【摘要】：第一部分腎上腺素興奮劑及抑制劑對布比卡因致心肌細(xì)胞直接毒性作用的影響 目的：局部麻醉藥布比卡因的心臟毒性作用包括傳導(dǎo)抑制和收縮動力抑制兩個方面。布比卡因?qū)π呐K血流動力學(xué)的影響主要表現(xiàn)為對心肌收縮功能的抑制作用。作為β-腎上腺素能受體激動藥，腎上腺素常用來局麻藥中毒致心跳驟停后的復(fù)蘇解救。既往研究報(bào)道心肌β1腎上腺素受體過度興奮可以抑制心肌功能、加重心肌損傷。而布比卡因中毒往往誘發(fā)內(nèi)源性腎上腺素的釋放，為評估腎上腺素、去甲腎上腺素和β1腎上腺素受體在布比卡因心肌抑制中的影響，本研究采用可視化動緣探測系統(tǒng)動態(tài)跟蹤同步檢測技術(shù)，觀察檢測了異丙腎上腺素和艾司洛爾對布比卡因致單心肌細(xì)胞收縮功能抑制的影響。 方法： 心肌細(xì)胞模型制備成年SD大鼠，體重280～350g，肝素抗凝及戊巴比妥鈉麻醉成功后，快速開胸并取出心臟置于冷無鈣臺氏液中，行主動脈插管。先用無鈣臺氏液灌流，沖凈心臟內(nèi)部血液。心臟停止跳動后，再以同樣的灌流速度用酶液反復(fù)循環(huán)灌流。最后，待消化完畢后機(jī)械撕扯心肌組織，并在室溫下靜置于KB液中靜置1h待用。 實(shí)驗(yàn)分組采用隨機(jī)數(shù)字方法將心肌細(xì)胞隨機(jī)分為三組：布比卡因組、異丙腎+布比卡因組、異丙腎+艾司洛爾+布比卡因組。記錄給予三組中不同濃度布比卡因灌流前后細(xì)胞收縮速度（dep v）、收縮時肌小節(jié)長度的百分比變化（bl%peak h）、達(dá)峰值50%所需時間（time to peak50%），以及細(xì)胞有無停止跳動，并記錄再次更換有鈣臺式液后細(xì)胞有無復(fù)跳。每個濃度觀察10只大鼠的樣本。 心肌細(xì)胞測量將細(xì)胞懸液置于細(xì)胞槽中，以有鈣臺式液持續(xù)灌流，用光電刺激器通過安置在細(xì)胞槽底部的平行鉑絲電極進(jìn)行電場刺激，刺激頻率為0.5Hz、脈寬4ms、幅度15V。正常心肌細(xì)胞將隨之有節(jié)律的收縮，細(xì)胞收縮影像通過顯微鏡傳輸?shù)綌z像系統(tǒng)，并呈現(xiàn)在監(jiān)視器上。 結(jié)果：1.布比卡因?qū)π募”憩F(xiàn)為濃度依賴性收縮抑制；低濃度布比卡因（5.9、8.9μmol/L）對大鼠心肌細(xì)胞收縮并無抑制作用，而高濃度抑制明顯；2.異丙腎上腺素可增強(qiáng)低濃度（5.9、8.9μmol/L）布比卡因存在時心肌細(xì)胞收縮力，但布比卡因濃度一旦超過13.3μmol/L，則表現(xiàn)出明顯抑制，甚至使細(xì)胞衰竭；3.異丙腎上腺素可顯著降低布比卡因致心肌細(xì)胞收縮衰竭的半數(shù)有效量，顯著加重布比卡因的心肌毒性；單純布比卡因所致EC50及其95%可信區(qū)間為44.9（33.9~55.4）μmol/L,而加入異丙腎上腺素后布比卡因所致大鼠心肌細(xì)胞衰竭的EC50及其95%可信區(qū)間為17.9（5.9~28.9）μmol/L，，顯著低于單純布比卡因組（P0.05）；4.高選擇性β1腎上腺素受體阻滯劑艾司洛爾能顯著逆轉(zhuǎn)異丙腎上腺素所加重的布比卡因心肌毒性作用，異丙腎+艾司洛爾+布比卡因組致大鼠心肌細(xì)胞衰竭的EC50及其95%可信區(qū)間為40.6（28.4~53.7）μmol/L，顯著高于異丙腎+布比卡因組（P0.05）；5.