本文選題：腹外側(cè)視前區(qū) + 結(jié)節(jié)乳頭體核��； 參考：《安徽醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的 下丘腦腹外側(cè)視前區(qū)（ventrolateral preoptic area，VLPO）與結(jié)節(jié)乳頭體核（tuberomammillary nucleus，TMN）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)調(diào)控睡眠覺醒的關鍵腦區(qū)。γ-氨基丁酸（GABA）與組胺（HA）則是參與睡眠覺醒調(diào)節(jié)的神經(jīng)體液因子。本研究采用大鼠腦立體定位、核團內(nèi)埋管、微量注射以及多導睡眠描記技術等方法觀察并記錄大鼠睡眠覺醒時相的變化，探討興奮性神經(jīng)遞質(zhì)L-谷氨酸（L-Glu），GABAA受體阻斷劑荷包牡丹堿（Bicuculline，Bic）以及組胺H1受體阻斷劑（Triprolidine， Trip）對大鼠睡眠覺醒周期腦電活動的影響。 方法 1.模型建立雄性成年SD大鼠，SPF級，體質(zhì)量270-290g。戊巴比妥鈉（50mg·kg 1）行腹腔注射麻醉后，安裝腦電和肌電電極用于進行多導睡眠描計，將兩個不銹鋼材質(zhì)微量注射引導管分別插入大鼠VLPO區(qū)（AP：0.36mm；R：1.30mm；H：7.00mm）以及TMN區(qū)（AP：3.96mm；R：1.50mm；H：7.70mm）供核團內(nèi)給藥使用。插管與記錄電極均以牙科粘固粉固定于顱骨表面，并將引導腦電和肌電的電極通過銅質(zhì)導線連接到微型插座上。大鼠術后置于隔音室中恢復一周，記錄前三天連接EEG/EMG導線，以予適應記錄狀態(tài)。 2.動物分組動物隨機分為七組：晚間對照組［TMN與VLPO均微量注射人工腦脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF），即TMN+ACSFVLPO+ACSF組］和晚間實驗組［（1）TMN內(nèi)微量注射ACSF以及VLPO內(nèi)微量注射L-Glu，即TMN+ACSFVLPO+L-Glu組；（2）TMN內(nèi)微量注射Bic以及VLPO內(nèi)微量注射ACSF，即TMN+BicVLPO+ACSF組；（3） TMN內(nèi)微量注射Bic以及VLPO內(nèi)微量注射L-Glu，即TMN+BicVLPO+L-Glu］；日間對照組[VLPO與TMN均微量注射ACSF，即VLPO+ACSFTMN+ACSF組］和日間實驗組（[1）VLPO內(nèi)微量注射ACSF以及TMN內(nèi)微量注射L-Glu，即VLPO+ACSFTMN+L-Glu組；（2）VLPO內(nèi)微量注射Trip以及TMN內(nèi)微量注射L-Glu，即VLPO+TripTMN+L-Glu組]。 3.藥物微量注射通過不銹鋼引導管分別向目的核團TMN以及VLPO內(nèi)微量注射ACSF或者藥液（L-Glu，Bic，Trip）1μl，注射速度為1μl·min 1，注射完畢留針1min防止藥液溢出。藥物注射時間為22:00-22:20（10:00-10:20）。 4.多導睡眠描計及數(shù)據(jù)分析每次描記從藥物注射前2小時（20:00/08:00）開始，連續(xù)記錄24小時。以10s為一分段時間，將睡眠覺醒周期分為：（1）覺醒期（wakefulness，W）；（2）非快動眼睡眠期（non-rapid eye movement，NREM）；（3）快動眼睡眠期（rapid eye movement，REM）。NREM睡眠和REM睡眠之和為總睡眠時間（total sleep time，TST）。 5.組織學鑒定制備大鼠鼠腦冰凍切片后采用尼氏染色法進行染色，鏡下觀察鑒定核團插管位置以及藥物注射位點，僅對定位準確的大鼠進行實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計。 6.統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準誤（x±se）表示，組間樣本比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。以P 0.05視為差異具有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果 1．與TMN+ACSFVLPO+ACSF組（n=8）相比，TMN+ACSFVLPO+L-Glu組（n=7）VLPO內(nèi)微量注射L-Glu可使大鼠覺醒減少21.6%（163.71±8.17vs208.83±7.89，P 0.01），非快動眼睡眠（NREM）和總睡眠時間（TST）分別增多56.4%（112.61±7.37vs71.99±6.34，P 0.01），49.5%（136.29±8.16vs91.17±7.87，P 0.01），快動眼睡眠（REM）無明顯改變，差異無統(tǒng)計學意義； 2．與TMN+ACSFVLPO+ACSF組（n=8）相比，TMN+BicVLPO+ACSF組（n=7）內(nèi)微量注射Bic于TMN對大鼠的覺醒、NREM睡眠無顯著影響，差異無統(tǒng)計學意義； 3．與TMN+BicVLPO+ACSF組（n=7）相比，TMN+BicVLPO+L-Glu組（n=8）藥物注射對大鼠睡眠覺醒無明顯改變，而與TMN+ACSFVLPO+L-Glu組（n=7）相比，TMN+BicVLPO+L-Glu組（n=8）中Bic和L-Glu相繼分別微量注射于TMN和VLPO后，大鼠覺醒增加25.6%（163.71±8.17vs205.56±10.12，P 0.01），REM睡眠、NREM睡眠以及TST分別減少52.1%（23.67±2.78vs11.33±2.78，，P 0.01），26.2%（112.61±7.37vs85.09±8.09，P 0.05），30.7%（136.29±8.16vs94.42±10.12，P 0.01）； 4．與VLPO+ACSFTMN+ACSF組（n=7）相比，VLPO+ACSFTMN+L-Glu組（n=8）TMN內(nèi)微量注射L-Glu可使大鼠覺醒增加58.0%（113.35±4.32vs179.00±13.91，P 0.01），NREM睡眠和TST分別減少33.4%（172.05±3.57vs114.51±13.07，P 0.01），35.2%（186.63±4.32vs120.99±13.91，P 0.01）； 5．與VLPO+ACSFTMN+L-Glu組（n=8）相比，VLPO+TripTMN+L-Glu組（n=7）中Trip和L-Glu相繼分別微量注射于VLPO和TMN后，大鼠覺醒減少30.2%（179.00±13.91vs125.03±7.68，P 0.01），REM睡眠、NREM睡眠以及TST分別增加199.3%（6.48±2.68vs19.40±2.85，P 0.01），35.9%（114.51±13.07vs155.57±6.80，P 0.05），44.6%（120.99±13.91vs174.97±7.66，P 0.01）。 結(jié)論 VLPO可通過TMN內(nèi)GABAA受體抑制其神經(jīng)元活動而產(chǎn)生促睡眠作用，TMN內(nèi)神經(jīng)元的活性增強對覺醒的產(chǎn)生和維持起促進作用。
[Abstract]:Purpose

The effect of excitatory neurotransmitter L - glutamic acid ( L - Glu ) , GABAA receptor blocking agent ( Bicuculline , Bic ) and histamine H1 receptor blocking agent ( Trip ) on sleep arousal cycle in rats was investigated .

method

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本文編號：1912302