發(fā)布時間：2018-05-12 02:44

  本文選題：高遷移率族蛋白B1 + 老鼠|生物堿A��； 參考：《廣西醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:復制大鼠四氯化碳肝纖維化模型,測定血清中高遷移率族蛋B1(HMGBl)與肝纖維化大鼠相關(guān)指標的含量并驗證其關(guān)系,觀察HMGBl對其胞外受體—Toll-4樣受體(TLR4)的激活作用,通過相關(guān)信號通路探索HMGBl在肝纖維化形成中的作用,從而探討老鼠|生物堿A(HBOA)抗肝纖維化的作用機制。方法:1復制大鼠肝纖維化模型及藥物干預取60只Sprague Dawley(SD)雄性大鼠隨機分為肝纖維化模型組(n=50)及正常對照組(n=10)。肝纖維化模型組大鼠灌胃予以40%CCl_4橄欖油溶液3 m L·kg-1復制肝纖維化模型,首劑加倍,每周2次,共12周,正常對照組大鼠僅灌胃相應體積生理鹽水。第8周,隨機取部分大鼠作病理檢測,確定模型成功后將肝纖維化模型組大鼠隨機分為模型對照組(MC)、秋水仙堿組(Colchicine,0.4 mg·kg-1)、HBOA高劑量組(HBOA-H,100 mg·kg-1)、HBOA低劑量組(HBOA-L,50 mg·kg-1),每組各10只。從第9周始,分別灌胃給予相應的藥物,模型對照組及正常對照組(NC)灌胃給予相等體積的0.6%CMC-Na溶液10 m L·kg-1,每天1次,連續(xù)4周。2測定大鼠血清學指標于末次給藥24小時后,麻醉、稱重并腹主動脈抽血,離心取上清液。檢測肝功能指標谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(T-BIL)的活性;測定氧化應激物超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)含量;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清中炎癥因子HMGB1、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α);肝纖維化四項因子透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、IV型膠原(Col-IV)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ);作HMGB1與其他指標的相關(guān)回歸分析。3大鼠肝組織病理及分子生物學檢測大鼠處死后,取完整肝臟,電子天平精密稱重并計算大鼠肝指數(shù),剪取相同部位肝左葉制作肝組織病理學切片,作常規(guī)HE、Masson染色,光鏡下觀察其病理變化并計算肝臟病理分級及評分;采用免疫組織化學法檢測HMGB1、TLR4、肌動蛋白α(α-SMA)蛋白的表達;RT-PCR法檢測大鼠肝組織HMGB1、TLR4、骨髓樣分化因子88(My D88)、核因子kappa B(NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的m RNA表達。結(jié)果:1 HBOA對CCl_4性肝纖維化大鼠相關(guān)指標的作用8周后即成功復制CCl_4性大鼠肝纖維化模型,連續(xù)給藥4周后發(fā)現(xiàn),與模型對照組比較,HBOA可降低CCl_4性肝纖維化大鼠血清中的ALT、AST及T-BIL(P㩳0.01),升高SOD、GSH-Px含量并降低MDA(P0.01),降低炎癥因子HMGB1、IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P0.01),同時下調(diào)血清中的HA、LN、Col-IV、PCⅢ水平(P0.01);且血清中HMGB1水平與其他因子呈顯著正相關(guān);HE及Masson病理結(jié)果顯示,HBOA顯著減輕CCl_4所致肝組織病變程度。2 HBOA抑制HMGB1在TLR4信號通路中的表達免疫組織化學法測定結(jié)果顯示,與正常對照組比較,模型對照組肝組織中HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表達明顯升高(P0.01);與模型對照組比較,HBOA高、低劑量組均顯著降低肝組織中的HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表達(P0.01)。RT-PCR檢測結(jié)果可見,與正常對照組比較,模型對照組大鼠肝組織中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表達明顯升高(P0.01);與模型對照組比較,HBOA高、低劑量組均顯著降低肝組織中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表達(P0.01)。結(jié)論:HBOA對CCl_4性大鼠肝纖維化有一定的治療作用,其作用機制可能與降低晚期致炎因子HMGB1的表達并抑制其信號通路TLR4-My D88-NF-κB有關(guān)。
[Abstract]:鐩殑:澶嶅埗澶ч紶鍥涙隘鍖栫⒊鑲濈氦緇村寲妯″瀷,嫻嬪畾琛，

本文編號：1876804