【摘要】：盡管近二十年來術(shù)后疼痛治療已經(jīng)得到廣泛的重視,對術(shù)后疼痛的認(rèn)識和治療有了較大的發(fā)展,包括對術(shù)后疼痛病理機(jī)制的研究、新型鎮(zhèn)痛藥物和鎮(zhèn)痛技術(shù)的開發(fā)及利用等,但據(jù)大樣品調(diào)查顯示,在接受常規(guī)術(shù)后疼痛治療的外科手術(shù)病人中仍有41%的病人在術(shù)后當(dāng)天有中到重度疼痛,約14%的病人在術(shù)后第四天仍有中到重度疼痛。并且這些手術(shù)后有中到重度疼痛的病人更容易發(fā)展為慢性疼痛綜合癥,有報告指出,幾種常見手術(shù)包括腹股溝疝、膽囊切除、乳腺、開胸、截肢術(shù)的術(shù)后慢性疼痛發(fā)生率在10%～60%。因此,術(shù)后疼痛治療仍然是一個急待解決的重要臨床問題,特別是新的不影響神志和對非痛刺激的敏感性的優(yōu)秀鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)。 目前術(shù)后疼痛治療的不完善與我們對術(shù)后疼痛的病理生理機(jī)制了解不全面相關(guān),因此研究術(shù)后疼痛發(fā)生機(jī)制、傷害性傳導(dǎo)通路的可塑性、控制痛覺傳導(dǎo)通路的敏感化、開發(fā)多模式鎮(zhèn)痛等等具有重大意義。術(shù)后疼痛機(jī)制是獨特且復(fù)雜的,有別于其它炎癥、神經(jīng)損傷等引起的疼痛機(jī)理,大鼠足底切口痛模型是TJ.Brennan研究組于90年代中期建立的,切開足病皮膚和深部組織、切開并牽拉肌肉,然后縫合皮膚；體感損傷與許多手術(shù)相似,切開后大鼠出現(xiàn)數(shù)天的對機(jī)械性刺激的痛覺過敏,然后逐漸回復(fù),與臨床術(shù)后疼痛相似,是目前廣泛用于研究術(shù)后疼痛機(jī)制和治療的較適合的動物模型。 外科損傷引起兩種痛覺過敏,原發(fā)性痛覺過敏和繼發(fā)性痛覺過敏。原發(fā)性痛覺過敏指損傷鄰近受傷害組織對熱和機(jī)械刺激產(chǎn)生的痛覺過敏,內(nèi)在機(jī)制涉及局部釋放的致痛介質(zhì)引起的初級傳入傷害感受器的外周敏化,切開后Aδ纖維和C纖維的傷害感受器敏化,出現(xiàn)自發(fā)電活動、反應(yīng)閾值降低、對閾上刺激的反應(yīng)增強、感受野擴(kuò)大、對特定刺激有反應(yīng)的傷害感受器的比例增加等等。雖然炎癥也參予了切開痛的機(jī)制,但與在其它組織損傷模型中所起的作用不同。大鼠足底切口痛模型中炎癥因子分泌時程與機(jī)械痛覺過敏的發(fā)生并不一致,緩激肽拮抗藥對切開痛亦沒有止痛作用,反映與炎性痛相比術(shù)后疼痛有其獨特的機(jī)制。另外,缺血因素可能在術(shù)后疼痛機(jī)制中起著重要作用,局部酸中毒與術(shù)后疼痛行為和痛覺過敏伴行；低的PH值可活化幾個易轉(zhuǎn)導(dǎo)疼痛的離子通道,如酸敏感的離子通道、辣椒素受體、嘌呤能受體和鉀通道等。繼發(fā)性痛覺過敏指傷口周圍未受損傷的組織對機(jī)械性刺激的過敏,是中樞敏化的結(jié)果,源于背角神經(jīng)元對外周傳入的增強反應(yīng),其幅度和時程與組織損傷的程度相關(guān)。繼發(fā)性痛覺過敏的產(chǎn)生和維持的機(jī)制不同,因為其由外周傳入介導(dǎo),但形成后獨立于從傷口來的外周信號。中樞疼痛通路的敏化與興奮性突觸反應(yīng)增強及抑制反應(yīng)降低相關(guān),放大了對傷害和非傷害刺激的反應(yīng)。圍手術(shù)期疼痛通路具有可塑性,對脊髓可塑性的更好的理解,包括興奮性和抑制性通路,有助于我們發(fā)展選擇性和有效性更好的圍手術(shù)期疼痛治療藥物�！捌胶怄�(zhèn)痛”和多模式鎮(zhèn)痛應(yīng)該包括聯(lián)合應(yīng)用鎮(zhèn)痛藥和抗痛覺過敏藥物來保障圍手術(shù)期的疼痛緩解。 陽離子-氯離子聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白(Cation Chloride Cotransporter, CCC)是一組轉(zhuǎn)運鈉、鉀、氯離子進(jìn)出細(xì)胞的膜蛋白,發(fā)現(xiàn)于1980年,屬SLC12(solute carrier family12)基因家族。