本文選題：異種肌腱 + 脫細(xì)胞�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一章牛脫細(xì)胞肌腱支架制備 目的：采用多次脫細(xì)胞循環(huán)處理去除牛肌腱腱細(xì)胞、利用交聯(lián)劑交聯(lián)脫細(xì)胞支架增強(qiáng)力學(xué)強(qiáng)度、過氧乙酸及冷凍干燥增加空隙率、最后進(jìn)行滅菌處理制備異種脫細(xì)胞肌腱支架,并通過多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)評(píng)價(jià)制備的脫細(xì)胞肌腱支架去除抗原和細(xì)胞成分的效果、檢測(cè)交聯(lián)程度和力學(xué)性能,評(píng)價(jià)體內(nèi)外組織相容性,為異種肌腱的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：取健康成年牛腱,于-80℃深凍保存1個(gè)月,室溫復(fù)融后進(jìn)行α-半乳糖苷酶消化及脫細(xì)胞處理：PBS緩沖液中浸泡數(shù)小時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇添加a-半乳糖苷酶；胰蛋白酶溶液消化數(shù)小時(shí),用含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止胰酶消化；于聚乙二醇辛基苯基醚,脫氧膽酸鈉混合液中脫細(xì)胞,更換脫細(xì)胞溶液,重復(fù)脫細(xì)胞循環(huán)數(shù)次,PBS反復(fù)清洗；EDTA浸泡數(shù)小時(shí)；DMEM培養(yǎng)基浸泡,PBS反復(fù)清洗；利用京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞肌腱數(shù)小時(shí),PBS反復(fù)清洗；DMEM培養(yǎng)基浸泡后置于過氧乙酸-乙醇溶液中,PBS反復(fù)清洗；-80℃深凍后冷凍干燥；15kGyγ射線輻照制備脫細(xì)胞肌腱支架。取新鮮深凍及不同脫細(xì)胞循環(huán)處理牛肌腱,HE染色后光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞去除情況及肌腱纖維組織形態(tài)學(xué)特征,熒光顯微鏡下觀察DAPI染色樣本DNA和RNA去除情況。取新鮮深凍,脫細(xì)胞未經(jīng)α-半乳糖苷酶處理(1-7個(gè)脫細(xì)胞循環(huán)),α-半乳糖苷酶處理樣本,分別進(jìn)行抗α-半乳糖基抗原ELISA定量：取-20℃保存樣本室溫消融,分別將組織樣本充分剪碎至勻漿。取a-gal ELISA試劑盒室溫平衡,分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照不加樣本及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣本孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣本孔中先加樣本稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣本10μl(終稀釋倍數(shù)為5),樣本加于酶標(biāo)板孔底,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻；封板膜封板后置37℃溫育30min；揭除封板膜,棄液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30min后棄去,重復(fù)5次,拍干；加入酶標(biāo)試劑,50μl孔,空白除外；37℃溫育30min；洗滌液清洗5次,拍干；加顯色劑A,50μl/孔,再加顯色劑B,50山/孔,震蕩混勻,37℃避光顯色10min;加終止液終止反應(yīng),501μl/孔；以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔吸光度(OD值)。以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣本OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度,乘稀釋倍數(shù)計(jì)算樣本實(shí)際濃度根據(jù)a-半乳糖基濃度確定脫細(xì)胞循環(huán)次數(shù)；掃描電子顯微鏡(SEM)觀察新鮮深凍及脫細(xì)胞肌腱支架的脫細(xì)胞程度及纖維結(jié)構(gòu)。取新鮮深凍,脫細(xì)胞處理(1-7個(gè)脫細(xì)胞循環(huán))樣品,以E.Z.N.A. TM Tissue DNA Kit利用NANODROP2000分光光度計(jì)檢測(cè)樣本總DNA：稱取實(shí)驗(yàn)樣本,充分研碎后加TL緩沖液、OB蛋白酶混勻后溫浴過夜;加RNA酶后高速離心,吸取上層懸液與BL緩沖液充分混勻,溫育后加無水乙醇,強(qiáng)力震蕩充分混勻；取HiBind(?) DNA柱放置于收集管內(nèi),將之前所制備樣本加入DNA柱內(nèi),高速離心后棄液體；將DNA柱放入新的收集管內(nèi),HB緩沖液沖洗,高速離心后棄液體及收集管；將DNA柱放入原收集管內(nèi),用DNA清洗緩沖液沖洗,高速離心后棄液體保留收集管；將DNA柱放入原收集管內(nèi),同上清洗；將DNA柱放入原收集管內(nèi),最大速度離心后將DNA柱放入無菌離心管內(nèi),添加預(yù)熱洗脫緩沖液,室溫靜置數(shù)分后高速離心,重復(fù)洗脫；提取DNA溶液即用或-80℃保存?zhèn)溆谩８鶕?jù)殘余DNA量確定脫細(xì)胞循環(huán)次數(shù)。綜合組織學(xué)觀察、掃描電鏡觀察、α-半乳糖基濃度以及殘余DNA量確定脫細(xì)胞循環(huán)次數(shù)。