【摘要】：目的觀察鹽酸曲美他嗪(TMZ)的處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù),及其與自噬相關(guān)蛋白--微管相關(guān)蛋白輕鏈3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬流另一標(biāo)志物Sequestosome 1(p62/SQSTM1)的關(guān)系,并探討其作用機(jī)制。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只,體重范圍在230 g-270 g之間,構(gòu)建大鼠在體心肌缺血再灌注損傷(MIRI)模型。濃度為10%的水合氯醛給予大鼠腹腔注射麻醉,氣管插管連接呼吸機(jī)輔助大鼠呼吸。在大鼠左胸心尖搏動(dòng)最明顯處,作切口開胸,暴露出心臟,使用5～0帶針縫合線穿過心肌圍繞冠狀動(dòng)脈左前降支打一活結(jié)。扎緊縫合線致左室壁心肌缺血30分鐘后,剪斷縫合線,恢復(fù)冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)血供。假手術(shù)組大鼠實(shí)行開胸等一系列手術(shù),只是使用縫合線穿過心肌后不打結(jié),不阻斷LAD血液供應(yīng)。為了觀察LC3-Ⅱ和p62在I/R損傷和正常心肌組織中的變化水平,本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)將雄性SD大鼠分為三組:假手術(shù)組(Sham組)、單純心肌缺血再灌注模型組(I/R組)以及TMZ對(duì)心肌缺血再灌注損傷預(yù)處理組(I/R+TMZ組)。手術(shù)成功后I/R+TMZ組將TMZ溶于生理鹽水中,給予TMZ溶液(20 mg/kg · d)灌胃直至取材,Sham組和I/R組給予同體積生理鹽水灌胃直至取材。于成模后即刻、第4周和第8周分別處死各組大鼠,取心室前壁心肌進(jìn)行HE染色,觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化,RT-PCR檢測(cè)LC3-Ⅱ及p62 mRNA的表達(dá)水平,Wester blotting測(cè)定LC3-Ⅱ及p62蛋白的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)比較各組內(nèi)、組間、各時(shí)相上述變化的差異。結(jié)果1.TMZ對(duì)大鼠心肌組織中LC3-Ⅱ和p62表達(dá)的影響組內(nèi)之間比較,I/R組大鼠造模成功后即刻取材的心肌細(xì)胞中LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表達(dá)水平較第4周取材的表達(dá)水平降低(P0.05),造模成功后第8周取材的心肌細(xì)胞較造模后第4周取材的表達(dá)水平增高(P0.05);I/R+TMZ組大鼠造模成功后即刻取材的心肌細(xì)胞中LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表達(dá)水平較第4周取材的表達(dá)水平降低(P0.05),造模成功后第8周取材的心肌細(xì)胞較造模后第4周取材的表達(dá)水平增高(P0.05)。組間相比較,I/R組中各時(shí)相LC3-Ⅱ、p62mRNA和蛋白水平均比Sham組各時(shí)相增高(P0.05);與I/R組各時(shí)相相比較,I/R+TMZ組各時(shí)相的LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表達(dá)水平降低(P0.05)。I/R+TMZ組與Sham組各時(shí)相中LC3-Ⅱ、p62mRNA和蛋白的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意(PO.O5)。2.鹽酸曲美他嗪對(duì)大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)變化的影響I/R組大鼠從成模即刻后到第4周取材,其心肌細(xì)胞損害逐漸加重,出現(xiàn)炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)、細(xì)胞腫脹和斷裂、核著色不均及明顯壞死灶,I/R+TMZ組成模即刻的炎性變化同I/R組,第8周取材發(fā)現(xiàn)心肌組織的損害有所恢復(fù),術(shù)后第8周即與Sham組差異不大。結(jié)論TMZ的干預(yù)可能通過調(diào)節(jié)自噬流對(duì)大鼠I/R損傷的心肌起保護(hù)作用,并存在一定的時(shí)間效應(yīng)。
[Abstract]:Objective to investigate the protective effect of trimetazidine hydrochloride (TMZ) on myocardial ischemia-reperfusion (I / R) injury in rats, and its relationship with autophagy associated protein-microtubule-associated protein light chain 3 protein-鈪，

本文編號(hào)：2214346