本文選題：慢性腎衰 + 微炎癥�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景 慢性腎臟病(CKD)己成為一個全球公共衛(wèi)生問題,其患病率逐年上升,全球范圍內(nèi)成年人的患病率達(dá)到10-16%。終末期腎病患者,尤其是接受透析治療的患者死亡率與同齡正常人相比顯著增加。而心血管疾病(CVD)是CKD患者的主要并發(fā)癥和其死亡原因,其死亡率約占終末期腎臟病(ESRD)患者總死亡人數(shù)的50%,是普通人群的20倍。 近年研究發(fā)現(xiàn),CKD隨著腎功能的減退,機(jī)體在沒有全身或局部顯性的臨床感染征象的情況下,出現(xiàn)持續(xù)低水平的炎癥反應(yīng),即微炎癥狀態(tài),主要表現(xiàn)為TNF-α和IL-6等炎癥因子水平和C-反應(yīng)蛋白(CRP)等正性急性時相反應(yīng)物輕度持續(xù)增多。其本質(zhì)是炎癥反應(yīng)失控。這種持續(xù)的微炎癥與傳統(tǒng)的由病原微生物引起的炎癥有本質(zhì)的區(qū)別,目前被統(tǒng)稱為代謝性炎癥。一些糖、脂、蛋白代謝產(chǎn)物在某些條件下成為誘導(dǎo)炎癥的激活劑。有研究發(fā)現(xiàn)微炎癥反應(yīng)是增加CKD病人CVD等并發(fā)癥發(fā)病風(fēng)險的主要原因之一,與患者預(yù)后不良密切相關(guān)。 大量研究表明巨噬細(xì)胞在急慢性炎癥中都發(fā)揮著重要的作用,巨噬細(xì)胞具有很強(qiáng)的可塑性可調(diào)節(jié)其表現(xiàn)型從而對環(huán)境信號做出快速有效的反應(yīng)。根據(jù)巨噬細(xì)胞的功能表現(xiàn)型分為兩種極性狀態(tài)：M1即“經(jīng)典活化型”巨噬細(xì)胞和M2型“轉(zhuǎn)化型”巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞由經(jīng)典的免疫途徑誘導(dǎo)激活(如LPS和IFN-γ),高表達(dá)iNOS,能促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生,如TNF-α、IL-6、MCP-1等。M2型巨噬細(xì)胞可由IL-4和IL-13刺激產(chǎn)生。M2型巨噬細(xì)胞通過合成抗炎細(xì)胞因子IL-10、IL-1誘導(dǎo)性受體和M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記分子(如CD206、 dectin-1)及內(nèi)吞清除作用在炎癥消退、組織修復(fù)及改善胰島素敏感性中起重要作用[11,12]。 幾乎所有的腎臟病都伴隨著由炎癥因子分泌和免疫細(xì)胞浸潤引起的腎臟炎癥[13]。然而慢性腎功能不全(CRF)機(jī)體存在的微炎癥反應(yīng)是否與巨噬細(xì)胞異�；罨嘘P(guān)尚不清楚。 我們用5/6腎切除大鼠作為慢性腎功能衰竭模型,觀察慢性腎衰大鼠巨噬細(xì)胞是否存在異�；罨约熬奘杉�(xì)胞對LPS和IL-4刺激的反應(yīng)性的變化。目的在于探討慢性腎衰對巨噬細(xì)胞活化的影響。 在正常大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)中,用相關(guān)濃度的尿毒癥血清刺激巨噬細(xì)胞,觀察巨噬細(xì)胞活化情況以及反應(yīng)性的變化。 在人細(xì)胞株相關(guān)實(shí)驗(yàn)中：我們用人相關(guān)濃度的尿毒癥血清刺激體外培養(yǎng)的THP-1巨噬細(xì)胞,觀察巨噬細(xì)胞是否存在異�；罨约熬奘杉�(xì)胞對LPS和IL-4刺激的反應(yīng)性的變化。為進(jìn)一步探討慢性腎衰對巨噬細(xì)胞活化的影響。 很多慢性病中(例如糖尿病、肥胖等)都存在線粒體損傷。AMPK/PGC-1α通路對線粒體再生合成以及功能起到了關(guān)鍵的作用。我們已有實(shí)驗(yàn)證明慢性腎衰大鼠巨噬細(xì)胞的線粒體結(jié)構(gòu)和功能存在損傷,且AMPK/PGC-1α通路可能受到抑制,為了明確巨噬細(xì)胞表型的變化是否與慢性腎衰條件下巨噬細(xì)胞表型的變化是否與巨噬細(xì)胞的線粒體結(jié)構(gòu)和功能存在損傷相關(guān),我們用AMPK激動劑AICAR預(yù)先作用巨噬細(xì)胞后,再用相關(guān)濃度的尿毒癥血清刺激巨噬細(xì)胞,觀察巨噬細(xì)胞對LPS和IL-4刺激的反應(yīng)性。 研究方法 第一部分：5/6腎切大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn) 一、二步法5/6腎切除建立慢性腎衰模型 1、腹腔注射麻醉大鼠：給大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉,俯臥位定于鼠臺上。 2、酒精消毒,于大鼠左腹部中1/3脊柱旁開2-3cm處行縱行切口,切口長度約為2-3cm。 3、依次切開皮膚和皮下組織,并剪開肌肉暴露腎臟,剝離腎包膜,用無損傷血管鉗夾住腎蒂,切除腎臟的上下極約占左腎的2/3,明膠海綿壓緊上下極創(chuàng)面止血,放松血管鉗,觀察創(chuàng)面不再滲血后還納腎臟回腹腔,逐層縫合肌層及皮膚,酒精消毒手術(shù)切口。縫合前,腹腔內(nèi)滴注青霉素注射液,預(yù)防感染。假手術(shù)組只做腎包膜剝離術(shù)。 4、一周后,在脊柱右側(cè)中1/3旁開2-3cm縱行切口(切口略高于左側(cè)),分離肌層,游離腎臟,無損傷血管鉗夾住腎蒂,4號絲線結(jié)扎腎蒂,切除右側(cè)腎臟,觀察有無出血,縫合肌層和皮膚,酒精消毒手術(shù)切口。假手術(shù)組只做腎包膜剝離術(shù)。 二、大鼠血、尿留取及處理 1、術(shù)后第12周,測定大鼠血壓后將大鼠放于代謝籠中,留取24小時尿。 