本文選題：心律失常 + 內(nèi)向整流鉀通道　； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.建立哇巴因(ouabain)誘發(fā)成年大鼠離體和在體心律失常模型,觀察內(nèi)向整流鉀通道激動(dòng)劑扎考必利(zacopride)對模型大鼠心律失常的作用。2.應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀察zacopride對大鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞膜內(nèi)向整流鉀電流(IK1)、靜息電位(RMP)及誘發(fā)延遲后除極(DADs)的影響,分析zacopride抗心律失常的電生理機(jī)制。方法:1.Ouabain誘發(fā)大鼠離體和在體心律失常模型的建立(1)Ouabain誘發(fā)大鼠離體心律失常模型健康SD大鼠,50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,開胸游離心臟并且懸掛于Langendorff裝置上,使用低鉀臺氏液進(jìn)行主動(dòng)脈逆行灌流,流速為8 mL/min,觀察至少30 min待心電圖波形穩(wěn)定后使用給藥泵給藥。觀察各組大鼠心電圖變化,記錄藥物干預(yù)后30 min內(nèi)室性期前收縮的個(gè)數(shù)、室速和室顫持續(xù)時(shí)間及發(fā)生率。(2)Ouabain誘發(fā)大鼠在體心律失常模型健康SD大鼠35只隨機(jī)分為5組,30 mg/kg水合氯醛腹腔注射麻醉后將大鼠置于鼠板上,連接固定肢體導(dǎo)聯(lián)。采用BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖,連續(xù)觀察30 min心電圖無異常后尾靜脈給藥,記錄藥物干預(yù)后1 h內(nèi)室性期前收縮的個(gè)數(shù)、室速和室顫持續(xù)時(shí)間及發(fā)生率。2.大鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞急性分離健康SD大鼠,50 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,頸動(dòng)脈放血并且迅速開胸取心臟,置于提前以100%氧氣沖灌的4℃無鈣臺氏液中進(jìn)行修剪,然后將心臟懸掛于Langendorff心臟灌流裝置上經(jīng)主動(dòng)脈逆行灌流。首先用無鈣臺氏液灌流8～10 min后,再改用膠原酶液循環(huán)灌流15～20 min。在整個(gè)灌流過程中始終保持恒溫37℃,恒壓80 cmH2O,并持續(xù)以100%氧氣通氣。待心室肌組織變大變軟后選擇左心室剪下,置于KB液中剪碎,輕輕吹打3～5 min后經(jīng)150μm孔徑的濾網(wǎng)過濾得到單個(gè)心室肌細(xì)胞,保存于KB液中,室溫放置3～4 h穩(wěn)定后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.全細(xì)胞膜片鉗記錄吸取預(yù)先存放于KB液中的細(xì)胞懸液1～2滴滴入倒置顯微鏡的細(xì)胞槽(約1 mL)中,靜置8～10 min,待細(xì)胞充分貼壁后,用含鈣臺氏液灌流復(fù)鈣,流速定為2 mL/min。玻璃電極內(nèi)充灌電極內(nèi)液,電阻約為2～5 MΩ。鏡下選取長桿狀、橫紋清晰、無自主收縮的心室肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對象,將玻璃電極緩慢移至細(xì)胞表面,施加負(fù)壓從而在細(xì)胞膜和電極尖端之間形成高阻封接(即電阻達(dá)到GQ),負(fù)壓破膜后采用膜電容補(bǔ)償和串聯(lián)電阻補(bǔ)償后進(jìn)行全細(xì)胞記錄。相關(guān)離子電流經(jīng)Axopatch 200B膜片鉗放大器、Digidate1440A數(shù)模轉(zhuǎn)換器以及Pclamp8.0采集、貯存及分析并且最終保存于電腦硬盤備用。記錄大鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞IK1和RMP,并誘發(fā)DADs。結(jié)果:1.Zacopride對ouabain誘發(fā)成年大鼠離體心律失常具有顯著的抑制作用1 μmol/Lzacopride可顯著抑制10 μmol/Louabain灌流誘發(fā)的離體大鼠心臟室性心律失常。在ouabain組,給藥后30 min內(nèi)100%大鼠發(fā)生室速,持續(xù)時(shí)間(218.40±29.61)s;87.5%大鼠出現(xiàn)室顫,持續(xù)時(shí)間(10.71±2.90)s;期前收縮個(gè)數(shù)為 751±24(n=8,P0.01)。