泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj(luò)方對糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及對乙酰肝素酶影響的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間：2018-05-28 16:56
本文選題：糖尿病腎病 + 泄?jié)峤舛?/strong>�。� 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文
【摘要】：目的：本研究通過高糖高脂飼料聯(lián)合STZ復(fù)制糖尿病大鼠動物模型，并應(yīng)用泄?jié)峤舛尽⒒钛ńj(luò)方對模型進(jìn)行干預(yù)性治療，通過觀察大鼠的生化指標(biāo)以及腎組織Hpa的表達(dá)，探討泄?jié)峤舛�、活血通絡(luò)方對糖尿病腎病的治療作用及其可能機(jī)制，從而為臨床上治療糖尿病腎病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法：選用健康雄性Sprague-Dauley大鼠85只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，分別檢測血糖和尿蛋白均為陰性者用于實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為正常組(NG)15只，造模組70只。正常組給予普通飼料，造模組給予高糖高脂飼料。12周后，造模組大鼠禁食不禁水，一次性腹腔注射STZ(35mg/kg)。正常組大鼠注射相應(yīng)體積的枸櫞酸緩沖液。72h后尾靜脈取血測隨機(jī)血糖，血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功。造模過程中死亡兩只，另有一只血糖未達(dá)標(biāo)，均予以剔除。將成模大鼠隨機(jī)分為模型組(MG)，中藥組(ZG)，西藥（厄貝沙坦）組(XG),加方組（中藥聯(lián)合厄貝沙坦）組(JG)。各治療組給予相應(yīng)藥物灌胃，正常組及模型組灌服相當(dāng)量的生理鹽水，各組共給藥16周。分別于給藥第4周、第8周、第12周監(jiān)測體重、血糖和尿蛋白。灌胃后第16周末，禁食12h后，留取各組大鼠24小時(shí)尿液，測定24小時(shí)尿蛋白定量。麻醉狀態(tài)下腹主動脈取血，分離血清，測定各生化指標(biāo)并留取腎組織進(jìn)行光鏡、電鏡、免疫組化、Real-timePCR檢測。 結(jié)果： 1實(shí)驗(yàn)大鼠的一般狀況 正常組大鼠飲食正常，尿量正常，肌肉豐滿，毛色光澤，反應(yīng)靈敏。其余各組大鼠在注射STZ后逐漸出現(xiàn)多飲、多食、多尿癥狀，實(shí)驗(yàn)最后一周，與正常組相比，造模組及各給藥組大鼠反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，體型偏小，模型組大鼠的癥狀比各給藥組大鼠的癥狀嚴(yán)重,中藥組和西藥組大鼠的癥狀比加方組的癥狀嚴(yán)重。在實(shí)驗(yàn)過程中，不同階段均有大鼠死亡情況。注射STZ后72小時(shí)之內(nèi)，2只大鼠死亡，1只大鼠血糖未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)，原因可能與大鼠個(gè)體差異和操作有關(guān)，予以剔除。給藥期間模型組死亡4只，中藥組死亡1只，西藥組死亡2只，，死亡原因可能是由于糖代謝障礙所致血糖過高最終導(dǎo)致多臟器衰竭。中藥組2只，西藥組1只，加方組1只血糖緩解予以剔除。 2各組大鼠體重、右腎重、肥大指數(shù)（右腎重/體重）的比較 與正常組相比，模型組和各治療組的體重明顯減輕（P0.05），模型組與各治療組及各治療組之間體重?zé)o明顯的差異（P0.05）；右腎重各組之間無顯著性差異（P0.05）；與正常組相比，模型組和各治療組的肥大指數(shù)明顯偏高（P0.05），模型組與各治療組及各治療組之間無顯著性差異（P0.05）。 3各組大鼠糖化血紅蛋白的比較 與正常組相比，模型組及各治療組糖化血紅蛋白明顯升高（P0.05），加方組和中藥組低于西藥組和模型組（P0.05），加方組和中藥組之間無明顯差異（P0.05），模型組和西藥組之間無明顯差異（P0.05）。 4各組大鼠24h尿蛋白定量 各治療組24小時(shí)尿蛋白定量水平與正常組及模型組相比均有明顯差異（P0.05），比正常組明顯升高，比模型組明顯降低；各治療組之間比較，加方組24小時(shí)尿蛋白定量低于中藥組和西藥組（P0.05）；西藥組和中藥組之間沒有明顯差異（P0.05）。 5各組大鼠血清總蛋白和白蛋白的比較 各治療組血清總蛋白和白蛋白水平與正常組及模型組相比均有明顯差異（P0.05），比正常組降低，比模型組升高；各治療組之間比較，加方組血清總蛋白和白蛋白高于中藥組和西藥組（P0.05）；西藥組和中藥組之間沒有明顯差異（P0.05）。 6各組大鼠腎功能的比較 正常組、模型組和各治療組大鼠之間血清肌酐和尿素氮水平無明顯差異（P0.05）。 7各組大鼠血脂的比較 與正常組相比，模型組和各治療組大鼠膽固醇和甘油三酯水平比正常組大鼠明顯增高(P0.05)，與模型組相比，各治療組膽固醇和甘油三酯水平顯著下降(P0.05)；各治療組之間相比，加方組膽固醇和甘油三酯水平均低于中藥組和西藥組（P0.05）；西藥組和中藥組之間相比沒有明顯差異（P0.05）。 8腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察 8.1光鏡觀察 正常組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球結(jié)構(gòu)完整清晰，未見明顯肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜正常無增厚，系膜及其基質(zhì)無明顯改變。模型組大鼠可見腎小球明顯肥大，腎小球毛細(xì)血管基底膜明顯增厚。各治療組間比較，加方組病理表現(xiàn)略輕于中藥組和西藥組，中藥組和西藥組之間無明顯區(qū)別。 8.2電鏡觀察 正常組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰正常，腎小球毛細(xì)血管基底膜均勻,未見增厚，足突分布均勻，未見融合及缺失；模型組大鼠可見腎小球基底膜顯著增厚，厚薄不均勻，外突呈丘狀，足突廣泛融合，血管內(nèi)皮細(xì)胞高度增生。各治療組均有不同程度的病理改變。 8.3Real-Time PCR 與正常組相比，造模組大鼠腎組織中Hpa表達(dá)量明顯增加（P0.05）；與模型組相比，各治療組Hpa的表達(dá)量明顯減弱（P0.05）；治療各組間比較，加方組Hpa的表達(dá)量少于中藥組和西藥組（P0.05），中藥組和西藥組無顯著差異（P0.05）。 