2、腹腔注射麻醉大鼠：給大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉,仰臥位固定于鼠臺上。 3、腹主動脈采血。 三、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的提取和純度鑒定 1、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的提取 1)乙醚過度麻醉處死大鼠 2)75%酒精浸泡5分鐘消毒 3)將大鼠倒立提起,從腹腔一側(cè)稍下注入冰的DMEM培養(yǎng)液10ml,將大鼠仰臥輕柔大鼠腹部3分鐘,靜置7分鐘,無菌條件下打開大鼠腹腔,觀察腸管變扁且腹腔液為淡黃色時,抽吸腹腔液約7ml,800rpm離心5m,in,用DMEM培養(yǎng)液(含20%胎牛血清,青霉素100U/ml,鏈霉素100U/m1)調(diào)整細(xì)胞至所需濃度,37℃,5%CO2培養(yǎng)2小時換液,以去除少數(shù)未貼壁細(xì)胞。 2、流式細(xì)胞術(shù)鑒定大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的純度 收集細(xì)胞,經(jīng)固定破膜后,加入FITC熒光標(biāo)記的小鼠抗大鼠CD68直接標(biāo)記抗體避光孵育,用非免疫FITC熒光標(biāo)記的小鼠IgGl作同型對照,PBS/BSA(PH7.4含1%BSA的PBS)重懸細(xì)胞后,流式細(xì)胞儀檢測。 四、慢性腎功能不全對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活化及反應(yīng)性的影響 1、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)記物及對LPS刺激的反應(yīng)性的檢測 提取的Sham組和CRF組大鼠的腹腔巨噬細(xì)胞用LPS (1000ng/ml)刺激24小時,分為Sham組,CRF組,Sham+LPS組,CRF+LPS組。收集細(xì)胞,提取總RNA, RT-PCR檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞上清,按試劑盒說明,用ELISE方法檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)在細(xì)胞上清中的濃度,并以細(xì)胞總蛋白矯正。 2、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M2型標(biāo)記物及對IL-4刺激的反應(yīng)性的檢測 提取的Sham組和CRF組大鼠的腹腔巨噬細(xì)胞用IL-4(100ng/ml)刺激24小時,分為Sham組,CRF組,Sham+IL-4組,CRF+IL-4組。收集細(xì)胞,提取總RNA, RT-PCR檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞,Western Blotting檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)蛋白水平的表達(dá)。 五、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶活性(一氧化氮(NO)產(chǎn)量)和精氨酸合酶活性的檢測 1、慢性腎衰對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶活性(NO產(chǎn)量)的影響 提取的Sham組和CRF組大鼠的腹腔巨噬細(xì)胞用LPS (1000ng/ml)刺激24小時,分為Sham組,CRF組,Sham+LPS組,CRF+LPS組。收集細(xì)胞上清,按試劑盒說明,用Griess reagent方法檢測細(xì)胞上清中NO的濃度,并以細(xì)胞總蛋白矯正。 1、慢性腎衰對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞精氨酸合酶活性的影響 提取的Sham組和CRF組大鼠的腹腔巨噬細(xì)胞用IL-4(100ng/ml)刺激24小時,分為Sham組,CRF組,Sham+IL-4組,CRF+IL-4組。收集細(xì)胞,按試劑盒說明,檢測精氨酸合酶活性,并以細(xì)胞總蛋白矯正。 六、統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均代表3次以上重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,所有統(tǒng)計分析由統(tǒng)計軟件SPSS16.0完成。與常數(shù)項(xiàng)比較,采用單樣本t檢驗(yàn)；方差齊的多個樣本均數(shù)的比較采用One-Way ANOVA,兩兩比較采用LSD法；方差不齊的多個樣本均數(shù)的比較采用Welch法,兩兩比較采用Dunnett's T3法。p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 第二部分：尿毒癥血清對巨噬細(xì)胞活化及反應(yīng)性的影響 一、大鼠正常血清和尿毒癥血清的制備 將Sham組和CRF組大鼠分別腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉,仰臥位固定于鼠臺上。腹主動脈采血,4℃3000rpm離心10min,抽取上層血清分裝,-80℃保存?zhèn)溆谩?