng)置入的不銹鋼導(dǎo)管內(nèi)用以封閉導(dǎo)管。用牙科粘合劑與導(dǎo)管固定。手術(shù)后6-8小時(shí)大鼠可清醒，縫合皮膚，預(yù)防感染，將大鼠置于空籠內(nèi)待其蘇醒。術(shù)后二日起，，將管內(nèi)芯隔日抽出，用人工腦脊液清洗，以保持不銹鋼導(dǎo)管內(nèi)清潔。注射時(shí)，抽出將管內(nèi)芯，將微量注射器與內(nèi)徑0.3mm的聚氯乙烯導(dǎo)管(自己拉制成)與不銹鋼管相連，取wortmannin(50nmol/L，3mg/kg體重)，緩慢給藥，注射速度維持在1μL/min。注射完畢后留針8-10min，再緩慢退針，以防藥物沿針道返流顱外。 （2）腦脊液組大鼠稱重后，腦室留管的方法與阻滯劑組相同，腦脊液按照Na+145.5ml/L, K+2.8mol/L, Ca2+2.3mol/L, Mg2+2.2mol, Cl-128.5mol/L, HCO-323.l mol/L, H-2Po4ll mol/L,葡萄糖0.6l g/L,滲透壓289.omosM/L, PH值7.3配置完成，等量灌注，操作方法與阻滯劑組相同。 使用0.30×25mm不銹鋼毫針，于大鼠關(guān)元穴、后三里穴、豐隆穴和中脘穴進(jìn)行毫針針刺。足三里穴（后三里穴）和豐隆穴直刺入5-10mm，關(guān)元穴向劍突方向，同時(shí)中脘穴向恥骨聯(lián)合方向斜刺5-7mm。采用電針治療儀（HANS-100A型），連續(xù)波，頻率（2Hz），強(qiáng)度（1mA），通電（10min），同側(cè)足三里穴和豐隆穴連接同一輸出的兩個(gè)電極，關(guān)元穴和中脘穴連接另一輸出的兩個(gè)電極。刺激強(qiáng)度根據(jù)局部肌肉收縮情況決定。每日電針10分鐘，每周5次治療，總療程為8周。 結(jié)果： 1.各組大鼠實(shí)驗(yàn)開始8thw造模完成時(shí)，與正常組大鼠相比較，模型組、預(yù)防組、電針組、腦脊液組、阻滯劑組大鼠的BW、FPG、FINS明顯升高（p0.01）。16thw治療結(jié)束后，與正常組大鼠相比較，模型組大鼠的BW、FPG、FINS明顯升高（p0.01）；與模型組大鼠相比較，預(yù)防組與電針組大鼠BW、FPG、FINS降低（p0.05）；與阻滯劑組大鼠相比較，腦脊液組大鼠BW、FPG、FINS降低（p0.05）。與正常組大鼠相比較，模型組大鼠的IAI明顯降低（p0.01）；與模型組大鼠相比較，預(yù)防組與電針組大鼠IAI升高（p0.05）；與阻滯劑組大鼠相比較，腦脊液組大鼠IAI升高（p0.05） 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，造模完成后模型組大鼠的TC、TG、FFA明顯升高（p0.01）；16w電針治療結(jié)束后較，預(yù)防組、電針組大鼠TC、TG、FFA降低（p0.05），與模型組大鼠的TC、TG、FFA檢測結(jié)果比較，具有顯著差異；與阻滯劑組大鼠相比較，腦脊液組大鼠TG、FFA降低（p0.05）, TC值無明顯差異（p0.05）。 3.免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組大鼠相比較，模型組大鼠IRS2IOD值明顯降低（p0.01）；電針治療結(jié)束后，預(yù)防組、電針組大鼠IRS2IOD值升高（p0.05）與模型組大鼠相比較具有顯著差異；與阻滯劑組大鼠相比較，腦脊液組大鼠IRS2IOD值升高（p0.05）。 4. Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組、阻滯劑組大鼠下丘腦中PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.01）；與模型組相比較，預(yù)防組、電針組、腦脊液組大鼠下丘腦中PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯提高（P＜0.05）；與阻滯劑組比較，預(yù)防組（P＜0.01）、電針組（P＜0.01）、腦脊液組（P＜0.05）大鼠下丘腦中PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯提高。另外，與正常組比較，模型組、阻滯劑組大鼠下丘腦中p-PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯減少（P＜0.01）；與模型組相比較，預(yù)防組、電針組大鼠下丘腦中p-PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯提高（P＜0.05）；與阻滯劑組比較，腦脊液組大鼠下丘腦中p-PI3Kp110蛋白表達(dá)明顯提高（P＜0.05）。 5. Real-timePCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常組大鼠相比較，模型組大鼠下丘腦Akt2mRNA表達(dá)明顯降低（p0.01）；與模型組大鼠相比較，預(yù)防組和電針組腦Akt2mRNA表達(dá)升高（p0.05）；與阻滯劑組大鼠相比較，腦脊液組鼠下丘腦Akt2mRNA表達(dá)升高（p0.05）。 結(jié)論： 1.與模型組大鼠相比較，電針治療可以有效降低胰島素抵抗模型大鼠的體質(zhì)量，調(diào)節(jié)其血糖和空腹胰島素濃度。 2.電針治療可以有效降低胰島素抵抗模型大鼠的游離脂肪酸、甘油三酯和總膽固醇的濃度，緩解因胰島素抵抗引起的脂質(zhì)代謝異常。 3.電針治療可以調(diào)節(jié)胰島素抵抗模型大鼠下丘腦中IRS-2的含量，提高PI3Kp110、p-PI3Kp110的蛋白表達(dá)，和Akt2mRNA的基因表達(dá)，說明電針可以通過調(diào)節(jié)PI3K信號(hào)通路相關(guān)信號(hào)分子，從而緩解胰島素抵抗。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2294982