8.4免疫組化 正常組未見Hpa陽性染色的明顯表達(dá)，或者少量表達(dá)；與正常組相比，造模組大鼠腎小球中Hpa表達(dá)量明顯增加（P0.05）；與模型組相比，各治療組Hpa的表達(dá)量明顯減弱（P0.05）；治療各組間比較，加方組Hpa的表達(dá)量少于中藥組和西藥組（P0.05），中藥組和西藥組相比無顯著差異（P0.05）。 結(jié)論： 1泄?jié)峤舛�、活血通絡(luò)中藥可降低DN大鼠的HbA1c、TC、TG，減少尿蛋白的排泄，提高TP和ALB,改善糖尿病腎病大鼠腎臟病理損害，延緩DN的進(jìn)展。 2泄?jié)峤舛�、活血通絡(luò)中藥能夠降低Hpa表達(dá)，延緩DN進(jìn)展，從而達(dá)到對DN大鼠腎臟保護(hù)作用。 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，中藥組和西藥組治療效果相當(dāng)，加方組的治療效果優(yōu)于單用中藥和單用西藥組，對臨床應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。
[Abstract]:Objective: in this study, the animal model of diabetic rats was replicated by high glucose and high fat diet combined with STZ, and the treatment of the model was used to treat the model with relieving turbidity and detoxification and activating blood circulation and collaterals. By observing the biochemical indexes of the rats and the expression of Hpa in the kidney tissue, the therapeutic effect and possible mechanism of the recipe for relieving turbidity and detoxification and activating blood circulation and collaterals on diabetic nephropathy were discussed. So as to provide experimental basis and theoretical basis for clinical treatment of diabetic nephropathy.
Methods: 85 healthy male Sprague-Dauley rats were selected and the normal diet was fed for one week. The blood sugar and urine protein were tested respectively. The normal group was randomly divided into 15 normal group (NG) and the model group was 70. The normal group was given ordinary feed and the model group was given high glucose and high fat feed for.12 weeks, and the model rats were fasting and could not help water. Secondary intraperitoneal injection of STZ (35mg/kg). The rats in the normal group were injected with the corresponding volume of citric acid buffer.72h after the injection of the caudal vein to measure blood glucose, and the blood glucose was more than 16.7mmol/L for DM. Two deaths were made during the process of modeling, and the other one was eliminated. The rat model rats were randomly divided into model group (MG), Chinese medicine group (ZG), Western Medicine (EL). The group (XG) and the group (JG) group were given the corresponding medicine in each group. The normal group and the model group were given a considerable amount of saline. Each group was given a total of 16 weeks. The body weight, blood sugar and urine protein were monitored for fourth weeks, eighth weeks and twelfth weeks respectively. After sixteenth weeks of fasting, 24 small rats were left after fasting 12h. In the urine, the urine protein was measured in 24 hours. Under the anesthetic state, the abdominal aorta was taken blood, the serum was separated, the biochemical indexes were measured and the renal tissue was retained for light microscopy, electron microscopy, immunohistochemical and Real-timePCR detection.
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本文編號：1947479
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