二、尿毒癥血清對正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化及反應(yīng)性的影響 1、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)記物及對LPS刺激的反應(yīng)性的檢測 正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分別20%的大鼠正常血清和20%大鼠尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,再用LPS(1000ng/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, real-timePCR檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞上清,按試劑盒說明,用ELISE方法檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)在細(xì)胞上清中的濃度,并以細(xì)胞總蛋白矯正。 2、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M2型標(biāo)記物及對IL-4刺激的反應(yīng)性的檢測 正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分別20%的大鼠正常血清和20%大鼠尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,再用IL-4(100ng/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, real-timePCR檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞,Western Blotting檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)蛋白水平的表達(dá)。 三、人對照血清和尿毒癥血清的制備 尿毒癥血清來自本科住院未行血液透析或腹膜透析的患者,且年齡在18～45歲之間,除外糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等繼發(fā)性因素導(dǎo)致的尿毒癥,正常人對照組血清采自自愿者和本科住院的單純血尿患者(腎功能正常、血脂、血壓正常),要求年齡與尿毒癥相仿。留取全血標(biāo)本,4℃3000rpm離心10min,抽取上層血清分裝,-80℃保存?zhèn)溆谩?四、尿毒癥血清對人巨噬細(xì)胞株活化及反應(yīng)性的影響 1、THP-1人單核細(xì)胞株的培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化 THP-1人單核細(xì)胞株采用美國ATCC細(xì)胞株。復(fù)蘇后在37℃,5%CO2,20%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng),傳代。細(xì)胞狀態(tài)良好時接種于培養(yǎng)板,每48小時換一次液,待細(xì)胞長至約80-90%,用乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)誘導(dǎo)細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。換用不含F(xiàn)BS的DMEM中繼續(xù)培養(yǎng),使細(xì)胞處于同步生長狀態(tài),然后用于實(shí)驗(yàn)。 2、人巨噬細(xì)胞株M1型標(biāo)記物及對LPS刺激的反應(yīng)性的檢測 人巨噬細(xì)胞株分別20%的人正常血清和20%人尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,再用LPS (1000ng/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, RT-PCR檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA的表達(dá)。 3、人巨噬細(xì)胞株M2型標(biāo)記物及對IL-4刺激的反應(yīng)性的檢測 人巨噬細(xì)胞株分別20%的人正常血清和20%人尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,再用IL-4(100ng/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, real-time PCR檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞,Western Blotting檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)蛋白水平的表達(dá)。 五、統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均代表3次以上重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,所有統(tǒng)計分析由統(tǒng)計軟件SPSS16.0完成。與常數(shù)項(xiàng)比較,采用單樣本t檢驗(yàn)；方差齊的多個樣本均數(shù)的比較采用One-Way ANOVA,兩兩比較采用LSD法；方差不齊的多個樣本均數(shù)的比較采用Welch法,兩兩比較采用Dunnett's T3法。