哺乳動物的CCC家族有9個成員,分別由基因SLC12a1-9編碼,是表觀分子量120-200kDa的糖蛋白。其中7個CCC蛋白目前描述為細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運蛋白,按功能分為三類：鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白(NKCC1和NKCC2);鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白(KCC1-4)；鈉氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白(NCC)。另外兩個(CIPl/SLC12a8和CCC9/SLC12a9)的生理作用還未明確。鈉鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白1(Sodium-potassium-chloride co-transporter1, NKCC1)亞型與鉀氯聯(lián)合轉(zhuǎn)運蛋白2(potassium-chloride co-transporter2, KCC2)亞型是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)氯離子平衡的主要調(diào)控蛋白。其中,NKCC1負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運氯離子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而KCC2轉(zhuǎn)運氯離子到細(xì)胞外。越來越多的研究結(jié)果提示NKCC1和KCC2通過對GABA能和甘氨酸能抑制作用的影響參與了脊髓水平的疼痛傳導(dǎo)的調(diào)控。 γ-氨基丁酸(γ-amino-butylic acid, GABA)和甘氨酸(glycine)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)最主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),在控制神經(jīng)興奮性與信息加工、神經(jīng)可塑性與網(wǎng)絡(luò)同步化等方面起到相當(dāng)重要的作用。在脊髓,GABA能神經(jīng)元及其纖維可自成局部環(huán)路。GABA通過其受體發(fā)揮作用,其中GABAA和GABAC受體屬于離子型受體,激活后成為Cl-、HCO3-的通道。GABAA受體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)分布最為廣泛的GABA受體,是一種配體門控離子通道受體,與C1-通道耦聯(lián),受體激活時打開Cl-通道,Cl-流動方向取決于細(xì)胞內(nèi)外Cl-的濃度。在絕大部分成熟的神經(jīng)元中,KCC2可以將Cl-運出細(xì)胞外,維持細(xì)胞內(nèi)低濃度的Cl-,因此Cl-平衡電位(ECl)低于細(xì)胞膜電位(Vm)。GABAA受體激活后,細(xì)胞外Cl-內(nèi)流,引起突觸后膜超極化,由此產(chǎn)生一種抑制性突觸后電位(Inhibitory postsynaptic potential, IPSP)。但是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中和出生后早期,未成熟神經(jīng)元的細(xì)胞膜上主要表達(dá)NKCC1,而KCC2表達(dá)較弱,使細(xì)胞內(nèi)聚集了高濃度的Cl-,GABAA受體激活后,細(xì)胞內(nèi)Cl-外流,引起突觸后膜去極化,引發(fā)一種興奮性作用。GABA的興奮性效應(yīng)在突觸形成、神經(jīng)系統(tǒng)可塑性等方面起重要作用。甘氨酸受體(GlyR)與GABAA受體一樣,同屬配體門控離子通道受體,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的分布以脊髓和腦干為主。甘氨酸受體是由a、p亞單位組成的五聚體,五個亞單位共同組成Cl-通道。