本文選題：腎臟 + 纖維化��； 參考：《吉林大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景及目的:近年來,在社會經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的社會背景下,慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)已成為全球性威脅公眾健康的一種常見疾病。在我國,CKD具有龐大的人群及高患病率。而腎小管間質(zhì)纖維化(renal tubular interstitial fibrosis,TIF)是多數(shù)慢性腎臟疾病進(jìn)展為終末期腎衰竭共同的病變過程及最后通路。TIF是以正常的腎間質(zhì)和腎小管結(jié)構(gòu)消失而大量的細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix,ECM)聚集及肌成纖維細(xì)胞大量增殖為特征的病理過程,它幾乎存在于所有腎臟疾病中并決定腎臟損傷程度及預(yù)后。對于TIF所致的終末期腎臟病,病人只能依靠透析治療來維持生命,或接受腎移植治療,對個人、家庭及整個社會均造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此,如何能延緩甚至逆轉(zhuǎn)TIF,探索其發(fā)病機(jī)制并尋找干預(yù)靶點來延緩腎功能進(jìn)展、改善CKD患者的預(yù)后已成為需要迫切解決的公共問題。但是,到目前為止,TIF的發(fā)病機(jī)制尚未闡明,TIF的確切來源目前仍不清楚,發(fā)生TIF時腎臟的損傷是否能修復(fù)甚至逆轉(zhuǎn)及怎樣逆轉(zhuǎn)尚存在爭議,針對其治療亦缺乏有效手段。大量的研究表明,腎小管在受損時具有修復(fù)功能,但腎臟的小管間質(zhì)纖維化能否逆轉(zhuǎn)修復(fù)一直不清楚。有關(guān)嚙齒類動物的單側(cè)輸尿管梗阻模型(unilateral ureteral obstruction,UUO)已被成功構(gòu)建并廣泛應(yīng)用于腎間質(zhì)纖維化等腎損傷的研究中。有關(guān)研究表明,解除單側(cè)輸尿管梗阻也就是將梗阻再通后(relief of unilateral ureteral obstruction,R-UUO),腎實質(zhì)具有再生、修復(fù)傾向。目前為止,大多數(shù)研究均集中在UUO模型,少量關(guān)于R-UUO的研究也是有關(guān)于鼠類的研究。既往有關(guān)腎小管的損傷修復(fù)所利用鼠類的研究,腎臟大小與人相差較大,且損傷前后不同個體之間差異也很大。為此,本研究試圖構(gòu)建單側(cè)輸尿管梗阻-再通的大動物模型,充分模擬人類梗阻性腎病的疾病狀態(tài),通過腎活檢的方法探討同一動物、同一腎臟不同時間節(jié)點損傷前后的變化,旨在明確腎小管間質(zhì)纖維化能否修復(fù)以及修復(fù)的時間節(jié)點。材料與方法:首先,我們通過反復(fù)實驗論證,成功構(gòu)建了大動物豬的單側(cè)輸尿管梗阻-再通模型:采用3月齡大小的雌性廣西巴馬小型豬,體重約8-10公斤。術(shù)前準(zhǔn)備,術(shù)中給予聯(lián)合麻醉并進(jìn)行無菌手術(shù)操作造模。造模時單側(cè)輸尿管梗阻采用聚乙烯片包繞、手術(shù)線結(jié)扎法,解除梗阻時,遵循同樣操作并去除包繞的聚乙烯片和手術(shù)線。實驗豬經(jīng)過單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)后,腎臟大體結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)顯著變化。與正常腎臟比較,梗阻側(cè)腎臟體積增大、表面粗糙,同時出現(xiàn)了腎積水和腎盂擴(kuò)張,血運減少。此外,梗阻上端輸尿管迂曲、增粗、血運減少,而再通后的輸尿管變直、變細(xì),基本恢復(fù)至正常輸尿管形態(tài)。此模型在梗阻時腎臟和輸尿管的大體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了顯著變化,而再通后顯著恢復(fù),造模成功。其次,在本研究的前期工作中,為了初步摸索豬的單側(cè)輸尿管梗阻-再通后其腎損傷可能修復(fù)的時間節(jié)點,我們進(jìn)行了預(yù)實驗并將實驗用小型豬分為梗阻2周組及梗阻3周組,通過腎活檢組織病理染色法評估腎損傷程度。結(jié)果表明:實驗豬在梗阻2周時,腎臟間質(zhì)出現(xiàn)了較為嚴(yán)重的纖維化損傷。而梗阻3周時,腎臟出現(xiàn)了更為嚴(yán)重的大量不可逆的纖維化改變。因此,為了能觀察到損傷后的可逆性修復(fù),我們將梗阻時間點選擇為5天,7天和10天。此外,梗阻10天的時間段較長,腎臟需要更長時間的修復(fù),因此觀察梗阻10天再通后的時間點也適當(dāng)延長至56天。接下來,為了進(jìn)一步研究實驗豬梗阻-再通后損傷是否能夠修復(fù)和具體能夠修復(fù)的時間節(jié)點,我們又將實驗用小型豬分為三組:每組6頭豬。一組:梗阻5天(UUO5d)、再通7天、再通14天、再通21天;二組:梗阻7天(UUO7d)、再通7天、再通14天、再通21天;三組:梗阻10天(UUO10d)、再通14天、再通28天、再通56天。每組5個時間點,取梗阻前0天作為正常對照。分別從功能、組織結(jié)構(gòu)和蛋白分子水平三個層面評估不同時間點腎臟損傷-修復(fù)程度:留取前腔靜脈及梗阻側(cè)和對側(cè)分腎靜脈血,檢測其血清肌酐水平來評估腎功能;通過開放式腎活檢法留取腎組織,半定量評分法評估腎臟病理損傷-修復(fù)情況;免疫印跡法測定腎小管間質(zhì)纖維化標(biāo)志物α-SMA、vimentin和上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)水平。