發(fā)布時(shí)間：2018-06-08 23:01

  本文選題：手機(jī)頻率 + 電磁輻射��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：目的：以900MHz手機(jī)頻率電磁輻射為干預(yù)因素，以大鼠肝臟組織為研究對(duì)象，以肝功能、組織形態(tài)學(xué)、抗氧化酶活性、Nrf2蛋白表達(dá)、DNA損傷及損傷修復(fù)蛋白ATM、γ-H2AX表達(dá)和大鼠肝細(xì)胞周期及凋亡的變化為主要觀(guān)測(cè)指標(biāo)，選擇西洋參膠囊和水飛薊賓膠囊作為實(shí)驗(yàn)用藥，觀(guān)察常見(jiàn)手機(jī)頻率的電磁輻射對(duì)大鼠肝損傷的可能機(jī)制和西洋參膠囊對(duì)其作用。 手機(jī)頻率電磁輻射對(duì)大鼠肝臟的影響（論文第一、二、三部分） 方法： 1造模及分組清潔級(jí)SD雄性大鼠50只，體重200~220g。隨機(jī)分正常組和輻射6d、12d、20d、30d組，共計(jì)5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只，共50只。除正常組不輻射外，其余各組均置輻射籠內(nèi)，打開(kāi)自動(dòng)開(kāi)關(guān)每天4小時(shí)，分別連續(xù)輻射6d、12d、20d和30d，每天除輻射外正常飼養(yǎng)。 2取材及檢測(cè)指標(biāo)各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食12小時(shí)，，10%水合氯醛腹腔麻醉后處死，股動(dòng)脈取血離心取血清測(cè)ALT、AST含量；取肝臟稱(chēng)重后將相同部位肝組織（約0.3×0.5×0.5cm3）置于4%多聚甲醛溶液固定，用于HE染色；比色法檢測(cè)肝組織MDA、SOD、GSH、GSH-PX含量；采取免疫組化及Western blot法檢測(cè)Nrf2及ATM、γH2AX蛋白表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組大鼠肝細(xì)胞周期和凋亡率。 結(jié)果： 1手機(jī)頻率電磁輻射對(duì)大鼠肝臟功能的影響 1各組大鼠一般情況觀(guān)察 各組大鼠的精神狀態(tài)、進(jìn)食水量、排泄、皮毛、活動(dòng)等情況無(wú)顯著差異。 1.2各組大鼠血清ALT、AST的比較 與正常組大鼠相比較，輻射30d大鼠血清AST水平顯著性增高，（P＜0.05），輻射6d、12d、20d組大鼠無(wú)顯著變化（P＞0.05）;與正常組大鼠相比較，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠血清ALT水平無(wú)顯著變化（P＞0.05）。 1.3各組大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)變化的比較 正常組肝組織肝小葉的結(jié)構(gòu)清晰完整，肝細(xì)胞界限明顯，大小基本相同，1~2個(gè)圓形或類(lèi)圓形細(xì)胞核位于細(xì)胞中間。輻射6d組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，可見(jiàn)細(xì)胞界限不清，區(qū)域性肝細(xì)胞變性，細(xì)胞核消失，細(xì)胞漿出現(xiàn)空泡樣變化，組織形態(tài)學(xué)異常。12d組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞分界清，個(gè)別細(xì)胞核固縮或消失，組織形態(tài)學(xué)異常。20d組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞分界清，個(gè)別細(xì)胞核固縮或消失。30d組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞分界清，出現(xiàn)較明顯的肝細(xì)胞核固縮現(xiàn)象，組織形態(tài)學(xué)異常。 2手機(jī)頻率電磁輻射對(duì)大鼠肝氧化損傷及抗氧化酶、Nrf2蛋白表達(dá)的影響 2.1各組大鼠肝組織MDA、SOD、GSH、GSH-PX含量的比較 與正常組大鼠相比，各輻射組大鼠肝組織MDA水平均顯著增高（P＜0.05）。輻射12d、30d組大鼠肝組織SOD含量均顯著減少（P＜0.05）；輻射6d、20d組大鼠SOD含量無(wú)顯著性變化（P＞0.05）。各輻射組大鼠肝組織GSH水平均顯著減少（P＜0.05）。輻射20d、30d組大鼠肝組織GSH-PX水平均顯著降低（P＜0.05）。 2.2免疫組化法檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞Nrf2蛋白表達(dá) 正常組大鼠肝細(xì)胞漿中有Nrf2表達(dá)，肝細(xì)胞核內(nèi)無(wú)明顯表達(dá)，各輻射組均細(xì)胞核有Nrf2表達(dá)。與正常組相比，輻射6d、12d、20d、30d，Nrf2在肝細(xì)胞的表達(dá)出現(xiàn)先增強(qiáng)，后稍弱再增強(qiáng)的變化，Nrf2蛋白表達(dá)由強(qiáng)到弱順序?yàn)椋狠椛?d＞12d＞30d＞20d＞正常組。輻射6d與12d之間差異不顯著；20d與30d之間差異不顯著。但輻射6d、12d與20d、30d之間差異顯著（P＜0.05）。 2.3Western blot檢測(cè)各組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá) 與正常組相比，各輻射組大鼠肝組織Nrf2蛋白表達(dá)平均灰度比值明顯增強(qiáng)（P＜0.01）；與免疫組化結(jié)果相符，輻射6d、12d、20d、30d，Nrf2在肝細(xì)胞的表達(dá)出現(xiàn)先增強(qiáng)，后稍弱再增強(qiáng)的變化，Nrf2蛋白表達(dá)由強(qiáng)到弱順序?yàn)椋狠椛?d＞12d＞30d＞20d＞正常組。 