與GABA相似,在未成熟神經(jīng)元上,甘氨酸受體激活后,Cl-通道打開,細(xì)胞內(nèi)Cl-外流,引起突觸后膜去極化,引發(fā)一種興奮性作用。而在成熟神經(jīng)元中,甘氨酸受體激活后,細(xì)胞外Cl-內(nèi)流,引起突觸后膜超極化,由此產(chǎn)生IPSP。 因此神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度是決定GABA及甘氨酸介導(dǎo)的反應(yīng)的極性的關(guān)鍵因素,若胞內(nèi)氯離子濃度低,GABAA受體及甘氨酸受體介導(dǎo)氯離子內(nèi)流,使細(xì)胞膜超極化,即經(jīng)典的GABA介導(dǎo)的中樞神經(jīng)元的突觸后抑制；若胞內(nèi)氯離子濃度高,GABAA受體及GlyR介導(dǎo)氯離子外流,使細(xì)胞膜去極化,正如GABA在DRG初級感覺神經(jīng)元中介導(dǎo)的興奮反應(yīng)。而NKCC1和KCC2的表達(dá)及功能是決定神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)氯離子濃度的一個關(guān)鍵因素,已有很多實驗研究分別在各種炎癥模型和神經(jīng)痛模型中證明了NKCC1和KCC2蛋白對疼痛調(diào)控的影響。在辣椒素及福爾馬林注射致炎性痛的大鼠模型中,鞘內(nèi)注射NKCC1抑制劑布美他尼均可有效抑制疼痛行為及痛覺過敏反應(yīng)；在脊髓挫傷致慢性病理性神經(jīng)痛的大鼠,布美他尼可減輕疼痛行為及熱刺激誘發(fā)的痛覺過敏,蛋白測定顯示NKCC1在損傷后14天時呈短暫的顯著增加,同時伴KCC2的表達(dá)下調(diào)。 在我們的前期研究中,我們應(yīng)用大鼠足底切口痛模型反映手術(shù)后疼痛,在切開前予鞘內(nèi)注射呋噻米溶液,疼痛行為學(xué)測定證實其可抑制切開損傷引起的原發(fā)性和繼發(fā)性痛覺過敏,提示CCC介入了術(shù)后疼痛的痛覺過敏形成機(jī)制；不過鞘內(nèi)給予呋噻米后正常大鼠和足底切口痛模型大鼠均出現(xiàn)了短暫的興奮性行為異常,估計與KCC2的同時被阻滯有關(guān)系。在本項研究中,我們擬通過測定足底切口痛模型大鼠的誘發(fā)及自發(fā)性疼痛行為,評估鞘內(nèi)應(yīng)用NKCC1高選擇性抑制劑布美他尼在足底切口痛模型大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)；同時利用熒光免疫多重標(biāo)記技術(shù)測定NKCC1和KCC2兩個蛋白在正常和足底切口痛模型大鼠不同時間點的脊髓背角和背根節(jié)上的表達(dá)水平和分布情況,探索NKCC1和KCC2對術(shù)后疼痛的調(diào)控機(jī)制及CCC阻滯劑的作用機(jī)理,以了解選擇性NKCC1抑制劑應(yīng)用于術(shù)后疼痛治療的可行性。 第一部分鞘內(nèi)注射布美他尼對足底切口痛模型大鼠疼痛行為的影響 目的評價鞘內(nèi)應(yīng)用NKCC1高選擇性抑制劑布美他尼對足底切口痛模型大鼠術(shù)后疼痛的鎮(zhèn)痛效應(yīng) 方法成年雄性SD大鼠36只,采用T.J. Brennan研究組的方法建立大鼠足底切口痛模型,簡要地,在吸入麻醉下,在左足跟部作-1cm縱向切口,包括皮膚及深筋膜,用鑷子提起其下的趾短屈肌,亦縱向切開分離,然后松開,注意不能破壞肌肉起止部,隨后用4--0抗菌可吸收縫線縫合皮膚兩針,按壓止血及清潔傷口。大鼠隨機(jī)分成對照組及布美他尼組(每組N=18)進(jìn)入行為學(xué)測量。對照組在切開前經(jīng)鞘內(nèi)注入人工腦脊液20μl,而布美他尼組注入布美他尼溶液100μg/20μl。鞘內(nèi)注藥在吸入麻醉下進(jìn)行,參考De la Calle等的方法,于L3-L4椎間隙用30G針頭連接50μl微量注射器穿刺,出現(xiàn)甩尾反應(yīng)后注入溶液20μl。大鼠隨后分成三個亞組(每組N=6),分別接受疼痛累計評分、熱痛閾及機(jī)械痛閾測定。疼痛累計評分測定方法為將大鼠置于底為8mm×8mm網(wǎng)格的透明塑料籠內(nèi),通過籠下的斜置的放大鏡觀察大鼠切開足。根據(jù)切開足承重情況給予0、1或2分,若完全負(fù)重且網(wǎng)格使傷口變白或扭曲則為0分,若傷口觸及網(wǎng)格但傷口未變白或扭曲則為1分,若足部完全離開網(wǎng)格則為2分。