本文選題：苯妥英鈉　切入點(diǎn)：普羅布考　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：癲癇是最常見而嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一，患者多需終生服藥。苯妥英鈉從1938年開始用于抗癲癇治療,其作用是阻止癇性放電向周圍正常組織擴(kuò)散，對(duì)全面性強(qiáng)直陣攣性發(fā)作、強(qiáng)直發(fā)作及部分性發(fā)作效果較好，但其治療窗窄易出現(xiàn)中毒反應(yīng)。長期大劑量服用和高血藥濃度時(shí)易出現(xiàn)小腦損害癥狀，可能與促進(jìn)小腦顆粒細(xì)胞及浦肯野細(xì)胞凋亡有關(guān)。普羅布考具有調(diào)脂、抗炎、抗氧化等作用，近年來研究表明其在神經(jīng)系統(tǒng)也有抗氧化作用，從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用，但其是否會(huì)對(duì)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生影響仍有待于進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)主要通過研究普羅布考及苯妥英鈉對(duì)小鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響，探討苯妥英鈉的神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)及普羅布考是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。 方法： 1分組及給藥：清潔級(jí)健康4周齡雄性昆明小鼠50只，重量為（22±2g），隨機(jī)分為NS（生理鹽水）組、PHT（苯妥英鈉）組和PHT+PB（普羅布考）混合組。NS組、PHT組每組各10只；PHT+PB混合組30只，按PB劑量分低、中、高劑量3個(gè)亞組，各亞組10只。采用自制灌胃針進(jìn)行灌胃，具體劑量為PHT組給予100mg/(kg.d)進(jìn)行藥物干預(yù)；PHT+PB低、中、高劑量混合組均給與PHT100mg/(kg.d)，分別給予PB250mg/(kg.d)、500mg/(kg.d)、1000mg/(kg.d)；NS組給予等量生理鹽水，混合劑量組兩次給藥間隔為30min；以上各組每天藥物干預(yù)1次；共10天。 2取材及檢測：各組小鼠用10%水合氯醛(0.35ml/100g)麻醉，仰臥固定，剪開胸腔，暴露心臟，從心尖處插入灌注針，同時(shí)從右心耳處剪開心臟放血。先快速以0.9%生理鹽水沖洗（50-100ml),再用200ml4%多聚甲醛磷酸緩沖液固定。注射完畢后立即斷頭，迅速取出其大腦和小腦，放入4%的多聚甲醛固定，常規(guī)乙醇梯度脫水，二甲苯透明，浸臘，包埋，選取大腦和小腦連續(xù)冠狀切片。通過免疫組化檢測各組神經(jīng)元細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白陽性表達(dá)情況并以AO值表示各組結(jié)果；通過TUNEL檢測各組神經(jīng)元凋亡情況并以細(xì)胞凋亡率表示各組結(jié)果。 3統(tǒng)計(jì)分析：通過SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，本實(shí)驗(yàn)為完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的多個(gè)樣本均數(shù)比較的方差分析，組間均數(shù)比較使用SNK-q檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1HE染色： 1.1海馬神經(jīng)元HE染色：NS組細(xì)胞排列整齊，輪廓清晰完整，胞漿透明，胞核圓形或橢圓形，核仁清晰，形態(tài)正常，未見明顯細(xì)胞凋亡。PHT組神經(jīng)元細(xì)胞排列散亂，細(xì)胞間距增大、輪廓模糊，胞核固縮深染及周圍空泡形成。PHT+PB低劑量混合組海馬神經(jīng)元排列疏松，凋亡細(xì)胞數(shù)較多。PHT+PB高劑量混合組神經(jīng)元排列尚整齊，周圍散在凋亡細(xì)胞。PHT+PB中劑量混合組細(xì)胞凋亡情況介于PHT+PB高劑量組與PHT+PB低劑量組之間。 1.2小腦神經(jīng)元HE染色：NS組細(xì)胞輪廓清晰完整，胞漿透明，形態(tài)正常，偶見凋亡細(xì)胞；PHT組及PHT+PB低劑量混合組細(xì)胞排列疏松，可見大量凋亡細(xì)胞；PHT+PB高劑量混合組可見散在凋亡細(xì)胞；PHT+PB中劑量混合組細(xì)胞凋亡情況介于PHT+PB高劑量組與PHT+PB低劑量組之間。 2Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)： 2.1Bax蛋白表達(dá) 促凋亡蛋白Bax的陽性表達(dá)為細(xì)胞胞漿呈黃褐色。 海馬神經(jīng)元：NS組偶有表達(dá)；PHT+PB低、中、高劑量混合組促凋亡蛋白Bax陽性表達(dá)細(xì)胞依次遞減；PHT+PB低劑量混合組陽性細(xì)胞聚集分布；PHT+PB高劑量混合組陽性細(xì)胞散在分布；PHT+PB中劑量混合組陽性細(xì)胞分布介于以上二者之間；PHT組陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)最多。通過統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞的平均光度值（AO值），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：不同處理組對(duì)促凋亡蛋白Bax陽性細(xì)胞的平均光度值有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)。 小腦神經(jīng)元：NS組偶有Bax蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞；PHT+PB低劑量混合組陽性細(xì)胞大量表達(dá)；PHT+PB高劑量混合組陽性細(xì)胞散在分布；PHT+PB中劑量混合組陽性細(xì)胞分布介于以上二者之間；PHT組陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)最多，著色最強(qiáng)。