選題：蒙藥　視角：肉蔻-5味丸　引自：《北京中醫(yī)藥大學》2015年博士論文

【摘要】：[研究目的]1.蒙醫(yī)經(jīng)典文獻中沒有抑郁癥的記載,但根據(jù)其發(fā)病外緣及典型臨床表現(xiàn)與癥狀,抑郁癥與心“赫依”和“巴達干”的有著密切關系。蒙醫(yī)學認為心與精神情志的關系最為密切,抑郁癥的病位在于心。故而本研究蒙醫(yī)學理論前提下,與抑郁癥的國內外最新研究動態(tài)和趨勢相結合,選擇具有改善氣血運行、養(yǎng)心安神之功效的傳統(tǒng)蒙藥肉蔻-5味丸,通過研究其對CUM大鼠的海馬組織的單胺類遞質、神經(jīng)營養(yǎng)因子以及血清細胞因子的影響,闡明肉蔻-5味丸的抗抑郁作用及其可能機制。2.采用現(xiàn)代科技手段,結合抑郁癥的發(fā)病機制的復雜性,多途徑研究肉蔻-5味丸的抗抑郁作用機制,在分子生物學角度進一步證實其抗抑郁效應,為臨床應用與研究提供實驗依據(jù)。3.從蒙醫(yī)學角度深入探討抑郁癥的病因病機,充分體現(xiàn)蒙醫(yī)藥學獨特的理論及診療方法,為抗抑郁藥物作用機制研究提供新的思路以及肉蔻-5味丸的臨床應用與開發(fā)奠定基礎。[研究方法]1.動物分組及給藥：將SD大鼠60只適應性飼養(yǎng)1周后按體質量隨機分為6組,每組10只。分別為正常組、模型組、陽性對照組、肉蔻-5味丸低、中、高劑量組。正常組每籠飼養(yǎng)5只,自由飲水攝食,不接受任何刺激。其余組單籠飼養(yǎng),并接受21d的刺激。造模同時,對各組大鼠進行給藥,陽性對照組給予鹽酸氟西汀(3.6mg·kg-1),肉蔻-5味丸低、中、高劑量組(分別給予肉蔻-5味丸0.8g、0.4g、0.2g·kg-1),正常組和模型組給予等量生理鹽水。每日1次,連續(xù)給藥21d,應激結束時進行相關指標的檢測。2.造模方法及評價：由慢性輕度不可預見性應激(CUMS),配合孤養(yǎng)的方法復制抑郁模型。應激結束時,以大鼠體重變化、Open-field行為活動檢測實驗、1%糖水消耗實驗、Morris水迷宮學習記憶能力檢測實驗來進行行為學檢測及評價模型。3.制備標本及檢測指標：行為學觀測結束后,麻醉動物,將大鼠開腹,腹主動脈取血,待凝血后3000r·min-1離心15分鐘,取上清液保存待測。采血結束后將大鼠斷頭處死,在冰上迅速剝離大腦取海馬,用液氮快速冷凍后保存待測。①采用ELISA技術檢測大鼠海馬5-HT、DA、NE單胺遞質的含量及血清IL-1、IL-2、IL-6、IFN-a、IFN-r、TNF-a、ACTH、CORT細胞因子的含量。②采用免疫組化方法檢測大鼠海馬CAl和CA3區(qū)的BDNF蛋白表達。③采用RT-PCR技術檢測大鼠海馬組織的BDNF mRNA的表達。4.采用SPSS19.00統(tǒng)計軟件處理,所有數(shù)據(jù)以X±s表示,選用單因素方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。[實驗結果]1.肉蔻-5味丸對CUM大鼠行為學的影響1.1對大鼠體重變化的影響：實驗過程中受刺激大鼠體重變化較慢,實驗第7、14、21天模型組大鼠體質量較正常組明顯降低(P0.05,P0.01)。實驗第14天肉蔻-5味丸中劑量組大鼠體質量顯著高于模型組(P0.05)；實驗第21天陽性對照組和肉蔻-5味丸中、低劑量組體質量增長顯著高于模型組(P0.05,P0.05)。結果表明,肉蔻-5味丸和西藥氟西汀均能提高CUM大鼠的體重變化。1.2對大鼠1%蔗糖水消耗量的影響：與空白組比較,模型組大鼠1%蔗糖水消耗量顯著降低(P0.05)。與模型組相比,陽性對照組、肉蔻-5味丸高劑量組大鼠的1%蔗糖水消耗量顯著增加(P0.05)。結果表明,肉蔻-5味丸和西藥氟西汀均提高CUMS大鼠的1%蔗糖水消耗量。1.3對大鼠Open-Field行為活動的影響：與空白組比較,模型組大鼠水平穿越格數(shù)和豎立次數(shù)顯著降低(P0.01)。與模型組相比,陽性對照組、肉蔻-5味丸高、中劑量組大鼠水平穿越格數(shù)顯著增加(P0.05,P0.01),肉蔻-5味丸高劑量組大鼠豎立次數(shù)顯著增加(P0.01)。結果表明,肉蔻-5味丸可改善CUMS大鼠的對外界新鮮環(huán)境的好奇心降低。1.4對大鼠學習記憶能力的影響：應激結束時,與空白組比較,模型組逃避潛伏期顯著增加(P0.01)。與模型組比較,氟西汀與肉蔻-5味丸高、低劑量組大鼠逃避潛伏期均顯著縮短(P0.05,0.01),中劑量組無顯著差異,但有一定的縮短趨勢。