3手機(jī)頻率電磁輻射對(duì)大鼠肝細(xì)胞DNA損傷修復(fù)蛋白ATM、H2AX表達(dá)及細(xì)胞周期和凋亡率的影響 3.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ATM、γH2AX蛋白在各組大鼠肝組織的表達(dá) ATM蛋白在各組大鼠肝細(xì)胞核和細(xì)胞漿均有表達(dá)。與正常組大鼠相比，輻射12d、20d、30d組大鼠肝細(xì)胞核和細(xì)胞漿中表達(dá)均顯著增強(qiáng)（P＜0.01），隨著輻射時(shí)間的延長(zhǎng)，ATM蛋白表達(dá)平均光密度增加（P＜0.05）。 γH2AX在各組大鼠肝細(xì)胞核和細(xì)胞漿均有表達(dá)，與正常組大鼠相比，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠肝細(xì)胞核和細(xì)胞漿中表達(dá)均顯著增強(qiáng)（P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05；P＜0.01）；隨著輻射時(shí)間的延長(zhǎng)，γH2AX蛋白表達(dá)增加。 3.2Western blot檢測(cè)ATM、H2AX蛋白在大鼠肝組織的表達(dá) 與正常組大鼠比較，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠肝組織ATM蛋白的平均灰度比值逐漸增加（P＜0.01）。 與正常組大鼠比較，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠肝組織H2AX蛋白的平均灰度比值顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）。 3.3各組大鼠肝細(xì)胞周期的比較 G0/G1期細(xì)胞：與正常組相比，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠G0/G1期細(xì)胞比例均顯著增加（P＜0.01；P＜0.05；P＜0.01；P＜0.01）。 S期%細(xì)胞：與正常組相比，輻射6d、12d、20d組大鼠S期%細(xì)胞無(wú)顯著性變化（P＞0.05）；輻射30d大鼠S期%細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P＜0.05）。 G2/M期%細(xì)胞：與正常組相比，輻射6d、12d、20d組大鼠G2/M期%細(xì)胞均顯著性減少（P＜0.01）。 3.4各組大鼠肝細(xì)胞凋亡率的比較 與正常組相比，輻射6d、12d、20d、30d組大鼠肝細(xì)胞凋亡率極顯著增加（P＜0.01）；與輻射6d、12d和20d組相比，輻射30d組增加有顯著性差異（P＜0.05）。 結(jié)論： 1長(zhǎng)時(shí)間手機(jī)頻率的電磁輻射是一種致病因素，可導(dǎo)致肝組織形態(tài)學(xué)損傷，具有時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。 2手機(jī)頻率電磁輻射致大鼠肝損傷與抗氧化酶活性的變化及Nrf2表達(dá)變化具有相關(guān)性。 3手機(jī)頻率電磁輻射致大鼠肝組織形態(tài)學(xué)異常與肝細(xì)胞DNA損傷，激活修復(fù)相關(guān)的ATM和H2AX蛋白表達(dá)，影響細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。西洋參膠囊對(duì)手機(jī)頻率電磁輻射大鼠肝損傷的干預(yù)作用（論文第四部分） 方法： 1分組清潔級(jí)SD雄性大鼠40只，分為正常組、模型組（輻射12d組）、水飛薊賓組（輻射12d加水飛薊賓組）、西洋參膠囊組（輻射12d加西洋參膠囊組），各10只。 2取材及檢測(cè)指標(biāo)各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食12h，10%水合氯醛腹腔麻醉后處死，股動(dòng)脈取血離心取血清測(cè)ALT、AST含量；取肝臟稱(chēng)重后將相同部位肝組織（約0.3×0.5×0.5cm3）置于4%多聚甲醛溶液固定，用于HE染色；比色法檢測(cè)肝組織MDA、SOD、GSH、GSH-PX含量；采取免疫組化及/或Western blot法檢測(cè)Nrf2及ATM、γH2AX蛋白表達(dá)；采用流式細(xì)胞法檢測(cè)各組大鼠肝細(xì)胞周期和凋亡率。 結(jié)果： 1西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝臟組織形態(tài)學(xué)的干預(yù)作用 正常組大鼠肝組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，分界清晰，細(xì)胞的大小比較一致，核位于細(xì)胞中間，胞質(zhì)豐富。模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞核縮小或部分消失，核固縮明顯。與模型組相比，水飛薊賓組和西洋參膠囊組大鼠肝細(xì)胞萎縮明顯減輕，接近正常。 2西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝臟組織氧化損傷指標(biāo)的干預(yù)作用 與正常組比較，模型組MDA含量顯著升高（P＜0.05），SOD、GSH含量顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，水飛薊賓組MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD、GSH、GSH-PX含量顯著升高（P＜0.05）；西洋參膠囊組MDA含量顯著降低（P＜0.05），SOD、GSH含量顯著升高（P＜0.01，P＜0.05）。 