本文選題：內(nèi)關(guān) + 心肌缺血　； 參考：《遼寧中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的:針刺對(duì)心肌缺血具有較滿(mǎn)意的療效,是理想的治療手段之一,但針刺治療作用機(jī)理尚未完全明確。本研究旨在通過(guò)探討電針內(nèi)關(guān)穴對(duì)心肌缺血大鼠的治療作用,通過(guò)觀察電針前后心肌細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、比較電針前后血栓素B2(TXB2)、前列腺素1α(PGF1α)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)、一氧化氮(NO)等細(xì)胞因子含量的影響以及調(diào)節(jié)作用,并突破心肌缺血過(guò)程中對(duì)傳統(tǒng)鈉、鉀、鈣等離子通道的研究,從酸敏感離子通道角度來(lái)揭示電針治療心肌缺血作用的機(jī)制。材料與方法:論文一:選用健康SPF級(jí)雄性SD大鼠50只,體重230±50g,由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供,采用隨機(jī)對(duì)照方法分為正常組(A)、模型組(B)、內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E),每組10只。各組大鼠給藥前稱(chēng)重,四肢皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素。劑量:85mg/kg,日一次,連續(xù)兩次成模。造模成功后,對(duì)內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E)大鼠分別進(jìn)行針刺,再連接電針儀,進(jìn)行電針治療。電針治療1周后,各組SD大鼠稱(chēng)重,腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉,麻醉后活體快速分離大鼠左心室心肌組織,然后置于4%的多聚甲醛中,HE染色后光鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,通過(guò)TUNEL法觀察心肌細(xì)胞凋亡熒光表達(dá)。分離大鼠左心室心肌組織后,各組大鼠腹主動(dòng)脈抽血,置于加入抗凝劑的EP管中,經(jīng)離心機(jī)離心后后取血清,通過(guò)ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)TXB2、PGF1α濃度。論文二:選用健康SPF級(jí)雄性SD大鼠50只,體重230±50g,由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供,采用隨機(jī)對(duì)照方法分為正常組(A)、模型組(B)、內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E),每組10只。各組大鼠給藥前稱(chēng)重,四肢皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素。劑量:85mg/kg,日一次,連續(xù)兩次成模。造模成功后,對(duì)內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E)大鼠分別進(jìn)行針刺,再連接電針儀,進(jìn)行電針治療。電針治療1周后,各組SD大鼠稱(chēng)重,腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉,麻醉后各組大鼠腹主動(dòng)脈抽血,置于加入抗凝劑的EP管中,經(jīng)離心機(jī)離心后后取血清,離心后通過(guò)固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)各組HIF-1α含量,應(yīng)用ELISA法酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度,檢測(cè)各組NO濃度。論文三:選用健康SPF級(jí)雄性SD大鼠50只,體重230±50g,由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供,采用隨機(jī)對(duì)照方法分為正常組(A)、模型組(B)、內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E),每組10只。各組大鼠給藥前稱(chēng)重,四肢皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素。劑量:85mg/kg,日一次,連續(xù)兩次成模。造模成功后,對(duì)內(nèi)關(guān)組(C)、列缺組(D)、非經(jīng)非穴組(E)大鼠分別進(jìn)行針刺,再連接電針儀,進(jìn)行電針治療。電針治療1周后,各組SD大鼠稱(chēng)重,腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉,活體分離大鼠左心室心肌,置于EP管中,放入-70℃冰箱,Western blot法檢測(cè)各組ASIC2、ASIC3蛋白表達(dá),Realtime RT-PCR法檢測(cè)各組ASIC2、ASIC3的基因表達(dá),并應(yīng)用2^(-△Ctof)得出各組大鼠ASIC2、ASIC3的基因表達(dá)多少。分離心肌后腹主動(dòng)脈快速抽血,置于加入抗凝劑的EP管中,經(jīng)離心機(jī)離心后取血清,通過(guò)ELISA法檢測(cè)肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)含量。所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間比較采用方差分析(ANOVA),多重比較用最小顯著性差異法(least significant difference,LSD)法,P0.05或P0.01認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:論文一:1.通過(guò)電鏡觀察電針前后各組心肌細(xì)胞形態(tài)的變化,心肌細(xì)胞經(jīng)HE染色后,在顯微光鏡下(400倍)發(fā)現(xiàn),異丙腎上腺素(ISO)模型的心肌缺血大鼠組心肌組織呈不同程度壞死,為多發(fā)性灶狀和片狀壞死,壞死中心部心肌細(xì)胞崩解消失,并有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)可見(jiàn)心肌細(xì)胞呈不同程度的空泡變性及顆粒變性,間質(zhì)水腫明顯,嚴(yán)重者可見(jiàn)小灶狀壞死,心肌壞死灶內(nèi)可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。