采用茚三酮法利用分光光度計(jì)在570nm下測(cè)量吸光度,測(cè)定京尼平交聯(lián)度：(1)檸檬酸、NaOH和氯化亞錫混合,加去離子水調(diào)至25m1,另將茚三酮加入25m1乙二醇甲醚中,再將上述兩液體混合攪拌,制成茚三酮溶液,避光保存。(2)稱取樣品,加入茚三酮溶液,100℃水浴20min,冷卻至室溫,加異丙醇溶液,用分光光度計(jì)在570nm下測(cè)量吸光度。以甘氨酸溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線(n/M,n/4M,n/8M,n/16M, n/32M,),并通過此標(biāo)準(zhǔn)曲線查找各樣本中自由氨基酸的摩爾數(shù)。利用異丙醇替換法計(jì)算深凍及脫細(xì)胞肌腱支架的孔隙率。對(duì)新鮮深凍肌腱和脫細(xì)胞肌腱支架進(jìn)行力學(xué)拉伸試驗(yàn),以抗張強(qiáng)度、斷裂延伸率及彈性模量為評(píng)價(jià)指標(biāo),觀察力學(xué)性能變化。通過倒置顯微鏡觀察,利用CCK-8在450nm波長(zhǎng)條件下應(yīng)用酶標(biāo)儀測(cè)量光吸收值檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,利用中性紅于540nm波長(zhǎng)測(cè)量光吸收值檢測(cè)細(xì)胞存活情況,綜合評(píng)價(jià)體外細(xì)胞相容性。采用大鼠皮下埋入實(shí)驗(yàn)：備皮,用手術(shù)刀片于背部做縱形切口,大小10mm左右,鈍性分離皮下組織,形成一囊袋,皮下埋入,以新鮮牛腱為陽性對(duì)照,膠原海綿為陰性對(duì)照,脫細(xì)胞肌腱支架為實(shí)驗(yàn)組,術(shù)后3、7、14、21d進(jìn)行大體及組織學(xué)觀察,評(píng)價(jià)所制備肌腱支架的體內(nèi)相容性。 結(jié)果：HE染色后可見脫細(xì)胞肌腱支架腱束呈波浪形緊密規(guī)則排列,與深凍肌腱相比腱束間距略有增大,未觀察到細(xì)胞成分；DAPI染色可見深凍肌腱內(nèi)大量DNA和RNA,而脫細(xì)胞肌腱支架則未發(fā)現(xiàn)DNA和RNA；實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察到過度脫細(xì)胞處理可致肌腱斷裂,膠原變性,腱束間距過大,失去原有三維結(jié)構(gòu)特征。α-半乳糖基抗原檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)α-半乳糖苷酶處理后樣本內(nèi)未檢測(cè)到a-半乳糖基抗原的存在；經(jīng)脫細(xì)胞循環(huán)處理,α-半乳糖基抗原濃度逐漸降低,經(jīng)3次處理后,未檢測(cè)到α-半乳糖基抗原。SEM觀察可見深凍肌腱和脫細(xì)胞肌腱支架腱束排列規(guī)則緊密,脫細(xì)胞肌腱支架肌腱束之間距離略有增加,空隙度優(yōu)于深凍肌腱,未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞成分。樣本經(jīng)脫細(xì)胞循環(huán)處理后,DNA含量明顯下降,經(jīng)3個(gè)脫細(xì)胞循環(huán)處理,DNA含量約下降至原有含量的1/3,4個(gè)脫細(xì)胞循環(huán)處理,DNA含量約降至原有含量的1/4。綜合組織學(xué)觀察、掃描電鏡觀察、a-半乳糖基濃度以及殘余DNA量確定本研究采用4個(gè)脫細(xì)胞循環(huán)進(jìn)行脫細(xì)胞處理。茚三酮法測(cè)定京尼平交聯(lián)度達(dá)57.27%。對(duì)孔隙率的測(cè)定顯示脫細(xì)胞肌腱支架(56.800±9.311%)高于深凍肌腱(38.660±2.996%%),二者有顯著性差異(t=-4.147,P=0.003)。力學(xué)性能檢測(cè)深凍肌腱抗張強(qiáng)度為22.640±4.504MPa,脫細(xì)胞肌腱支架組為29.73±4.62MPa,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-1.904,P=0.130)；深凍肌腱斷裂延伸率為15.200±4.071%,脫細(xì)胞肌腱支架組為13.830±3.424%,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.445,P=0.679);深凍肌腱彈性模量為151.250±12.885MPa,脫細(xì)胞肌腱支架組為218.680±23.833MPa,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-4.311,P=0.022)。脫細(xì)胞肌腱支架抗張強(qiáng)度和彈性模量均較深凍肌腱有增加,斷裂延伸率則較之減小。CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示,在不同的時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的吸光度值有顯著性差異(F=578.697,P0.001),實(shí)驗(yàn)組吸光度值高于陰性對(duì)照組,差異有顯著性意義(F=4.011,P0.05),組別因素與時(shí)間因素之間無交互效應(yīng)(F=1.650,P0.05)。同一檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),不同組別間吸光度值無顯著性差異(P0.05)：同一組別內(nèi),在不同的檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度值有顯著性差異(P0.001);2、5、7d細(xì)胞增殖率分別為105%、105%和110%,細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)均為0級(jí)：中性紅檢測(cè)3d細(xì)胞存活率為99%,7d為106%。