3西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝臟組織Nrf2蛋白表達(dá)的干預(yù)作用 3.1免疫組化檢測(cè)結(jié)果 正常組僅在大鼠肝細(xì)胞漿中有Nrf2蛋白表達(dá)，肝細(xì)胞核內(nèi)無(wú)明顯表達(dá)，其余三組均主要在細(xì)胞核有Nrf2蛋白表達(dá)。與正常組比較，模型組大鼠肝臟組織Nrf2蛋白表達(dá)平均吸光度值顯著升高（P＜0.05），胞漿和胞核中均有表達(dá)。與模型組比較，水飛薊賓組和西洋參膠囊組大鼠肝臟組織Nrf2蛋白表達(dá)平均吸光度值均顯著降低（P＜0.05）。 3.2Western blot檢測(cè)結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠肝臟組織Nrf2蛋白表達(dá)平均灰度比值升高（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組和西洋參膠囊組大鼠肝臟組織Nrf2蛋白表達(dá)平均灰度比值均降低（P＜0.05，P＜0.01）。 4西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝臟組織ATM、H2AX的干預(yù)作用 與正常組比較，輻射后大鼠肝組織ATM平均灰度比值顯著增加，表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）。與模型組比較，水飛薊賓組大鼠肝組織ATM平均灰度比值顯著降低，表達(dá)減弱（P＜0.05）；西洋參膠囊組大鼠組織ATM平均灰度比值顯著降低，表達(dá)減弱（P＜0.01）。 與正常組比較，輻射后大鼠肝組織H2AX平均灰度比值顯著增加，表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組大鼠肝組織H2AX平均灰度比值顯著降低，表達(dá)減弱（P＜0.05）；西洋參膠囊組大鼠組織H2AX平均灰度比值顯著降低，表達(dá)減弱（P＜0.01）。 5西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的干預(yù)作用 5.1西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝細(xì)胞周期的干預(yù)作用 與正常組大鼠相比較，輻射后大鼠肝細(xì)胞G0/G1期%顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組大鼠G0/G1期肝細(xì)胞比例無(wú)顯著變化（P＞0.05）；西洋參膠囊組大鼠G0/G1期%肝細(xì)胞數(shù)極顯著降低（P＜0.01），接近正常。 與正常組大鼠相比較，輻射后大鼠肝細(xì)胞S期%無(wú)顯著性變化（P＞0.05）。與模型組比較，水飛薊賓組大鼠肝細(xì)胞S期%明顯降低（P＜0.01）；而西洋參膠囊組大鼠肝細(xì)胞S期%無(wú)顯著變化（P＞0.05）。 與正常組大鼠相比較，輻射后大鼠肝細(xì)胞G2/M期%極顯著減少（P＜0.01）。與模型組比較，水飛薊賓組大鼠肝細(xì)胞G2/M期%無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；西洋參膠囊組大鼠肝細(xì)胞G2/M期%極顯著增高（P＜0.01）。 5.2西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝細(xì)胞凋亡率的干預(yù)作用 與正常組大鼠相比較，輻射后大鼠肝細(xì)胞凋亡率顯著增加（P＜0.01）。與輻射組比較，水飛薊賓組大鼠無(wú)顯著差異（P＞0.05）；西洋參膠囊組大鼠肝細(xì)胞凋亡率顯著性降低（P＜0.01）。 結(jié)論： 1長(zhǎng)時(shí)間手機(jī)頻率電磁輻射是一種致病因素，可導(dǎo)致肝組織損傷。其致病特點(diǎn)歸屬六淫之溫?zé)嶂埃墒箽怅幒膫�。西洋參具有益氣養(yǎng)陰作用，主治氣陰不足之證。西洋參膠囊對(duì)輻射12d大鼠模型肝損傷具有干預(yù)作用。 2西洋參膠囊可改善肝組織形態(tài)學(xué)異常變化，與降低氧化損傷、降低Nrf2在肝細(xì)胞的表達(dá)、降低ATM和H2AX蛋白表達(dá)，影響細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡有關(guān)。 3西洋參膠囊對(duì)手機(jī)頻率電磁輻射所致肝損傷模型具有保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective: Taking the frequency electromagnetic radiation of 900MHz cell phone as the intervention factor, the liver function, histomorphology, antioxidant enzyme activity, Nrf2 protein expression, DNA damage and damage repair protein ATM, gamma -H2AX expression and the changes of rat liver cell cycle and apoptosis were the main indexes, and Western ginseng capsules and water were selected. As an experimental drug, the mechanism of electromagnetic radiation induced by electromagnetic radiation on rat liver and the action of Panax quinquefolium Capsule on it were observed.
Effect of cell phone frequency electromagnetic radiation on rat liver (part first, second, part three)
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本文編號(hào)：1997578