本文選題：高遷移率族蛋白B1 + 老鼠|生物堿A　； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:復(fù)制大鼠四氯化碳肝纖維化模型,測(cè)定血清中高遷移率族蛋B1(HMGBl)與肝纖維化大鼠相關(guān)指標(biāo)的含量并驗(yàn)證其關(guān)系,觀察HMGBl對(duì)其胞外受體—Toll-4樣受體(TLR4)的激活作用,通過(guò)相關(guān)信號(hào)通路探索HMGBl在肝纖維化形成中的作用,從而探討老鼠|生物堿A(HBOA)抗肝纖維化的作用機(jī)制。方法:1復(fù)制大鼠肝纖維化模型及藥物干預(yù)取60只Sprague Dawley(SD)雄性大鼠隨機(jī)分為肝纖維化模型組(n=50)及正常對(duì)照組(n=10)。肝纖維化模型組大鼠灌胃予以40%CCl_4橄欖油溶液3 m L·kg-1復(fù)制肝纖維化模型,首劑加倍,每周2次,共12周,正常對(duì)照組大鼠僅灌胃相應(yīng)體積生理鹽水。第8周,隨機(jī)取部分大鼠作病理檢測(cè),確定模型成功后將肝纖維化模型組大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(MC)、秋水仙堿組(Colchicine,0.4 mg·kg-1)、HBOA高劑量組(HBOA-H,100 mg·kg-1)、HBOA低劑量組(HBOA-L,50 mg·kg-1),每組各10只。從第9周始,分別灌胃給予相應(yīng)的藥物,模型對(duì)照組及正常對(duì)照組(NC)灌胃給予相等體積的0.6%CMC-Na溶液10 m L·kg-1,每天1次,連續(xù)4周。2測(cè)定大鼠血清學(xué)指標(biāo)于末次給藥24小時(shí)后,麻醉、稱重并腹主動(dòng)脈抽血,離心取上清液。檢測(cè)肝功能指標(biāo)谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(T-BIL)的活性;測(cè)定氧化應(yīng)激物超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)含量;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清中炎癥因子HMGB1、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α);肝纖維化四項(xiàng)因子透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、IV型膠原(Col-IV)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ);作HMGB1與其他指標(biāo)的相關(guān)回歸分析。3大鼠肝組織病理及分子生物學(xué)檢測(cè)大鼠處死后,取完整肝臟,電子天平精密稱重并計(jì)算大鼠肝指數(shù),剪取相同部位肝左葉制作肝組織病理學(xué)切片,作常規(guī)HE、Masson染色,光鏡下觀察其病理變化并計(jì)算肝臟病理分級(jí)及評(píng)分;采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HMGB1、TLR4、肌動(dòng)蛋白α(α-SMA)蛋白的表達(dá);RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織HMGB1、TLR4、骨髓樣分化因子88(My D88)、核因子kappa B(NF-κB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的m RNA表達(dá)。結(jié)果:1 HBOA對(duì)CCl_4性肝纖維化大鼠相關(guān)指標(biāo)的作用8周后即成功復(fù)制CCl_4性大鼠肝纖維化模型,連續(xù)給藥4周后發(fā)現(xiàn),與模型對(duì)照組比較,HBOA可降低CCl_4性肝纖維化大鼠血清中的ALT、AST及T-BIL(P㩳0.01),升高SOD、GSH-Px含量并降低MDA(P0.01),降低炎癥因子HMGB1、IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P0.01),同時(shí)下調(diào)血清中的HA、LN、Col-IV、PCⅢ水平(P0.01);且血清中HMGB1水平與其他因子呈顯著正相關(guān);HE及Masson病理結(jié)果顯示,HBOA顯著減輕CCl_4所致肝組織病變程度。2 HBOA抑制HMGB1在TLR4信號(hào)通路中的表達(dá)免疫組織化學(xué)法測(cè)定結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組肝組織中HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表達(dá)明顯升高(P0.01);與模型對(duì)照組比較,HBOA高、低劑量組均顯著降低肝組織中的HMGB1、TLR4、α-SMA蛋白的表達(dá)(P0.01)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn),與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠肝組織中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表達(dá)明顯升高(P0.01);與模型對(duì)照組比較,HBOA高、低劑量組均顯著降低肝組織中HMGB1、TLR4、My D88、NF-κB、TGF-β1的m RNA表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:HBOA對(duì)CCl_4性大鼠肝纖維化有一定的治療作用,其作用機(jī)制可能與降低晚期致炎因子HMGB1的表達(dá)并抑制其信號(hào)通路TLR4-My D88-NF-κB有關(guān)。
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本文編號(hào)：1876804