與空白組比較,模型組平均穿越平臺次數(shù)減少,而氟西汀與肉蔻-5味丸可不同程度增加模型大鼠平均穿越平臺次數(shù),但無顯著差異。結果表明,肉蔻-5味丸和氟西汀均可提高CUM大鼠的學習記憶能力,具有一定的抗抑郁作用。2.肉蔻-5味丸對CUM大鼠血清細胞因子的影響2.1對IL-1、IL-2、IL-6的影響：與正常組比較,模型組大鼠血清TL-1、IL-2、IL-6的含量顯著升高(P0.01)。與模型組相比,陽性對照組和肉蔻-5味丸高劑量組大鼠血清IL-1的含量均顯著降低(P0.05)；肉蔻-5味丸低劑量組無顯著差異,但有一定的降低趨勢。2.2對IFN-a、IFN-r、TNF-a的影響：與正常組比較,模型組大鼠血清IFN-r、TNF-a的含量顯著升高(P0.01)。與模型組相比,陽性對照組和肉蔻-5味丸高劑量組大鼠血清IFN-r、TNF-的含量均顯著降低(P0,05)；肉蔻-5味丸中、低劑量組無顯著差異,但有一定的降低趨勢。2.3對CORT和ACTH的影響：與正常組比較,模型組大鼠血清ACTH和CORT的含量顯著升高(P0.01)。與模型組相比,陽性對照組和肉蔻-5味丸高、中劑量組大鼠血清ACTH和CORT的含量均顯著降低(P0.05,0.01)；肉蔻-5味丸低劑量組血清無顯著差異,但有一定的降低趨勢。3.對大鼠海馬單胺類神經(jīng)遞質的影響：與正常組比較,模型組大鼠海馬5-HT, NE,DA的含量均顯著降低(P0.05,P0.01)。與模型組相比,陽性對照組海馬5-HT,NE的含量均顯著增加(P0.05),肉蔻-5味丸高劑量組海馬NE的含量與中劑量組海馬5-HT, DA的含量均顯著增加(P0.05)。4.對大鼠海馬BDNF蛋白表達的影響：CUMS引起大鼠海馬BDNF表達改變,主要表現(xiàn)在CA1、CA3區(qū),其中CA3區(qū)更加突出。正常對照組大鼠海馬CA1和CA3區(qū)陽性細胞排列密集,呈帶狀分布。模型組大鼠海馬BDNF免疫反應顯著減弱,與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學意義。氟西汀和肉蔻-5味丸組大鼠海馬BDNF表達均有不同程度的改善,其中肉蔻-5味丸中、大劑量組和西藥氟西汀組大鼠海馬CA3區(qū)BDNF陽性細胞排列密集,呈帶狀分布,陽性細胞數(shù)目百分比和IOD增加明顯,與模型組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.01)。肉蔻-5味丸中劑量組大鼠海馬CA13區(qū)BDNF陽性細胞數(shù)目百分比和IOD增加明顯,與模型組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.對大鼠海馬BDNF mRNA表達的影響：CUMS引起大鼠海馬BDNF mRNA表達改變,與正常對照組顯著減弱(P0.05)。氟西汀和肉蔻-5味丸組大鼠海馬BDNF mRNA表達均有不同程度的提高(P0.05,P0.01),其中肉蔻-5味丸低劑量組大鼠海馬BDNF mRNA表達(P0.05)。[結論]1.本研究采用的慢性輕度不可預見性應激(CUMS),配合孤養(yǎng)的方法復制抑郁模型,較好地模擬抑郁癥的自然病理過程及學習記憶能力障礙、單胺類神經(jīng)遞質降低、免疫細胞因子激活、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏等行為學和病理學改變的特征,具有較強的科學性和可靠性。2.肉蔻-5味丸能改善CUM大鼠的行為學改變,可提高Open-Field行為活動和學習記憶能力,對抑郁癥具有防治作用。3.肉蔻-5味丸可提高CUM大鼠腦內5-HT、NE、DA單胺遞質,其作用可能單胺類神經(jīng)遞質的含量有關。4.肉蔻-5味丸可不同程度抑制CUM大鼠血清IL-1、IL-2、IL-6、IFN-a、IFN-r、 TNF-a、ACTH、CORT等細胞因子激活,其作用途徑可能通過免疫抑制及調控HPA軸功能來發(fā)揮抗抑郁作用。5.肉蔻-5味丸對CUM大鼠海馬組織的BDNF蛋白表達及mRNA具有上調作用,對海馬神經(jīng)元受到損傷時具有較好的神經(jīng)保護,修復和促進再生作用。此機制可能肉蔻-5味丸的抗抑郁作用機制的重要途徑之一。6.傳統(tǒng)蒙藥肉蔻-5味丸與西藥鹽酸氟西汀膠囊對CUM大鼠的抗抑郁作用比較結果來看,肉蔻-5味丸在行為學及免疫抑制、海馬神經(jīng)內分泌、神經(jīng)元營養(yǎng)保護方面作用顯著,提示肉蔻-5味丸的抗抑郁作用類似于氟西汀,而且作為傳統(tǒng)而天然藥物,其毒副作用較少,具有進一步研究價值,為拓展其適應癥奠定基礎。