體內(nèi)組織相容性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陽性對(duì)照組表現(xiàn)為大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn),實(shí)驗(yàn)組和陰性對(duì)照組結(jié)構(gòu)相似,陰性對(duì)照組更快的被機(jī)體所吸收：術(shù)后3d,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組鏡下所見相似,植入物被層狀炎性組織包繞,其間可見小血管擴(kuò)張、充血,白細(xì)胞滲出,炎細(xì)胞以中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主。術(shù)后1w,兩組植入物仍被光滑的薄層結(jié)締組織包裹,炎癥細(xì)胞較3d減少；包裹組織外層主要由梭形的纖維細(xì)胞和疏松的膠原纖維組成。對(duì)照組海綿膠原支架出現(xiàn)降解,實(shí)驗(yàn)組可觀察到細(xì)胞成分沿實(shí)驗(yàn)組肌腱邊緣向內(nèi)部長(zhǎng)入,幾乎無炎細(xì)胞浸潤(rùn),無膠原降解。術(shù)后2w,膠原海綿組包裹組織明顯縮小,內(nèi)部?jī)H殘存少量膠原支架,支架周圍見大量細(xì)胞浸潤(rùn)。實(shí)驗(yàn)組肌腱周圍包裹組織與1w所見相似,邊緣肌腱膠原內(nèi)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn),以巨噬細(xì)胞為主,伴有輕微膠原溶解,偶見多核巨細(xì)胞,細(xì)胞向肌腱內(nèi)部長(zhǎng)入增加。術(shù)后3w,膠原海綿已經(jīng)基本吸收,實(shí)驗(yàn)組與2w類似,長(zhǎng)入肌腱內(nèi)細(xì)胞增多。 結(jié)論：采用多步脫細(xì)胞處理后經(jīng)京尼平交聯(lián)脫細(xì)胞肌腱支架,并利用過氧乙酸-乙醇結(jié)合γ射線輻照滅菌所制備的肌腱支架具有：(1)無細(xì)胞成分及α-半乳糖基抗原；(2)保存了完整的天然肌腱三維支架；(3)良好的力學(xué)性能；(4)良好的體內(nèi)、體外組織相容性。本研究為異種肌腱的實(shí)際應(yīng)用提供初步實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 第二章活性脫細(xì)胞支架的初步構(gòu)建 目的：摸索富含血小板血漿的制備方法,將富含血小板血漿與緩釋劑混合并復(fù)合脫細(xì)胞肌腱支架,初步構(gòu)建具有緩釋能力的活性脫細(xì)胞肌腱支架系統(tǒng)。 方法：取SD大鼠,戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,用預(yù)先抗凝的10ml注射器行心臟采血,采用低密度兩步離心法制備富含血小板血漿：以200×g離心后,將全部上清液、中間層(白細(xì)胞和血小板層)及少量紅細(xì)胞移入PE管內(nèi),相同條件下再次離心后,吸取上清血漿,以5倍全血血小板濃度重懸制備富含血小板血漿。通過ELISA法檢測(cè)富含血小板血漿中血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、胰島素生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)四種生長(zhǎng)因子濃度。取4℃保存的ELISA試劑盒,恢復(fù)至室溫。將標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣本加入酶標(biāo)板,混勻后置37℃40min；洗滌液充分洗板,濾紙印干；加蒸餾水和第一抗體工作液各50μl/孔,混勻后置37℃20min:洗板；加酶標(biāo)抗體工作液,混勻后置37℃10min洗板；加底物工作液,混勻后置37℃暗處10min;以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔吸光度(OD值)。以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣本OD值由試劑盒自帶軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度,乘稀釋倍數(shù)計(jì)算樣本實(shí)際濃度。利用Ⅰ型膠原溶液激活富含血小板血漿,用注射器將二者混合液注入制備的牛脫細(xì)胞肌腱支架中,制備活性肌腱支架。將所制備的緩釋系統(tǒng)以4倍蒸餾水稀釋,于3,12,24,48h利用ELISA試劑盒檢測(cè)相應(yīng)生長(zhǎng)因子的濃度,評(píng)價(jià)緩釋功能。對(duì)活性脫細(xì)胞肌腱支架進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測(cè)樣本是否存在TGF-β和VEGF兩種生長(zhǎng)因子：取石蠟切片,經(jīng)二甲苯及逆梯度酒精脫蠟水化；PBS洗滌；過氧化氫處理；PBS洗滌后酶胰酶修復(fù)；蒸餾水洗滌；封閉液封閉；一抗過夜；PBS洗滌后添加二抗；PBS洗滌后加SABC; PBS洗滌數(shù)次；DAB顯色：自來水沖洗后蘇木素復(fù)染；鹽酸分化、返藍(lán)；脫水、透明、封片,光學(xué)顯微鏡下觀察。將活性脫細(xì)胞肌腱支架與大鼠成纖維細(xì)胞共培養(yǎng),倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況并利用CCK-8檢測(cè)成纖維細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果：ELISA法檢測(cè)富含血小板血漿中PDGF濃度為3624.20±1453.62pg/ml、IGF-1濃度為376.64±136.66pg/ml、TGF-β1濃度為1103.45±1149.31pg/ml,未檢測(cè)出樣本中VEGF濃度。