發(fā)布時間：2018-06-17 08:08

  本文選題：刺槐素 + 藥代動力學(xué)��； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究表明,刺槐素在體外易被UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(uridine diphosphoglucuronosyl transferases,UGTs)代謝,藥代動力學(xué)研究亦顯示其以原型形式在體內(nèi)暴露較少,而其代謝物較多,預(yù)示刺槐素的體內(nèi)生物利用度較低。運用Caco-2細(xì)胞模型,實驗結(jié)果顯示刺槐素的葡萄糖醛酸化代謝物很可能是乳腺癌耐藥蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP/Bcrp)及多藥耐藥蛋白家族(multidrug resistance proteins,MRPs/Mrps)的底物。然而,有關(guān)刺槐素的體內(nèi)處置缺乏系統(tǒng)研究;外排轉(zhuǎn)運蛋白BCRP與MRPs對刺槐素葡萄糖醛酸化代謝物的調(diào)控仍未在體內(nèi)得到驗證。因此,本實驗采用藥代動力學(xué)模型,腸灌流模型及組織分布模型開展對刺槐素體內(nèi)處置以及外排轉(zhuǎn)運蛋白對代謝物調(diào)控的研究。方法:1.刺槐素在FVB小鼠及基因敲除小鼠藥代動力學(xué)評價刺槐素以5 mg/kg分別灌胃FVB小鼠、Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠,于預(yù)設(shè)的不同時間點采血,血漿樣品處理后測定刺槐素及代謝物的濃度。使用WinNonLin 3.3非房室模型計算它們的藥代動力學(xué)參數(shù)。并比較野生型FVB小鼠、及基因敲除小鼠的藥動力學(xué)參數(shù),統(tǒng)計這些參數(shù)差異是否具有顯著性。2.FVB小鼠及基因敲除小鼠評價刺槐素的腸處置過程動物麻醉后,將膽管結(jié)扎,分別取其小腸及結(jié)腸灌流5 刺槐素溶液,每隔20 min收集灌流液。灌流結(jié)束后,將膽囊中的膽汁收集于Ep管中,并采取斷尾取血。將灌流液、膽汁和血漿樣品處理后,分別測定這些樣品中刺槐素及代謝物的濃度。計算小腸段及結(jié)腸段刺槐素的有效滲透系數(shù),并比較FVB小鼠及Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠樣品中代謝物濃度,判斷是否具有統(tǒng)計學(xué)差異。3.刺槐素在FVB小鼠及基因敲除小鼠的肝臟組織分布測定為考察刺槐素在小鼠體內(nèi)肝臟組織的分布水平,實驗使用FVB小鼠,Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠,單次口服5 mg/kg刺槐素,于給藥5 min后將小鼠麻醉,摘眼球取血于肝素化Ep管后立刻處死。隨后摘取肝臟制成勻漿液,測定刺槐素及代謝物的濃度。4.基因敲除對小鼠肝腸UGT酶活性的影響評價制備來源于FVB小鼠、Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠肝腸S9片段,采用濃度0.25 mg/kg的S9片段與刺槐素(濃度分別為2.5 μM,10μM,40 μM)在37℃水浴鍋上孵育。有機溶劑終止反應(yīng)后,測定反應(yīng)體系代謝物的量。5.統(tǒng)計學(xué)分析實驗所有數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。統(tǒng)計方法為Student's test或One-way ANOVE,顯著性標(biāo)準(zhǔn)α= 0.05。p0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:1.刺槐素在FVB小鼠及基因敲除小鼠的藥代動力學(xué)特征刺槐素給藥FVB小鼠后,達(dá)峰時間非�？�(5-15 min),但在血漿中的濃度較低。刺槐素能迅速生成刺槐素-7-葡萄糖醛酸苷(Aca-7-Glu)及刺槐素-5-葡萄糖醛酸苷(Aca-5-Glu),在血漿中這些代謝物為主要暴露形式。其中Aca-7-Glu的濃度是Aca-5-Glu的5-8倍。相比野生型FVB小鼠,Aca-7-Glu的曲線下面積(AUC)在Mrp2(-/-)小鼠中增加了 5倍(p0.05),在Bcrp1(-/-)小鼠中增加了 1倍(p0.05),而清除率(CL)顯著降低(p0.05)。Mrp2敲除導(dǎo)致Aca-7-Glu半衰期顯著增長(p0.05)。Aca-5-Glu 在 Bcrp1(-/-)小鼠中 AUC 顯著高于野生型 FVB 小鼠(p0.05)。2.刺槐素在FVB小鼠及基因敲除小鼠腸處置特征選取小腸及結(jié)腸灌流刺槐素溶液,FVB小鼠及基因敲除小鼠經(jīng)灌流實驗,有效滲透系數(shù)均大于1。在灌流液、血漿及膽汁中均能檢測到Aca-7-Glu,而Aca-5-Glu低于定量下限。在小腸灌流液中,Aca-7-Glu較多,而結(jié)腸中很少。在Bcrp1(-/-)小鼠或Mrp2(-/-)小鼠小腸灌流液中,Aca-7-Glu均顯著低于野生型FVB小鼠(p0.05),且在Bcrp1(-/-)小鼠結(jié)腸中檢測不到Aca-7-Glu。3.刺槐素在FVB小鼠及基因敲除肝臟組織分布特征在肝臟組織中檢測到大量刺槐素及Aca-7-Glu。刺槐素在Mrp2(-/-)小鼠肝臟中的濃度是FVB小鼠的0.5倍(p0.05),在血漿中無差異。Aca-7-Glu在Mrp2(-/-)小鼠肝臟中濃度是FVB小鼠的4倍(p0.05),在血漿中的濃度是FVB小鼠的8倍(p0.05)。在Bcrp1(-/-)小鼠肝臟及血漿中,刺槐素與Aca-7-Glu的濃度與FVB小鼠相比均無統(tǒng)計學(xué)差異。4.肝腸UGT酶在Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠的活性研究在Bcrp1(-/-)小鼠及Mrp2(-/-)小鼠中,低、中、高底物濃度下肝臟酶活性與野生型FVB小鼠相比均顯著降低(p0.05)。而小腸酶活性在低底物濃度下顯著升高(p0.05),在中濃度及高濃度下無差異。結(jié)論:1.刺槐素在血漿中主要以其代謝物形式存在,Bcrp及Mrp2敲除可致Aca-7-Glu的AUC顯著升高,CL顯著降低。2.刺槐素在小腸易代謝產(chǎn)生Aca-7-Glu。Bcrp及Mrp2敲除顯著減少Aca-7-Glu腸道外排。3.刺槐素給藥后,刺槐素及Aca-7-Glu在肝臟組織暴露水平較高。敲除Mrp2導(dǎo)致血漿及肝臟組織中Aca-7-Glu顯著升高。4.小鼠敲除Bctp及Mrp2后,肝臟代謝酶活性發(fā)生改變。
[Abstract]:Objective : To study the pharmacokinetics of locust in vivo and to determine whether it has significant difference in vivo and in vivo . In comparison with wild type FVB mice , Aca - 7 - Glu increased by 5 - fold ( P < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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