每次觀察時間為1min,5min重復(fù)一次,連續(xù)觀察1h,12次的分?jǐn)?shù)累加得出疼痛累計評分(0-24分)。熱痛閾測定方法為利用熱刺痛儀的輻射熱源透過玻璃板照射切口旁0.5mm區(qū)域,記錄從照射開始到縮足反應(yīng)的時間,間隔5min重復(fù)三次,取平均值記錄為熱縮足反射潛伏期。機(jī)械痛閾測定方法為大鼠經(jīng)過測試適應(yīng)訓(xùn)練后,以改良的Dixon up-down法應(yīng)用von frey絲測定大鼠的機(jī)械性撤足閾值,并計算50%縮足閾值。計算公式為50%g閾值=(10[Xf+kδ])/10000,其中Xf為最后一支von Frey絲的壓力值；k為陽性／陰性反應(yīng)組合相對應(yīng)的查表值,δ為所用刺激間的平均差值。大鼠分別在切開前1d、切開后2h、2d、3d、4d、5d、6d接受一次相應(yīng)的疼痛行為學(xué)測定。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。50%縮足閾值和疼痛累計評分用中位數(shù)及四分間距表示,并用非參數(shù)檢驗方法,組內(nèi)不同時間比較用Friedman法,組間比較用Mann-Whitney法。WLT的結(jié)果用x±s表示,采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析,組間各時間點的比較采用兩獨立樣本的t檢驗。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果對照組及鞘內(nèi)布美他尼組的疼痛累積評分在切開后均較術(shù)前顯著增加(均為P0.001),但切開后布美他尼組的評分顯著低于對照組,并持續(xù)至術(shù)后第5天(P=0.004(D1),0.003(D2),0.003(D3),0.096(D4),0.007(D5),0.317(D6))。鞘內(nèi)布美他尼顯著增加足底切口痛模型大鼠的熱痛閾(F=580.755,P0.001)；同時不同時間的熱縮足反射潛伏期有顯著差異,F值為F=247.463,P0.001；藥物與時間點間交互作用無顯著性,F=4.065,P=0.073。對照組及布美他尼組各時間點的熱縮足反射潛伏期有顯著差異,均為P0.001。同一時間點的兩組間比較,顯示基礎(chǔ)值無差異,P=0.832,而切開后第一至第六天布美他尼組的熱縮足反射潛伏期均顯著大于對照組,均為P0.001。對照組和布美他尼組的50%縮足機(jī)械閾值在切開后2h至第六天均顯著低于基礎(chǔ)值(P值均0.001),兩組間基礎(chǔ)閾值無差異(P=0.902),但從切開后2h至第五天,布美他尼組的50%縮足閾值顯著高于對照組(P=0.003,0.003,0.002,0.026,0.022)。 結(jié)論在大鼠足底切口痛模型,鞘內(nèi)應(yīng)用高選擇性NKCC1阻滯劑布美他尼可降低術(shù)后的疼痛累積評分、提高術(shù)后熱痛閾及機(jī)械痛閾,說明鞘內(nèi)注射布美他尼可有效減輕術(shù)后靜息痛及誘發(fā)痛,有希望成為新的術(shù)后疼痛治療策略。 第二部分足底切口痛模型大鼠背根節(jié)及脊髓背角NKCC1和KCC2表達(dá)的變化 目的測定足底切口痛模型大鼠背根節(jié)和脊髓背角的NKCC1和KCC2蛋白表達(dá)及其變化 方法成年雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分成對照組、切開后2h、2d、3d、6d組(每組N=6)。采用T.J. Brennan研究組的方法建立大鼠足底切口痛模型,在吸入麻醉下,在左足跟部作一1cm縱向切口,包括皮膚及深筋膜,用鑷子提起其下的趾短屈肌,亦縱向切開分離,然后放松,隨后用4-0抗菌可吸收縫線縫合皮膚兩針,按壓止血及清潔傷口。切開后在預(yù)定時間進(jìn)入免疫組化程序,簡略地,在戊巴比妥鈉深麻醉下,經(jīng)升主動脈先后灌注4℃PBS液及4%多聚甲醛緩沖液(pH7.3),隨后取出L4-L5節(jié)段脊髓及雙側(cè)L5背根節(jié)(DRG)。DRG后固定25min,脊髓后固定14h；其后經(jīng)10%、20%、及30%蔗糖PBS梯度脫水。