本文選題：LC-MS/MS + HPLC-QTOF-MS�。� 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：右蘭索拉唑?qū)儆谫|(zhì)子泵抑制劑,是由日本武田公司研發(fā)的治療食管炎的新藥,本藥在劑型上采用雙延遲釋放(DDR)系統(tǒng),延長(zhǎng)了藥物的作用時(shí)間,增強(qiáng)了患者的依從性,臨床療效明顯,因?qū)＠Ｗo(hù)于2020年即將到期,因此該藥成為仿制熱點(diǎn)。QO-58是經(jīng)過(guò)高通量篩選得到的一種全新KCNQ型鉀離子通道開放劑,藥效學(xué)初步研究提示其具有抗驚厥、抗癲癇以及鎮(zhèn)痛等作用,其賴氨酸鹽(QO-58 lysine)改善了吸收,提高了療效,在完成了前期藥理、毒理及部分藥代、毒代研究的基礎(chǔ)上,開展本次體內(nèi)代謝、排泄研究,為新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。LC-MS/MS技術(shù)是將液相色譜分離與質(zhì)譜檢測(cè)手段相結(jié)合的技術(shù),具有分離能力強(qiáng)、監(jiān)測(cè)靈敏度高和專屬性強(qiáng)等特點(diǎn),成為新藥研發(fā)和體內(nèi)外藥物分析的重要手段。本課題運(yùn)用此技術(shù)研究了國(guó)內(nèi)高仿的武田Dexilant產(chǎn)品(右蘭索拉唑緩釋膠囊)在Beagle犬體內(nèi)的生物等效性,為一致性評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)參考;同時(shí)還研究了QO-58 lysine在大鼠體內(nèi)的排泄動(dòng)力學(xué),分析了QO-58 lysine在大鼠體內(nèi)的多種代謝產(chǎn)物,該研究結(jié)果為進(jìn)一步的開發(fā)利用QO-58 lysine提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第一部分右蘭索拉唑緩釋膠囊在Beagle犬體內(nèi)的生物等效性評(píng)價(jià)目的:研究右蘭索拉唑的受試藥物和參比藥物(Dexilant)在Beagle犬體內(nèi)是否具有生物等效特征。方法:1樣品收集:本實(shí)驗(yàn)采用雙周期隨機(jī)交叉設(shè)計(jì),每一個(gè)周期,飼喂30mg右蘭索拉唑緩釋膠囊。從Beagle犬腿部靜脈處采集血液至真空肝素管,分別收集給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h時(shí)間點(diǎn)的血液樣本。2樣品預(yù)處理:采用液液萃取法(乙酸乙酯)進(jìn)行處理。3檢測(cè)條件:采用Phenomenex C18分析柱,流動(dòng)相為甲醇(A):2 m M乙酸銨水溶液(B),采用梯度洗脫程序。檢測(cè)方式為正離子、多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM),用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m/z 369.8→252.0(右蘭索拉唑),m/z 345.9→198.0(內(nèi)標(biāo),IS,奧美拉唑)。4生物等效性:計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),對(duì)AUC0-t、AUC0-∞、Cmax經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后,采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn),判斷兩種制劑是否生物等效。結(jié)果:1右蘭索拉唑在Beagle犬血漿中的線性關(guān)系良好(r≥0.9960),日內(nèi)精密度和日間精密度符合要求,無(wú)明顯基質(zhì)效應(yīng),穩(wěn)定性良好。2單劑量給予試驗(yàn)藥物和參比藥物,血漿中右蘭索拉唑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(AUC0-t、AUC0-∞和Cmax)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn),其結(jié)果說(shuō)明兩種制劑間沒有顯著性差異。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立的LC-MS/MS方法,具有簡(jiǎn)單可靠等特點(diǎn),能夠滿足生物樣品的分析要求。兩種右蘭索拉唑緩釋膠囊在Beagle犬體內(nèi)具有相似的體內(nèi)過(guò)程以及藥代動(dòng)力學(xué)特征,兩者具有生物等效性。第二部分液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定大鼠尿液、糞便和膽汁中QO-58 lysine的含量及排泄動(dòng)力學(xué)研究目的:建立QO-58 lysine在大鼠尿液、糞便和膽汁中的液質(zhì)聯(lián)用方法(LC-MS/MS),并對(duì)其進(jìn)行排泄動(dòng)力學(xué)研究。方法:1樣品收集:以50 mg/kg的劑量灌胃給予QO-58 lysine后,采用代謝籠收集其0~4、4~8、8~12、12~24、24~36、36~48、48~60以及60~72 h的尿液與糞便樣品。