而 ouabain+zacopride組,給藥后 30 min 完全消除了室顫的發(fā)生;25%大鼠發(fā)生室速,持續(xù)時(shí)間縮短至(18.85±12.40)s;期前收縮個(gè)數(shù)減少至 125±14(n=8,P0.01)。在ouabain+zacopride 混合灌流液中加入 1 μmol/LBaCl2后,通過比較發(fā)現(xiàn)期前收縮個(gè)數(shù)、室速室顫持續(xù)時(shí)間及發(fā)生率均與之前單獨(dú)灌流ouabain無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.Zacopride對ouabain誘發(fā)成年大鼠在體心律失常具有顯著的抑制作用15 μg/kg zacopride可顯著抑制ouabain所致麻醉大鼠室性心律失常。在ouabain組,給藥后1小時(shí)內(nèi)100%大鼠發(fā)生室速,持續(xù)時(shí)間(1250±59)s;71.4%大鼠出現(xiàn)室顫,持續(xù)時(shí)間(19.14±6.49)s;期前收縮個(gè)數(shù)為2281±115(n=7,P0.01)。而ouabain+zacopride組,給藥后1小時(shí)完全消除了室顫的發(fā)生;28.6%大鼠發(fā)生室速,持續(xù)時(shí)間縮短至(15.57±10.10)s;期前收縮的個(gè)數(shù)減少至171±25(n=7,P0.01)。其抗心律失常效應(yīng)與陽性對照藥利多卡因(lidocaine,7.5mg/kg)相似,甚至在控制期前收縮方面略優(yōu)于利多卡因(n=7,P0.01)。3.Zacopride可以逆轉(zhuǎn)ouabain對大鼠心室肌細(xì)胞IK1的抑制效應(yīng)10μmol/L ouabain灌流可使大鼠心室肌細(xì)胞IK1明顯減小,內(nèi)向電流(-100 mV)和外向電流(-60 mV)分別從(-10.69±0.21)pA/pF 和(3.11±0.20)pA/pF 降低到(-6.61±0.26)pA/pF和(1.97±0.17)pA/pF(n=30,P0.05)。在灌流液中加入了0.1～10 μmol/L zacopride后,IK1呈不同程度地恢復(fù)。其中,1 μmol/L為zacopride的最大效應(yīng)濃度,可以使IK1內(nèi)向電流(-100 mV)和外向電流(-60 mV)分別恢復(fù)到(-11.09±0.37)pA/pF和(3.29±0.31)pA/pF(n=12,P0.05),接近于對照組水平。該作用可被1 μmol/L BaCl2阻斷,加入該濃度的阻斷劑混合灌流后,心室肌細(xì)胞的內(nèi)向電流和外向電流均減小(n= 12,P0.01 和P0.05)。4.Zacopride可以逆轉(zhuǎn)ouabain減小大鼠心室肌細(xì)胞RMP的作用10 μmol/L ouabain灌流可使大鼠心室肌細(xì)胞RMP從(-74.79±0.19)mV減小至(-70.27±0.21)mV(n=30,P0.01);給予 0.1～10 μmol/L zacopride 灌流后,減小的RMP呈不同程度恢復(fù)并且在1μmol/L時(shí)達(dá)最大效應(yīng),使心室肌細(xì)胞RMP恢復(fù)至(-74.98±0.44)mV(n=10,P0.01),接近于對照組水平。該作用可被1 μmol/LBaCl2阻斷,給予該濃度的阻斷劑混合灌流后,心室肌細(xì)胞RMP最終減小至(-70.67±0.37)mV(n=10,P0.01),與ouabain 組水平相似。5.Zacopride對ouabain誘發(fā)大鼠心室肌細(xì)胞DADs的抑制作用1 μmol/L zacopride可顯著抑制大鼠心室肌細(xì)胞DADs的發(fā)生,使其發(fā)生率由91.67%下降至 12.5%(n=24,P0.05);在灌流液中加入1μmol/LBaCl2后,DADs 再次出現(xiàn)。結(jié)論:1.內(nèi)向整流鉀通道激動(dòng)劑zacopride對ouabain誘發(fā)的成年大鼠離體和在體室性心律失常具有顯著的抑制作用。2.在0.1～10 μmol/L范圍內(nèi),zacopride可不同程度地恢復(fù)ouabain灌流所減小的大鼠心室肌細(xì)胞IK1和RMP,1μmol/L時(shí)達(dá)zacopride的最大效應(yīng)濃度。1 μmol/L zacopride可顯著抑制大鼠心室肌細(xì)胞DADs的發(fā)生。綜上,本研究證實(shí),zacopride對ouabain誘發(fā)成年大鼠室性心律失常具有顯著的抑制作用,其抗心律失常機(jī)制與zacopride適度增強(qiáng)IK1,使RMP負(fù)值增大和抑制DADs有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1736797