電針內(nèi)關(guān)穴組觀察到心肌細(xì)胞空泡變性減少,炎性侵潤(rùn)較少,心肌細(xì)胞排列規(guī)整。列缺組、非經(jīng)非穴組無(wú)顯著差異。心肌組織石蠟切片后,每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(×400),每組共30個(gè)視野記錄陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及心肌細(xì)胞總數(shù),以凋亡指數(shù)(AI)反應(yīng)各組心肌細(xì)胞凋亡的情況,電針1周后,各組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05),電針內(nèi)關(guān)組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)降低更明顯(P0.01)。經(jīng)LSD法比較后發(fā)現(xiàn),各電針組間非經(jīng)非穴組與內(nèi)關(guān)組比較,有顯著性差異(P0.05)。2.采用原位TUNEL法,熒光素標(biāo)記后在熒光顯微鏡下(200倍)可觀察到異丙腎上腺素(ISO)模型組的心肌缺血大鼠組心肌組織,主要是細(xì)胞核棕黃色著染的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞較正常組增多,電針內(nèi)關(guān)穴組觀察到心肌細(xì)胞,主要是細(xì)胞核棕黃色著染的凋亡陽(yáng)性細(xì)胞減少。列缺組、非經(jīng)非穴組無(wú)顯著差異。3.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血清中TXB2升高,PGF1α含量降低(P0.05)。電針1周后,各組大鼠血清中TXB2降低,PGF1α含量升高,與模型組比較有顯著差異(P0.05),電針內(nèi)關(guān)組TXB2、PGF1α含量變化更明顯(P0.01)。經(jīng)LSD法比較后發(fā)現(xiàn),各電針組間的TXB2、PGF1α含量有顯著性差異(P0.05)。論文二:1.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血清中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)濃度值升高(P0.05)。電針1周后,各組大鼠血清中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)濃度值降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05),電針內(nèi)關(guān)組缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)濃度值變化更明顯(P0.01)。各電針組間非經(jīng)非穴組與內(nèi)關(guān)組比較,有顯著性差異(P0.05)。2.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血清中一氧化氮(NO)濃度值升高(P0.05)。電針1周后,各組大鼠血清中一氧化氮(NO)濃度值降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05),電針內(nèi)關(guān)組一氧化氮(NO)濃度值變化更明顯(P0.01)。各電針組間非經(jīng)非穴組與內(nèi)關(guān)組比較,有顯著性差異(P0.05)。論文三:1.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠血清中血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)含量升高(P0.01)。電針1周后,各組大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)含量降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05或P0.01),內(nèi)關(guān)組與其他電針組比較,各組大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)含量降低,有顯著性差異(P0.05或P0.01)。2.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)蛋白表達(dá)量明顯增高(P0.01)。電針1周后,各組大鼠心肌細(xì)胞中酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)蛋白表達(dá)量降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05或P0.01),內(nèi)關(guān)組與其他電針組比較,酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)蛋白表達(dá)量降低,有顯著性差異(P0.05或P0.01)。3.與正常對(duì)照組比較,模型組大鼠酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)基因表達(dá)量明顯增高(P0.01)。電針1周后,各組大鼠心肌細(xì)胞中酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)基因表達(dá)量降低,與模型組比較有顯著差異(P0.05或P0.01),內(nèi)關(guān)組與其他電針組比較,酸敏感離子通道(ASIC2、ASIC3)基因表達(dá)量降低,有顯著性差異(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1.電針“內(nèi)關(guān)”穴可有效改善心肌缺血大鼠心肌細(xì)胞的損傷和凋亡,降低血清中TXB2,升高PGF1α含量,抑制酸敏感離子通道開(kāi)放。2.電針“內(nèi)關(guān)”穴可有效降低心肌缺血大鼠血清中缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)、一氧化氮(NO)的含量,抑制酸敏感離子通道開(kāi)放。3.電針“內(nèi)關(guān)”穴可降低心肌缺血大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)含量。4.電針“內(nèi)關(guān)”穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表達(dá)量,從而抑制酸敏感離子通道開(kāi)放,有效改善心肌缺血大鼠心肌細(xì)胞的損傷。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R245

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：2080505