結(jié)果:梗阻5天、7天和10天時,與梗阻前相比,血清肌酐水平顯著升高,腎組織出現(xiàn)不同程度的病理損傷,腎臟α-SMA、vimentin表達(dá)顯著增高而E-cadherin表達(dá)顯著下降,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。梗阻5天和7天再通后,隨著再通時間的延長,血清肌酐水平較梗阻時平穩(wěn)下降,腎組織損傷在組織病理學(xué)上表現(xiàn)為完全恢復(fù)和部分恢復(fù),α-SMA、vimentin表達(dá)下調(diào)而E-cadherin表達(dá)上調(diào)(p0.05)。而梗阻10天再通后血肌酐在一段時間的降低后又反彈性的增高,腎組織損傷在組織病理學(xué)染色上未能體現(xiàn)出損傷恢復(fù)而轉(zhuǎn)為慢性病變,盡管E-cadherin較梗阻時有所增高,但E-cadherin的表達(dá)并沒有明顯降低。說明梗阻5天、7天再通的一定時間段內(nèi)腎臟損傷修復(fù)較好,而梗阻10天再通56天后腎損傷并未完全修復(fù)反而轉(zhuǎn)為慢性病變。再次,本研究初步探討了腎臟小管間質(zhì)纖維化損傷修復(fù)的相關(guān)機(jī)制:根據(jù)梗阻再通前后腎小管上皮細(xì)胞的標(biāo)志物E-cadherin和間充質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物α-SMA、vimentin的表達(dá)水平變化,我們初步推測,豬的單側(cè)輸尿管梗阻-再通、腎小管間質(zhì)纖維化損傷修復(fù)可能伴有上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其逆轉(zhuǎn)的發(fā)生,即EMT及其逆轉(zhuǎn)可能參與到腎臟間質(zhì)纖維化的損傷及修復(fù)再生中。結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了大動物豬的單側(cè)輸尿管梗阻-再通模型,在同一只豬、同一個腎臟觀察到了不同時間點腎間質(zhì)纖維化的損傷程度并發(fā)現(xiàn)了損傷后修復(fù)的時間節(jié)點,并進(jìn)一步通過此結(jié)果推測:早期的腎小管間質(zhì)纖維化在病因去除后可能能夠逆轉(zhuǎn)修復(fù),但長期損傷所致的慢性腎小管間質(zhì)纖維化較難恢復(fù)。另外,通過初步探討腎臟損傷修復(fù)的機(jī)制,我們推測,腎間質(zhì)纖維化的損傷修復(fù)可能與EMT及其逆轉(zhuǎn)相關(guān),這為TIF的機(jī)制研究提供了新的理論依據(jù)。總之,本研究為腎小管間質(zhì)纖維化的機(jī)制研究提供了新的思路和方法,為體內(nèi)研究腎臟損傷修復(fù)及進(jìn)行藥物干預(yù)來評估藥理功效提供了較好的實驗平臺,可能為防止腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展提供新的治療策略。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : In recent years , chronic kidney disease ( CKD ) has become a common disease threatening public health . In recent years , chronic kidney disease ( CKD ) has become a common disease threatening public health . In order to investigate whether renal interstitial fibrosis could be repaired and repaired , it was suggested that the renal interstitial fibrosis could be repaired and repaired in 3 weeks . The expressions of E - cadherin and E - cadherin in renal tubular epithelial cells were significantly higher than those before obstruction . Results : After 5 and 7 days of obstruction , the expression of E - cadherin was significantly increased . Conclusion : This study provides a new theoretical basis for studying the mechanism of renal interstitial fibrosis . In conclusion , this study provides a new theoretical basis for the mechanism of renal interstitial fibrosis . In conclusion , this study provides a new theoretical basis for the mechanism of renal interstitial fibrosis .
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R692;R-332

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本文編號：1917490