[Abstract]:Objective : To study the antidepressant effect and the possible mechanism of the traditional Mongolian medicine , which has the effect of improving the operation of qi and blood and nourishing heart and tranquilizing the mind . Methods : The rats were randomly divided into 6 groups : normal group , model group , positive control group , myristome - 5 pills low , medium and high dose group . The expression of BDNF mRNA in hippocampus of rats was detected by immunohistochemistry .
The quality of the low - dose group was significantly higher than that in the model group ( P0.05 , P0.05 ) . Compared with the model group , the content of IL - 1 , IL - 2 and IL - 6 in the model group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the model group , the content of IL - 1 , IL - 2 and IL - 6 in the model group increased significantly ( P0.01 ) .
The levels of IFN - r and TNF - a in the model group were significantly higher than those in the normal group ( P0.01 ) . Compared with the model group , the levels of IFN - r and TNF - a in the model group were significantly lower than those in the model group ( P0.05 ) .
Compared with the model group , the contents of ACTH and CORT in the serum of the model group were significantly lower than those in the model group ( P0.05 , 0.01 ) .
The levels of 5 - HT , NE , DA in hippocampus of model group were significantly lower than those in normal group ( P0.05 , P0.01 ) . Compared with the model group , the content of 5 - HT and NE in hippocampus of the positive control group increased significantly ( P0.05 ) . The results showed that the expression of BDNF mRNA in hippocampus of CUM rats was significantly decreased ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R29

【參考文獻】

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本文編號：1730809