五組樣本用OCT液包埋于一個樣本頭,冰凍切片(16μm厚)后貼片,進(jìn)入NKCC1或KCC2免疫染色程序。切片用5%ChemiBLOCKERTM (Millipore2170, USA)加0.5%Triton X100PBS室溫下封阻1h；然后DRG于室溫下與一抗(山羊抗;NKCC1, Santa Cruz,#sc-21545;山羊抗KCC2, Santa Cruz,#sc-19420;1:20)孵育2h,脊髓組織則用相同抗體(1：100)在4℃下孵育兩晚；PBS洗片后,加入二抗(FITC標(biāo)記驢抗山羊IgG, Jackson ImmunoResearch705-095-003,1:200),避光室溫下孵育90min,最后10min加DAPI (4',6-diamidino-2-phenylin.dole,0.3染核。Leica熒光顯微鏡下閱片、照相,專人行全背角及全DRG陽性細(xì)胞計數(shù)。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,組間陽性細(xì)胞數(shù)的比較采用完全隨機(jī)的單因素方差分析(one-way ANOVA),方差齊性檢驗用Levene檢驗,方差不齊則選擇Welch近似方差分析。多重比較用LSD法(Levene's post hoc test)或Tamhane's T2法,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果NKCC1在正常大鼠DRG內(nèi)表達(dá)微弱,切開后雙側(cè)DRG均見NKCC1表達(dá)增加,以切開側(cè)更明顯,NKCC1免疫活性增加主要在神經(jīng)元細(xì)胞膜上；各時間組陽性細(xì)胞計數(shù)有統(tǒng)計學(xué)差異(F=10.848,P=0.001),2h組的陽性細(xì)胞與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。KCC2在正常及足底切口痛模型大鼠DRG內(nèi)均未見表達(dá)。NKCC1在正常大鼠脊髓背角深層微弱表達(dá),切開后同側(cè)背角深層NKCC1表達(dá)顯著增加(F=219.996,P=0.000),切開后2h、2d、3d、6d組的陽性細(xì)胞與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000,0.000,0.004,0.000)。KCC2在正常大鼠的脊髓背角深層有顯著表達(dá),在膠狀質(zhì)層有微弱表達(dá)；切開后KCC2在同側(cè)背角深層表達(dá)降低(F=14.634, P=0.000),2h,2d,3d,6d組的陽性神經(jīng)元計數(shù)顯著減少(P=0.003,0.000,0.002,0.004)。 結(jié)論NKCC1表達(dá)在正常大鼠的DRG及脊髓背角深層；KCC2表達(dá)在正常大鼠的脊髓背角,以深層為主。在大鼠足底切口痛模型,NKCC1在脊髓水平的表達(dá)上調(diào),KCC2在脊髓背角深層的表達(dá)下調(diào),提示NKCC1及KCC2參與了術(shù)后疼痛及痛覺過敏形成機(jī)制,可能成為術(shù)后疼痛治療的新的靶點。 第三部分NKCC1和KCC2在足底切口痛模型大鼠背根節(jié)和脊髓背角的A纖維及C纖維傳入神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá) 目的明確NKCC1和KCC2在足底切口痛模型大鼠DRG及脊髓背角的C纖維和A纖維傳入神經(jīng)元內(nèi)的表達(dá) 方法成年雄性SD大鼠30只,隨機(jī)分成對照組、切開后2h、2d、3d、6d組(每組N=6)。采用T.J. Brennan研究組的方法建立大鼠足底切口痛模型,在吸入麻醉下,在左足跟部作-1cm縱向切口,包括皮膚、筋膜,切開并分離趾短屈肌,隨后縫合皮膚兩針,按壓止血及清潔傷口。切開后在預(yù)定時間進(jìn)入免疫組化程序,簡略地,在戊巴比妥鈉深麻醉下,經(jīng)升主動脈先后灌注4℃PBS液及4%多聚甲醛緩沖液(pH7.3),隨后取出L4-L5節(jié)段脊髓及雙側(cè)L5背根節(jié)(DRG)。DRG后固定25min,脊髓后固定14h；其后經(jīng)10%、20%、及30%蔗糖PBS梯度脫水。