布比卡因的心肌細(xì)胞抑制作用呈可逆性；當(dāng)用有鈣臺式液替換含有布比卡因的灌流液后，細(xì)胞收縮快速恢復(fù)。 結(jié)論：1.布比卡因濃度依賴性可逆的抑制心肌細(xì)胞收縮機(jī)能；2. β1-腎上腺素能受體興奮可以加重布比卡因?qū)π募〖?xì)胞的毒性作用，而β1-腎上腺素能受體拮抗劑可以逆轉(zhuǎn)此惡化作用。 第二部分ATP敏感性鉀離子通道開放劑二氮嗪介導(dǎo)的抗布比卡因致大鼠心肌細(xì)胞毒性作用 目的：局部麻醉藥的心臟毒性作用包括對心臟傳導(dǎo)抑制和心肌細(xì)胞收縮動力抑制兩個方面。布比卡因?qū)π募〉亩拘宰饔每赡芘c布比卡因抑制線粒體ATP敏感性鉀通道（mitoKATP）電流有關(guān)。二氮嗪作為一種mitoKATP特異性開放劑，無論離體還是在體實(shí)驗(yàn)研究中均表現(xiàn)出抗心肌損傷的心臟保護(hù)作用。本研究采用可視化動緣探測系統(tǒng)動態(tài)跟蹤同步檢測單細(xì)胞舒縮變化技術(shù)，觀察布比卡因?qū)π募〖?xì)胞的直接影響，以及使用ATP敏感性鉀離子通道二氮嗪是否可以減輕或消除此毒性作用。 方法： 心肌細(xì)胞模型制備成年SD大鼠，體重280～350g，肝素抗凝及戊巴比妥鈉麻醉成功后，快速開胸并取出心臟置于冷無鈣臺氏液中，行主動脈插管。先用無鈣臺氏液灌流，沖凈心臟內(nèi)部血液。心臟停止跳動后，再以同樣的灌流速度用酶液反復(fù)循環(huán)灌流。最后，待消化完畢后機(jī)械撕扯心肌組織，并在室溫下靜置于KB液中靜置1h待用。 實(shí)驗(yàn)分組：采用隨機(jī)數(shù)字方法將心肌細(xì)胞隨機(jī)分為兩組：布比卡因組和二氮嗪+布比卡因組。記錄給予兩組中不同濃度布比卡因灌流前后細(xì)胞有無停止跳動，并記錄再次更換有鈣臺式液后細(xì)胞有無復(fù)跳。每個濃度觀察10只大鼠的樣本。 心肌細(xì)胞測量將細(xì)胞懸液置于細(xì)胞槽中，以有鈣臺式液持續(xù)灌流，用光電刺激器通過安置在細(xì)胞槽底部的平行鉑絲電極進(jìn)行電場刺激，刺激頻率為0.5Hz、脈寬4ms、幅度15V。正常心肌細(xì)胞將隨之有節(jié)律的收縮，細(xì)胞收縮影像通過顯微鏡傳輸?shù)綌z像系統(tǒng)，并呈現(xiàn)在監(jiān)視器上。 結(jié)果：1.二氮嗪可緩解布比卡因?qū)π募〖?xì)胞的抑制作用，降低布比卡因的心肌毒性，二氮嗪+布比卡因所致大鼠心肌細(xì)胞衰竭的半數(shù)有效量EC50及其95%可信區(qū)間為64.6、（47.4~84.3）μmol/L，明顯高于單純布比卡因組（P0.05）；2.衰竭的細(xì)胞停止灌流布比卡因和二氮嗪后，細(xì)胞均可恢復(fù)正常收縮狀態(tài)。 結(jié)論：布比卡因的心臟毒性與其線粒體ATP敏感性鉀離子通道（mitoKATP）抑制作用有關(guān)，開放ATP敏感性K離子通道可顯著提高布比卡因的致大鼠心肌耐受布比卡因心肌毒性的能力。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R614

【參考文獻(xiàn)】

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1 關(guān)鳳英;楊世杰;;抗心律失常藥物作用的靶點(diǎn)——HERG K~+通道[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2007年07期

本文編號：2280580