緩釋檢測(cè)顯示隨時(shí)間的延長(zhǎng),生長(zhǎng)因子逐漸由支架釋放,未檢測(cè)出樣本中VEGF濃度,PDGF在48h后的濃度約為12h及24h的3倍,IGF-1在48h后的濃度約為12h及24h的2倍,TGF-1在48h后的濃度約為12h的3倍,24h的2倍。免疫組織化學(xué)未發(fā)現(xiàn)明顯陽性染色結(jié)果。將所制備的活性肌腱支架與大鼠成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)后,可以觀察到細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)良好。CCK-8檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組OD值3.280±0.235,對(duì)照組OD值2.947±0.168,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.987,P=0.001),細(xì)胞相對(duì)增殖率為111%。 結(jié)論：本研究探索了富含血小板血漿的制備方法,初步構(gòu)建了具有一定緩釋功能的活性脫細(xì)胞肌腱支架,所構(gòu)建的活性支架具有一定的促進(jìn)細(xì)胞增殖的功能。 第三章活性肌腱支架修復(fù)兔跟腱缺損 目的：建立動(dòng)物缺損模型評(píng)價(jià)活性脫細(xì)胞肌腱支架的修復(fù)能力,為其實(shí)際應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：取日本大耳白兔,用預(yù)先抗凝的注射器于兔耳中心動(dòng)脈取血,按第二章的方法制備富含血小板血漿。按第一章的方法制備脫細(xì)胞肌腱支架,并按第二章方法構(gòu)建活性脫細(xì)胞肌腱支架。戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈注射麻醉,后肢小腿后側(cè)備皮,暴露跟腱分離內(nèi)側(cè)束,切除中段2cm,造成跟腱缺損,保留淺部外側(cè)束和深部束；組1采用相同長(zhǎng)度的活性脫細(xì)胞肌腱作為植入物,組2用對(duì)側(cè)淺內(nèi)側(cè)束作為移植物修復(fù)缺損,組3采用相同長(zhǎng)度粗細(xì)的異種牛肌腱作為植入物,組4不予修復(fù),直接縫合。石膏繃帶固定,單籠飼養(yǎng),正常飲食,術(shù)后連續(xù)3d肌注慶大霉素。術(shù)后觀察動(dòng)物是否存活,并記錄動(dòng)物飲食、精神狀態(tài),有無腹瀉、感染,傷口愈合及術(shù)側(cè)肢體活動(dòng)情況。于術(shù)后3d、2w、4w、8w、12w,每組隨機(jī)取3只兔處死,觀察大體及組織學(xué)修復(fù)情況。 結(jié)果：術(shù)后各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飲食正常,精神狀態(tài)佳,無腹瀉,固定肢肌肉存在不同程度萎縮,去除石膏后逐漸恢復(fù)。組1與組2相似。傷口愈合良好,傷口無紅腫及感染；無跟腱斷裂,植入腱和宿主腱吻合端結(jié)合緊密,未發(fā)現(xiàn)移植物與自體肌腱縫合端拉長(zhǎng)或斷裂,移植物與周圍組織有不同程度的粘連,組1和組2相似,組3移植肌腱受到機(jī)體排斥,組4斷腱未愈合。術(shù)后3d,植入腱與宿主腱吻合處可見垂直肌腱長(zhǎng)軸生長(zhǎng)的肉芽組織,中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主,細(xì)胞向植入腱內(nèi)生長(zhǎng),周圍纖維包裹,有小血管形成；術(shù)后2w,對(duì)照組自體植入腱與宿主腱間的肉芽組織成熟,炎性細(xì)胞和毛細(xì)血管較少,可見大量成纖維細(xì)胞,新生的膠原纖維垂直于肌腱長(zhǎng)軸,組織結(jié)構(gòu)融為一體,靠近吻合端的植入腱內(nèi)改建活躍,脫細(xì)胞植入腱與宿主腱吻合端所見與對(duì)照組相似,連接近端可見新生纖維血管組織、大量成纖維細(xì)胞。4w,植入腱與宿主腱間的肉芽組織炎性細(xì)胞減少,毛細(xì)血管、成纖維細(xì)胞增多,脫細(xì)胞活性肌腱與自體肌腱相比,炎性細(xì)胞和毛細(xì)血管略多。術(shù)后8w,植入腱與宿主腱間的肉芽組織更加成熟,炎性細(xì)胞很少,大量成纖維細(xì)胞,縫合口處可見大量沿肌腱長(zhǎng)軸走行,排列密集的新生膠原纖維,脫細(xì)胞活性肌腱與自體肌腱相比,無明顯差別。術(shù)后12w膠原纖維排列更加規(guī)則,膠原束更為緊密,但與正常肌腱相比,膠原纖維排列及成熟度仍略差,自體植入腱與脫細(xì)胞植入腱沒有明顯差別。Masson染色結(jié)果顯示隨時(shí)間延長(zhǎng),新生膠原逐漸增多,并取代陳舊膠原。2w時(shí)新生膠原較少,以陳舊膠原為主；4w時(shí)仍以陳舊膠原占多數(shù),新生膠原較2w時(shí)增多；8w時(shí)見大量的新生膠原,陳舊膠原大部分被取代。 結(jié)論：采用兔跟腱缺損模型,利用活性脫肌腱支架修復(fù)缺損跟腱,移植后機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)及體內(nèi)組織學(xué)轉(zhuǎn)歸與自體植入腱相似,可有效地修復(fù)肌腱缺損,為臨床應(yīng)用提供了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R686