五組樣本用OCT液包埋于一個樣本頭,冰凍切片(16μm厚)后貼片,進(jìn)入多重染色免疫組化程序。參照Funk等的方法,切片用5%ChemiBLOCKERTM (Millipore2170, USA)加0.5%Triton X100PBS室溫下封阻1h；然后DRG于室溫下與一抗孵育2h,脊髓組織則用相同抗體在4℃下孵育兩晚；使用以下抗體組合及最終稀釋度：山羊抗NKCC1(Santa Cruz,#sc-21545)、山羊抗KCC2(Santa Cruz,#sc-19420), DRG用1：20稀釋度,脊髓用1：100稀釋度；兔抗神經(jīng)絲蛋白200(NF200)(Sigma, N4142),稀釋度1：400。PBS洗片三次后,與相應(yīng)的熒光標(biāo)記二抗組合室溫下避光孵育60min。所用熒光二抗包括：FITC標(biāo)記驢抗山羊IgG (Jackson ImmunoResearch705-095-003,1:200), AMCA標(biāo)記驢抗山羊IgG (Jackson ImmunoResearch705-155-147,1:300), TRITC標(biāo)記驢抗兔IgG (Jackson ImmunoResearch711-025-152,1:300), FITC標(biāo)記凝集素B4(Sigma L2895,3.3μg/ml),及4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI,5μg/ml)。避光下PBS洗片四次、風(fēng)干、抗熒光衰減封片劑封片后,應(yīng)用配Leica DFC425C CCD攝像頭及Leica LAS軟件的熒光顯微鏡閱片、照相。一抗的預(yù)吸收對照及省略一抗的切片未見熒光出現(xiàn)。 結(jié)果在切開后2天的大鼠DRG的NKCC1和DAPI雙染切片上,顯示絕大部分神經(jīng)元細(xì)胞膜上清晰的NKCC1表達(dá)。DRG切片的NKCC1和C纖維傳入神經(jīng)元標(biāo)記物IB4雙染,顯示絕大部分C纖維傳入神經(jīng)元上有顯著的NKCC1表達(dá)。DRG切片的NKCC1和A纖維傳入神經(jīng)元標(biāo)記物NF200雙染,顯示大部分A纖維傳入神經(jīng)元上有明顯的NKCC1表達(dá)。脊髓切片的NKCC1和A纖維傳入神經(jīng)元標(biāo)記物NF200雙染,顯示背角深層和Ⅰ層的絕大部分A纖維傳入神經(jīng)元有顯著的NKCC1表達(dá)。脊髓背角切片的NKCC1和IB4雙染顯示,在正常大鼠脊髓背角,NKCC1陽性信號主要在深層,IB4陽性信號集中在膠狀質(zhì)層,在膠狀質(zhì)層僅有微量的共染；在切開后大鼠,NKCC1陽性信號在深層和淺層均有明顯增加,在膠狀質(zhì)層可見明顯的共染信號。脊髓背角的KCC2和NF200雙染顯示,背角深層部分A纖維傳入神經(jīng)元有顯著的KCC2表達(dá)。正常大鼠脊髓切片的KCC2和C纖維傳入神經(jīng)元標(biāo)記物IB4雙染,顯示背角深層顯著的KCC2表達(dá)和淺層少量的KCC2表達(dá)；IB4僅在膠狀質(zhì)層顯著表達(dá)；在膠狀質(zhì)層可見KCC2和IB4共染信號。 結(jié)論NKCC1表達(dá)在DRG的A、C纖維傳入神經(jīng)元和脊髓背角的A纖維傳入神經(jīng)元內(nèi)；KCC2表達(dá)在部分背角深層A纖維傳入神經(jīng)元內(nèi),及少量表達(dá)在膠狀質(zhì)層C纖維傳入神經(jīng)元內(nèi)；提示NKCC1和KCC2參與了脊髓對多種信號傳入的調(diào)控及痛覺過敏和痛覺超敏的形成。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R-332;R402

【參考文獻(xiàn)】

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1 何雁冰;萬麗;黃煥森;高崇榮;;呋噻米對辣椒素介導(dǎo)的胞外信號調(diào)節(jié)激酶磷酸化的抑制作用[J];中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

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本文編號：2230069