p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 第三部分、AMPK激動劑(AICAR)對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化的干預(yù)作用 一、AICAR對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)記物及對LPS刺激的反應(yīng)性的干預(yù)作用的檢測 正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞用AICAR作用4小時,再分別20%的大鼠正常血清和20%大鼠尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,最后用LPS(1000ng/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, real-time PCR檢測檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、 MCP-1)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞上清,按試劑盒說明,用ELISE方法檢測M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)在細(xì)胞上清中的濃度,并以細(xì)胞總蛋白矯正。 二、AICAR對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞M2型標(biāo)記物及對IL-4刺激的反應(yīng)性的干預(yù)作用的檢測 正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞用AICAR作用4小時,再分別20%的大鼠正常血清和20%大鼠尿毒癥血清培養(yǎng)24小時,最后用IL-4(100g/ml)刺激24小時,收集細(xì)胞,提取總RNA, real-time PCR檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA的表達(dá)。收集細(xì)胞,Western Blotting檢測M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)蛋白水平的表達(dá)。 三、統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均代表3次以上重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,所有統(tǒng)計分析由統(tǒng)計軟件SPSS16.0完成。與常數(shù)項(xiàng)比較,采用單樣本t檢驗(yàn)；方差齊的多個樣本均數(shù)的比較采用One-Way ANOVA,兩兩比較采用LSD法；方差不齊的多個樣本均數(shù)的比較采用Welch法,兩兩比較采用Dunnett's T3法。p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 第一部分：5/6腎切大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn) 一、腎衰大鼠模型的確立 在二步法5/6腎切除術(shù)后的第12周,采集大鼠尿液和血液測定血肌酐和肌酐清除率。在第12周時,腎衰組大鼠體重和肌酐清除率與假手術(shù)組相比顯著減少(p0.05),而血肌酐顯著升高(p0.001)。 二、流式細(xì)胞術(shù)鑒定大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的純度 用流式細(xì)胞術(shù)鑒定大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的純度為90.74%,同型對照為1.6%。 三、慢性腎功能不全對正常大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活化及反應(yīng)性的影響 1、慢性腎衰大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞易向M1型轉(zhuǎn)化 CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)與Sham組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)；且CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞對LPS刺激反應(yīng)性與Sham組相比明顯增強(qiáng)(p0.05), CRF+LPS組M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)比Sham+LPS組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)。 2、慢性腎衰大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化明顯抑制 CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞對IL-4刺激反應(yīng)性與Sham組相比明顯減弱(p0.05), CRF+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA表達(dá)比Sham+IL-4組相比明顯減弱(p0.05), CRF+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)的蛋白表達(dá)比Sham+IL-4組相比明顯減弱(p0.05)。 四、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶活性(一氧化氮(NO)產(chǎn)量)和精氨酸合酶活性的檢測 1、 CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞一氧化氮合酶活性與Sham組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)；且CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞對LPS刺激反應(yīng)性與Sham組相比明顯增強(qiáng)(p0.05),CRF+LPS組一氧化氮合酶活性比Sham+LPS組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)。 