麻醉后對(duì)大鼠進(jìn)行膽管插管,縫合后在清醒狀態(tài)下收集0~4、4~8、8~12、12~16、16~20、20~24、24~28、28~32、32~36、36~40、40~48、48~52、52~56、56~60、60~64、64~68和68~72 h的膽汁樣品。2樣品的預(yù)處理:尿液和膽汁采用液液萃取法;糞便采用乙腈沉淀法。3檢測(cè)條件:采用Phenomenex C18分析柱,乙腈(A)和2 mmol/L乙酸銨和0.2%(v/v)甲酸的水溶液(B)為流動(dòng)相,流速為0.5 ml/min。采用電噴霧離子源、正離子模式、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)進(jìn)行檢測(cè),內(nèi)標(biāo)物(IS)為尼莫地平。被測(cè)成分的離子對(duì)分別為QO-58 lysine m/z 443.1→361.1,尼莫地平m/z 419.2→343.2。結(jié)果:1 QO-58 lysine在尿液、糞便和膽汁中的線性關(guān)系良好(r≥0.9943),日內(nèi)精密度和日間精密度均符合要求,基質(zhì)效應(yīng)69.48%~99.57%,穩(wěn)定性良好;2 72 h尿液的累計(jì)排泄率為(0.0245±0.0324)%,糞便的累計(jì)排泄率為(92.94±4.71)%,膽汁的累計(jì)排泄率為(2.05±0.68)%。結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)采用LC-MS/MS方法對(duì)大鼠的尿液、糞便和膽汁中QO-58lysine的含量進(jìn)行測(cè)定,該方法簡(jiǎn)便快捷、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高。經(jīng)方法學(xué)研究表明,LC-MS/MS方法能夠滿足樣品測(cè)定的要求。2 QO-58 lysine在灌胃給藥后主要經(jīng)過(guò)糞便排泄,一部分經(jīng)過(guò)膽汁排泄,極少量通過(guò)尿液排泄。另外,約有7%的藥物有待探明去向,可能是在肝臟等器官中產(chǎn)生了一些新的代謝產(chǎn)物。第三部分QO-58 lysine在大鼠體內(nèi)的代謝研究目的:建立LC-MS/MS和HPLC-QTOF-MS的方法,分離篩選并且分析推測(cè)QO-58 lysine在大鼠尿液和膽汁中的代謝產(chǎn)物。方法:1采用Phenomenex C18分析柱,流動(dòng)相為乙腈(A)和2 mmol/L乙酸銨和0.2%甲酸的水溶液(B),梯度洗脫,質(zhì)譜采用電噴霧離子源。2大鼠灌胃給予QO-58 lysine 50 mg/kg,分別收集尿液和膽汁。采用液液萃取法對(duì)尿液和膽汁樣品進(jìn)行濃縮和處理。采用高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-QTOF-MS)技術(shù)分析樣品,正/負(fù)離子模式,全掃描采集。3數(shù)據(jù)采集完畢后,先使用“Metabolitepilot 1.5”中的“碎片和中性丟失虧損過(guò)濾(Fragment and Neutral loss defect filter)”功能對(duì)其中的代謝物進(jìn)行初步的篩選;之后再使用“Peakview 2.2”中的“Masterview”功能,針對(duì)之前初步篩選的結(jié)果進(jìn)行更進(jìn)一步的分析,對(duì)比有關(guān)化合物的精確分子量、分子式、二級(jí)質(zhì)譜圖、保留時(shí)間及質(zhì)譜信息,對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行推測(cè)。最后根據(jù)代謝物結(jié)構(gòu)推測(cè)其代謝途徑。結(jié)果:根據(jù)生物體內(nèi)藥物的代謝轉(zhuǎn)化的規(guī)律以及母體藥物總結(jié)的裂解規(guī)律,在大鼠體內(nèi)檢測(cè)出11種代謝產(chǎn)物,其中I相代謝產(chǎn)物8種,II相代謝產(chǎn)物3種。并對(duì)各個(gè)代謝產(chǎn)物的代謝途徑進(jìn)行了解析。結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)總共檢測(cè)到11種代謝產(chǎn)物。QO-58 lysine所檢測(cè)到的I相代謝產(chǎn)物可以發(fā)生鹵素原子的消除反應(yīng)、羥基化和雙羥基化反應(yīng);II相代謝物可以發(fā)生硫酸化、葡萄糖醛酸化反應(yīng)以及與N-乙酰半胱氨酸的結(jié)合反應(yīng)。2建立了基于HPLC-QTOF-MS技術(shù)的專屬性好、準(zhǔn)確度高、方便快捷的代謝物鑒定方法。
[Abstract]:A new type of KCNQ potassium channel openers ( QO - 58 lysine ) in Beagle dogs was used to study the biological equivalence of dexlansoprazole sustained - release capsules in Beagle dogs . The pharmacokinetic parameters ( AUC0 - t , AUC0 - 鈭，

本文編號(hào)：1787478