通過統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞AO值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出：不同處理組對(duì)促凋亡蛋白Bax陽性細(xì)胞的平均光度值有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組Bax陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)。 2.2Bcl-2蛋白表達(dá) 抗凋亡蛋白Bcl-2的陽性表達(dá)為細(xì)胞胞漿核膜出現(xiàn)重染棕黃色顆粒。海馬神經(jīng)元：NS組細(xì)胞表達(dá)明顯；PHT及PHT+PB低劑量混合組少量表達(dá)；PHT+PB中劑量混合組表達(dá)增多；PHT+PB高劑量混合組明顯表達(dá)；對(duì)Bcl-2陽性細(xì)胞的AO值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得出：不同處理組對(duì)抗凋亡蛋白Bcl-2陽性細(xì)胞的平均光度值有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)。 小腦神經(jīng)元：NS組表達(dá)明顯；PHT及PHT+PB低劑量混合組少量表達(dá)；PHT+PB中劑量混合組表達(dá)增多；PHT+PB高劑量混合組明顯表達(dá)；對(duì)Bcl-2陽性細(xì)胞的AO值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得出：不同處理組對(duì)抗凋亡蛋白Bcl-2陽性細(xì)胞的平均光度值有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)，，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組Bcl-2陽性細(xì)胞平均光度值有差別（P0.05)。 3TUNEL法檢測結(jié)果 TUNEL陽性細(xì)胞表現(xiàn)為胞核固縮，其內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆�；驁F(tuán)塊。海馬和小腦神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況：NS組偶見細(xì)胞凋亡，細(xì)胞之間排列規(guī)律整齊；PHT組可見細(xì)胞排列紊亂，大量凋亡細(xì)胞出現(xiàn)；PHT+PB低劑量混合組可見大量凋亡細(xì)胞，細(xì)胞體積縮小，形狀不規(guī)則；PHT+PB中劑量混合組可見較多凋亡細(xì)胞聚集；PHT+PB高劑量混合組凋亡細(xì)胞散在分布。通過計(jì)數(shù)各組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞凋亡率（%），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出： 海馬神經(jīng)元：不同處理組對(duì)海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組海馬神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)。 小腦神經(jīng)元：不同處理組對(duì)小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有影響；進(jìn)行組間分析得出：NS組與PHT組小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05),PHT組與PHT+PB低劑量混合組小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率無差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB中劑量混合組小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)，PHT組與PHT+PB高劑量混合組小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)，PHT+PB中劑量混合組與PHT+PB高劑量混合組小腦神經(jīng)元細(xì)胞平均凋亡率有差別（P0.05)。 結(jié)論： 1治療劑量PHT導(dǎo)致正常昆明小鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)增多，Bcl-2表達(dá)減少；TUNEL法檢測可見細(xì)胞排列紊亂，大量形狀不規(guī)則，胞核固縮的凋亡細(xì)胞出現(xiàn)。 2PHT+PB低、中、高劑量混合組中海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋Bax、Bcl-2表達(dá)存在差異：PHT+PB低劑量混合組Bax表達(dá)增多，Bcl-2表達(dá)減少；PHT+PB高劑量混合組Bax表達(dá)減少，Bcl-2表達(dá)增多；PHT+PB中劑量混合組Bax、Bcl-2的表達(dá)介于二者之間。 3PHT+PB低劑量混合組與PHT組相比海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋Bax、Bcl-2表達(dá)無差別（P0.05)；PHT+PB中、高劑量混合組與PHT組相比Bax、Bcl-2表達(dá)有差別（P0.05),說明普羅布考可能通過抑制Bax的表達(dá)，促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，抑制神經(jīng)細(xì)胞過度凋亡，從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用；且中、高劑量混合組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明這種保護(hù)作用可能存在劑量相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R742.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1719977