2、CRF組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞對IL-4刺激反應(yīng)性與Sham組相比明顯減弱(p0.05), CRF+IL-4組精氨酸合酶活性比Sham+IL-4組相比明顯減弱(p0.05)。 結(jié)論 慢性腎衰大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞易向M1型轉(zhuǎn)化,而向M2型轉(zhuǎn)化明顯抑制。 第二部分：尿毒癥血清對巨噬細(xì)胞活化及反應(yīng)性的影響 一、尿毒癥血清對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化及反應(yīng)性的影響 1、尿毒癥血清作用下大鼠腹腔巨噬細(xì)胞易向M1型轉(zhuǎn)化 20%尿毒癥血清組巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)與20%正常血清組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)；且20%尿毒癥血清組大鼠腹腔來源巨噬細(xì)胞對LPS刺激反應(yīng)性與20%正常血清組相比明顯增強(qiáng)(p0.05),20%尿毒癥血清+LPS組M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)比20%正常血清+LPS組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)。 2、尿毒癥血清作用下大鼠腹腔巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化明顯抑制 20%尿毒癥血清組大鼠腹腔巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞對IL-4刺激反應(yīng)性與20%正常血清組相比明顯減弱(p0.05),20%尿毒癥血清+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA表達(dá)比20%正常血清+IL-4組相比明顯減弱(p0.05),20%尿毒癥血清+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)的蛋白表達(dá)比20%正常血清+IL-4組相比明顯減弱(p0.05)。 二、尿毒癥血清對人巨噬細(xì)胞株活化及反應(yīng)性的影響 1、人THP-1細(xì)胞用乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)誘導(dǎo)細(xì)胞分化為人巨噬細(xì)胞株。 1、尿毒癥血清作用下人巨噬細(xì)胞株易向M1型轉(zhuǎn)化 20%尿毒癥血清組人巨噬細(xì)胞株M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)與20%正常血清組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)；且20%尿毒癥血清組人巨噬細(xì)胞株對LPS刺激反應(yīng)性與20%正常血清組相比明顯增強(qiáng)(p0.05),20%尿毒癥血清+LPS組M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)比20%正常血清+LPS組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)。 2、尿毒癥血清作用下人巨噬細(xì)胞株向M2型轉(zhuǎn)化明顯抑制 20%尿毒癥血清組人巨噬細(xì)胞株對IL-4刺激反應(yīng)性與20%正常血清組相比明顯減弱(p0.05),20%尿毒癥血清+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA表達(dá)比20%正常血清+IL-4組相比明顯減弱(p0.05),20%尿毒癥血清+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)的蛋白表達(dá)比20%正常血清+IL-4組相比明顯減弱(p0.05)。 結(jié)論 尿毒癥血清作用下巨噬細(xì)胞易向M1型轉(zhuǎn)化,而向M2型轉(zhuǎn)化明顯抑制。 第三部分：AMPK激動劑(AICAR)對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞活化的干預(yù)作用 一、20%尿毒癥血清+AICAR+LPS組M1型標(biāo)記物(TNF-α、IL-6、MCP-1)的mRNA以及蛋白表達(dá)與20%尿毒癥血清+LPS組相比明顯減弱(p0.05)。 二、20%尿毒癥血清+AICAR+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1、IL-10)的mRNA表達(dá)比20%尿毒癥血清+IL-4組相比明顯減弱(p0.05),20%尿毒癥血清+AICAR+IL-4組M2型標(biāo)記物(CD206、dectin-1)的蛋白表達(dá)比20%尿毒癥血清+IL-4組相比明顯增強(qiáng)(p0.05)。 結(jié)論 AMPK激動劑(AICAR)可逆轉(zhuǎn)尿毒癥血清對巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化的促進(jìn)和M2型轉(zhuǎn)化抑制的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R692