【參考文獻(xiàn)】

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2 張泉;鄧飛龍;;骨形態(tài)發(fā)生蛋白復(fù)合膠原釋放系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2012年02期

3 張發(fā)惠,鄭和平,張朝春,陳日齊;長(zhǎng)時(shí)段超深低溫冷凍保存對(duì)兔肌腱力學(xué)性能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用骨科雜志;2004年01期

4 陳孫裕;李堅(jiān);肖展豪;潘玲;;異體跟腱骨移植修復(fù)髕韌帶近止點(diǎn)斷裂[J];生物骨科材料與臨床研究;2011年06期

5 倪峰;;三種生物材料在預(yù)防運(yùn)動(dòng)損傷導(dǎo)致肌腱粘連中的作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年21期

6 高春光;林月秋;;異種肌腱移植免疫反應(yīng)的處理方法[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年18期

7 李梁;趙輝;吳海山;;前交叉韌帶移植物選擇及重建中的相關(guān)問題[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年31期

8 李靖揚(yáng),艾合買提·玉素甫,劉大鵬,朱良,王振斌;兔同種異體肌腱移植的電鏡觀察[J];新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2005年05期

9 譚偉龍;錢萬紅;沈建忠;;過氧乙酸殺菌劑研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制;2008年09期

10 李幼忱;周沫;李寶興;趙亞平;;過氧乙酸-乙醇法對(duì)同種軟組織移植物病毒滅活研究進(jìn)展[J];中國(guó)消毒學(xué)雜志;2010年06期

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本文編號(hào)：1773184