本文選題：孤雌發(fā)育 + 孤雌激活　； 參考：《吉林大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：近來(lái)，豬已經(jīng)被作為研究人類(lèi)疾病和干細(xì)胞治療等的一種重要的動(dòng)物模型。而豬孤雌胚胎由于有著無(wú)需受精且不違背倫理道德的優(yōu)勢(shì)，受到了人們的廣泛關(guān)注。但是通過(guò)研究，人們發(fā)現(xiàn)豬的孤雌胚胎由于胎盤(pán)的缺陷而無(wú)法發(fā)育到期。目前，人們認(rèn)為豬的孤雌胎兒之所以存在發(fā)育異常，一部分是由于缺少母源印記基因所導(dǎo)致的，而這些印記基因的表達(dá)異常則與它們的啟動(dòng)子甲基化水平有著關(guān)聯(lián)。有報(bào)道還指出孤雌胎盤(pán)還存在著明顯的血管發(fā)育缺陷，因此我們推測(cè)，孤雌胎盤(pán)的血管發(fā)育缺陷可能也是導(dǎo)致孤雌胎兒的發(fā)育不到期的重要因素。 本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)孤雌激活技術(shù)獲得了3組豬孤雌胚胎，數(shù)量分別為217，238和190個(gè)，然后通過(guò)胚胎移植將它們分別植入到3頭發(fā)情的10月齡大白母豬（P-1, P-2和P-3）體內(nèi)；同時(shí)，利用人工授精方法，對(duì)同期發(fā)情的3頭10月齡大白豬（N-1，N-2和N-3）進(jìn)行授精。在懷孕第28天（D28），通過(guò)B超發(fā)現(xiàn)母豬均已懷孕。然后在當(dāng)天便將母豬分別麻醉，取出母豬的子宮并分離出子宮內(nèi)的胎兒和胎盤(pán)。其中，母豬P-1, P-2和P-3分別的產(chǎn)仔數(shù)為6，8和11；母豬N-1，N-2和N-3中的胚胎數(shù)目分別為15，13和16。通過(guò)數(shù)據(jù)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)母豬所懷的孤雌胎兒的數(shù)量要低于正常胎兒數(shù)量，這說(shuō)明了豬孤雌胎兒的出生率可能是低于正常胎兒的。另外，通過(guò)對(duì)采集到的胎兒胎盤(pán)進(jìn)行形態(tài)學(xué)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)，豬孤雌胎兒和胎盤(pán)的尺寸要明顯小于正常對(duì)照組，而且孤雌胎盤(pán)的顏色明顯比對(duì)照組淺，結(jié)合前人的研究，我們的結(jié)果同樣驗(yàn)證了孤雌胎盤(pán)的血管發(fā)育是有明顯缺陷的。 基于形態(tài)學(xué)上血管發(fā)育的不足，我們假設(shè)影響血管發(fā)育的重要因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族的表達(dá)可能與豬孤雌胎盤(pán)的發(fā)育缺陷有關(guān)聯(lián)。因此，利用Q-PCR對(duì)豬孤雌胎兒胎盤(pán)中四個(gè)VEGF家族及其受體（VEGFA，PLGF，KDR和FLT-1）的表達(dá)模式做了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在孤雌胎兒中，這四個(gè)因子的表達(dá)均無(wú)明顯變化（p0.05）；而在孤雌胎盤(pán)中，除了VEGFA的表達(dá)無(wú)顯著變化之外（p0.05），KDR，F(xiàn)LT-1和PLGF都呈現(xiàn)明顯的低表達(dá)（p0.05）。這說(shuō)明VEGF家族可能在孤雌胎盤(pán)發(fā)育過(guò)程中起到關(guān)鍵作用，，進(jìn)而影響孤雌胎兒的后期發(fā)育。 報(bào)道證實(shí)，VEGFA的亞型通過(guò)與其受體結(jié)合，進(jìn)而以不同方式激活VEGF信號(hào)通路，從而完成其對(duì)血管生成的作用。據(jù)此，我們首先利用Q-PCR對(duì)孤雌胎兒胎盤(pán)中VEGF在豬中的三個(gè)亞型VEGF120，VEGF164和VEGF188的表達(dá)做了分析，結(jié)果表明，在孤雌胎兒中，三個(gè)亞型的表達(dá)無(wú)明顯變化（p0.05）；而在孤雌胎盤(pán)中，VEGF164和VEGF188呈低表達(dá)，而VEGF120的表達(dá)出現(xiàn)了異常升高（p0.05）。同時(shí)，利用RT-PCR對(duì)孤雌胎兒胎盤(pán)中VEGF亞型的表達(dá)進(jìn)行了驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)與Q-PCR的結(jié)果完全相符。 所以我們推測(cè)，VEGF家族及其受體在孤雌胎盤(pán)中的低表達(dá)，尤其是VEGF亞型的表達(dá)紊亂，可能影響了豬孤雌胎盤(pán)的血管生成過(guò)程，造成了孤雌胎盤(pán)發(fā)育的缺陷，進(jìn)而導(dǎo)致了孤雌胚胎的早期發(fā)育阻滯。
[Abstract]:Recently , pigs have been used as an important animal model for the study of human diseases and stem cell therapy .

In this experiment , three groups of pigs were obtained by single - female activation technique . The numbers were 217 , 238 and 190 respectively , then they were implanted into 3 - month - old white sows ( P - 1 , P - 2 and P - 3 ) respectively by embryo transfer .
At the same time , the insemination of three 10 - month - old white pigs ( N - 1 , N - 2 and N - 3 ) in the same period was carried out by means of artificial insemination . On the 28th day of pregnancy ( D28 ) , the sows were found to have become pregnant . Then , the sows were anesthetized and the uterus of the sow was taken out and the fetus and placenta in the uterus were isolated .
It was found that the birth rate of isolated female fetus was lower than that of the normal control group . In addition , it was found that the size of the isolated female fetus was significantly lower than that of the normal control group , and the color of the isolated female placenta was significantly smaller than that of the control group .

The expression pattern of vascular endothelial growth factor ( VEGF ) , which is an important factor affecting the development of blood vessels , may be associated with the developmental defects of the isolated pig ' s placenta .
However , the VEGF family could play a key role in the development of solitary female placenta , which could affect the late development of the solitary female fetus .

The expression of VEGF , VEGF164 and VEGF188 in human fetal placenta was analyzed by Q - PCR , and the results showed that the expression of VEGF , VEGF164 and VEGF188 in the placenta of isolated female fetus was not significantly changed ( p < 0.05 ) .
The expression of VEGF164 and VEGF188 was low in isolated female placenta , while the expression of VEGF120 increased abnormally ( p < 0.05 ) . At the same time , RT - PCR was used to verify the expression of VEGF isoforms in the placenta of isolated female fetus .

Therefore , we have speculated that the low expression of VEGF family and its receptor in isolated female placenta , especially the expression of VEGF subtype , may affect the angiogenesis process of isolated female placenta , which leads to the development of solitary female placenta , which leads to the early development block of the solitary female embryo .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：Q78

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1790365