【共引文獻(xiàn)】

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1 孫真;賈生美;馮祥汝;陳義龍;翟新新;沈雪飛;張俊輝;王文東;楊振國;盧強(qiáng);;鯉魚外周血白細(xì)胞TLR5M全長cDNA克隆及序列分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年09期

2 邵小娟;張艷梅;魏艷玲;樊麗琳;劉卉;楊均;邢寒陽;崔紅莉;顏綦先;唐雯;孫文靜;陳東風(fēng);;NASH患者脂肪組織巨噬細(xì)胞計數(shù)的變化[J];實(shí)用肝臟病雜志;2013年06期

3 李瑩;張興毅;;TLR4與腦血管神經(jīng)疾病的研究進(jìn)展(綜述)[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2013年06期

4 Ling Zhang;Cheng-Cai Wang;;Inflammatory response of macrophages in infection[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2014年02期

5 朱小虎;劉蘭;黃楊;;超聲心動圖評價心外膜脂肪組織與2型糖尿病并發(fā)冠心病的相關(guān)性[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年02期

6 倪宇;楊壘;楊亦彬;;遵義市縣級居民慢性腎臟病知曉率調(diào)查分析[J];貴州醫(yī)藥;2014年05期

7 武曉春;方奕;;119例合并高血壓的中重度慢性腎臟病患者心臟彩超評價心臟結(jié)構(gòu)和功能的臨床研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2013年10期

8 趙亞;車樹強(qiáng);徐英;;慢性腎衰竭微炎癥狀態(tài)的研究進(jìn)展[J];湖南中醫(yī)雜志;2013年12期

9 孫響波;于妮娜;張法榮;;慢性腎衰竭微炎癥狀態(tài)與細(xì)胞因子相關(guān)性探討[J];湖南中醫(yī)雜志;2013年10期

10 張?zhí)禅P;王大新;;高密度脂蛋白膽固醇亞型抗動脈粥樣硬化的研究進(jìn)展[J];臨床心血管病雜志;2014年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 趙敏;高脂飲食對大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥的影響及低脂膳食干預(yù)效果研究[D];華中科技大學(xué);2013年

2 黎黎;替米沙坦激活過氧化物酶體增殖物活化受體δ改善小鼠胰島素抵抗及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 戴菱菱;巨噬細(xì)胞的替代激活抑制脂毒性引起的巨噬細(xì)胞死亡[D];中南大學(xué);2013年

4 歷志;Notch信號調(diào)控巨噬細(xì)胞參與心梗重塑的作用和分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 趙敏;高脂飲食對大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和炎癥的影響及低脂膳食干預(yù)效果研究[D];華中科技大學(xué);2013年

6 蘇莎莎;Mir-10b調(diào)節(jié)K1f4介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化并抑制T_H1T_H17細(xì)胞反應(yīng)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐小云;氨基末端B型腦鈉肽前體在急性呼吸窘迫綜合征的應(yīng)用價值探討[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 趙瓊;TLR-1，TLR-2在大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷肺組織中的表達(dá)及其作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

3 黃霞梅;Toll樣受體基因多態(tài)性與HBV相關(guān)性肝炎、肝硬化、肝癌的遺傳易感性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

4 陳瑞敏;冠脈病變程度與腎小球?yàn)V過率的相關(guān)性分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

5 邵小娟;皮下及網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換在NAFLD發(fā)生過程中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 彭艷;香煙煙霧誘導(dǎo)的慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中Derlin-1的表達(dá)[D];南華大學(xué);2013年

7 廖碧紅;不同劑量瑞舒伐他汀在ACS患者PCI圍手術(shù)期的療效比較[D];暨南大學(xué);2013年

8 陳玉玲;慢性腎衰大鼠脂肪組織RAS活化對脂肪組織巨噬細(xì)胞表型改變的影響及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 李江;糖尿病腎病進(jìn)展的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 李國照;益氣溫陽活血利水方治療慢性充血性心力衰竭及對NT-ProBNP影響的臨床研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2013年

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本文編號：1975048