本文選題：淫羊藿苷 + 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞�。� 參考：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：目的：1、兔股骨頭壞死模型制備：通過(guò)液氮冷凍法制備兔股骨頭壞死模型,探討兔股骨頭壞死的病理學(xué)變化過(guò)程,為研究股骨頭壞死提供更多可參考的造模方法。2、淫羊藿苷濃度篩選：通過(guò)檢測(cè)不同濃度淫羊藿苷體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化的效果,篩選出最佳濃度和最佳時(shí)間。3、兔股骨頭壞死研究：在液氮冷凍法成功制備兔股骨頭壞死的模型的基礎(chǔ)上,聯(lián)合髓芯鉆孔減壓術(shù),在保障細(xì)胞活性與數(shù)量的前提下,將經(jīng)淫羊藿苷體外誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞植入股骨頭壞死減壓區(qū),以期達(dá)到阻止骨破壞和促使新骨形成,增強(qiáng)修復(fù)成骨能力,提高股骨頭壞死治療效果,為臨床探索股骨頭壞死治療方案提供理論支持。方法：1.淫羊藿苷誘導(dǎo)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究：取生長(zhǎng)1周健康新西蘭白兔體外提取骨髓間充質(zhì)原代干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),選取具有較高繁殖力的二代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)0～10μMol淫羊藿苷體外誘導(dǎo)24h、48h、72h,制作各濃度各時(shí)間點(diǎn)樣本,經(jīng)MTT檢測(cè)、ALP活性檢測(cè)、ALP染色、茜素紅染色等技術(shù)檢測(cè),結(jié)合熒光定量PCR測(cè)定BMP2、COL-1、OPN基因上調(diào)情況、western blot技術(shù)測(cè)定BMP2、COL-1、OPN蛋白表達(dá)影響。所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)分析,篩選出最佳濃度、最佳時(shí)間點(diǎn)淫羊藿苷體外誘導(dǎo)出最佳活性和增殖能力的干細(xì)胞,與能夠提供營(yíng)養(yǎng)并保持細(xì)胞活性的載體基質(zhì)膠混合備用,基質(zhì)膠冷凍保存呈液體,在22-35-C能夠快速成膠。2.淫羊藿苷體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)股骨頭壞死的實(shí)驗(yàn)研究：選取60只健康成年兔納入本實(shí)驗(yàn),將其分為A組(空白對(duì)照12只),B組(模型組12只),C組(髓芯減壓治療組12只),D組(髓芯減壓聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療組12只),E組(髓芯減壓聯(lián)合淫羊藿苷誘導(dǎo)形成骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療組12)。采用改良式液氮冷凍法制備股骨頭壞死兔的動(dòng)物模型,術(shù)后2周隨機(jī)取3只實(shí)驗(yàn)兔,麻醉下行X線、螺旋CT檢查后采用耳緣靜脈空氣栓塞處死,解剖取材,行Micro-CT檢查及病理組織形態(tài)學(xué)檢測(cè),多項(xiàng)檢測(cè)確保造模成功。減壓組、干細(xì)胞組、淫羊藿苷組分批行髓心鉆孔減壓術(shù),干細(xì)胞組、淫羊藿苷組在股骨頭壞死減壓區(qū)注入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、經(jīng)過(guò)淫羊藿苷誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,各實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后2周、4周、8周隨機(jī)取3只實(shí)驗(yàn)兔在麻醉下行X線、螺旋CT檢查,行耳緣靜脈空氣栓塞處死,解剖取材,行Micro-CT Micro-CT三維重建及骨微觀結(jié)構(gòu)參數(shù)計(jì)算、病理組織學(xué)HE染色、免疫熒光等技術(shù)檢測(cè)股骨頭壞死區(qū)的修復(fù)情況。各組所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,得出結(jié)論。成果：1、采用液氮冷凍法成功制備兔股骨頭壞死模型：通過(guò)影像學(xué)及病理組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)證實(shí)了液氮冷凍術(shù)后2周即出現(xiàn)兔股骨頭壞死的典型表現(xiàn),并獲得各實(shí)驗(yàn)組股骨頭壞死病理演變過(guò)程的客觀數(shù)據(jù)。2、成功提取、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,篩選出了淫羊藿苷誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳濃度和最佳時(shí)間點(diǎn),選定了基質(zhì)膠和誘導(dǎo)后干細(xì)胞混合物以保障植入壞死區(qū)細(xì)胞活性的方法。3、成功獲得各組兔股骨頭壞死各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)指標(biāo)原始數(shù)據(jù),經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,為臨床股骨頭壞死的研究提供了理論支持。結(jié)論：1、液氮冷凍法制備兔股骨頭壞死模型,術(shù)后2周經(jīng)影像學(xué)及病理組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)股骨頭骨小梁變細(xì)稀疏,排列混亂并有部分?jǐn)嗔?骨髓腔內(nèi)造血細(xì)胞減少,細(xì)胞變性死亡,空骨陷窩明顯增多,此類骨細(xì)胞輪廓消失、核固縮,髓腔內(nèi)充血、凝血,并有大量壞死組織碎片存在,股骨頭負(fù)重區(qū)骨陷窩內(nèi)軟骨細(xì)胞萎縮、核固縮,為股骨頭壞死病理學(xué)的典型表現(xiàn),證實(shí)了液氮冷凍術(shù)后2周即可制備兔股骨頭壞死模型。2、0-l0μMol淫羊藿苷體外誘導(dǎo)二代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞24h、48h、72h的檢測(cè)結(jié)果顯示：淫羊藿苷作用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞48h,隨著濃度的增加,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞數(shù)目增加,在48h內(nèi)淫羊藿苷對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有增殖作用,在1μM時(shí)增殖活性最高。淫羊藿苷作用時(shí)間為72h時(shí),BMSCs的增殖能力下降,分化能力增強(qiáng)。淫羊藿苷促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和風(fēng)化的最佳濃度是1μMol,最佳時(shí)間點(diǎn)是48h。3、通過(guò)Micro-CT對(duì)股骨頭內(nèi)部微觀結(jié)構(gòu)觀察,模型組股骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂稀疏、間距增寬、數(shù)量減少,部分存在骨小梁骨折,股骨頭骨形態(tài)變小,骨礦鹽密度明顯減少,而經(jīng)過(guò)治療的髓芯減壓組,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組,淫羊藿苷組股骨頭壞死病變都有所改善,且淫羊藿苷組效果最好。以上結(jié)果表明,淫羊藿苷聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療股骨頭壞死效果明顯,淫羊藿苷通過(guò)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成熟來(lái)發(fā)揮治療作用的。統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)Micro-CT掃描所得骨結(jié)構(gòu)主要參數(shù)、病理形態(tài)學(xué)、免疫熒光技術(shù)分析,髓芯減壓聯(lián)合淫羊藿苷誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療組的療效顯著優(yōu)于髓芯減壓聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療組、髓芯減壓治療組、模型組。初步證實(shí)了髓心減壓過(guò)程中注入經(jīng)淫羊藿苷體外誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞明顯促進(jìn)了股骨頭壞死的修復(fù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.8

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本文編號(hào)：1742123