發(fā)布時間：2018-04-02 20:05

  本文選題：乙�；�　切入點：組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：乙�；揎検堑鞍踪|(zhì)翻譯后修飾（post-translationalmodification, PTM）的重要方式之一，可發(fā)生在組蛋白和多種炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，是調(diào)控炎癥相關(guān)基因表達的重要機制。乙�；揎検强赡娴�，乙�；腿ヒ阴；揎椃謩e由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（histoneacetyltransferases, HATs）和組蛋白去乙�；福╤istone deacetylases,HDACs）所催化。目前關(guān)于HDACs抑制劑對炎癥的調(diào)節(jié)效應(yīng)已有較多研究，但HATs抑制劑是否也可影響炎癥的發(fā)生發(fā)展卻少有報道。Garcinol是常用的HATs抑制劑，本文在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）/右旋半乳糖胺（D-galactosamine, D-Gal）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型中觀察了garcinol對肝損傷的調(diào)節(jié)效應(yīng)并初步探討了其可能的機制。 方法：雄性BALB/c小鼠腹腔注射LPS（10μg/kg）及D-Gal（700mg/kg）誘導(dǎo)急性爆發(fā)性肝損傷，溶劑或不同劑量garcinol（2.5mg/kg，5mg/kg，10mg/kg）在LPS/D-Gal處理前0.5h經(jīng)腹腔注入。LPS/D-Gal處理后1.5h，小鼠經(jīng)麻醉后斷頸處死，采集血漿及肝組織樣本，ELISA法檢測各樣本中TNF-α和IL-6的水平。另一批小鼠在LPS/D-Gal處理后6h處死并采集血漿及肝組織樣本。采用化學(xué)顯色法檢測血漿中轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST水平、測肝組織中丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量及caspase-3，-8，-9活性；免疫印跡法檢測肝組織中p65，乙�；痯65，p53，乙�；痯53，激活型caspase-3，，Bax及Bcl-2蛋白含量；肝組織經(jīng)福爾馬林固定后，常規(guī)HE染色觀察組織病理學(xué)改變，TUNEL法檢測細胞凋亡，免疫組織化學(xué)法檢測激活型caspase-3水平。 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)HATs抑制劑garcinol可明顯減輕LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝損傷，garcinol對模型小鼠肝內(nèi)炎癥反應(yīng)無明顯影響但可顯著抑制肝細胞凋亡。具體表現(xiàn)在：（1）Garcinol在2.5～10mg/kg范圍內(nèi)能劑量依賴性抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的血漿中ALT和AST的升高，這一效應(yīng)伴隨有模型小鼠肝組織內(nèi)MDA水平的降低及組織病理損傷的減輕；（2）LPS/D-Gal可誘導(dǎo)肝組織內(nèi)NF-κB p65亞單位上Lys310位點的乙�；揎�，這可被garcinol所抑制，但garcinol對LPS/D-Gal誘導(dǎo)的促炎性細胞因子TNF-α和IL-6的表達并無明顯影響；（3）TUNEL分析發(fā)現(xiàn)garcinol可顯著抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝細胞凋亡，這伴隨有肝組織內(nèi)激活型caspase-3水平的降低及caspase-3，-8，-9活性的下調(diào)；（4）Garcinol也可明顯抑制LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝組織內(nèi)p53上Lys379位點的乙�；揎�、下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達，但garcinol對抗凋亡蛋白Bcl-2的含量無明顯影響。 結(jié)論：本研究數(shù)據(jù)顯示HATs抑制劑garcinol對LPS/D-Gal誘導(dǎo)的肝損傷具有保護作用，這一保護效應(yīng)不伴隨有肝內(nèi)炎癥因子的表達降低，可能通過抑制p53的乙�；揎�、降低其活性，從而下調(diào)促凋亡蛋白Bax、抑制肝細胞凋亡而實現(xiàn)。結(jié)合相關(guān)文獻及我們的實驗資料，我們認為乙�；谘装Y反應(yīng)中具有多靶點、多樣化的復(fù)雜調(diào)節(jié)作用，其對炎癥總體結(jié)局的影響還存在許多尚未揭示的新規(guī)律，有待進一步的深入細致研究。此外，HATs抑制劑在爆發(fā)性肝炎中通過抑制凋亡而發(fā)揮保肝效應(yīng)，這對重癥肝炎防治有一定啟示意義，但這也需要開展進一步的機制探討和療效評估。
[Abstract]:Objective : Acetylation modification is one of the most important methods of post - translationalmodification . It is an important mechanism to regulate the expression of inflammation - related genes .

Methods : LPS ( 10渭g / kg ) and D - Gal ( 700mg / kg ) were injected intraperitoneally in male BALB / c mice .
Western blot was used to detect the protein content in the liver tissues , and the contents of p53 , p53 , caspase - 3 , Bax and Bcl - 2 protein in liver tissues were detected by Western blot .
After formalin fixation , routine HE staining was used to observe the histopathological changes . TUNEL method was used to detect apoptosis , and the level of caspase - 3 was detected by immunohistochemistry .

Results : The results showed that the effect of gartner on hepatic injury induced by LPS / D - Gal was significantly reduced , but the apoptosis of hepatocytes was significantly inhibited by gartner . The results showed that : ( 1 ) The dose - dependent inhibition of the increase of ALT and AST in the plasma induced by LPS / D - Gal was inhibited by Gardiner in the range of 2.5 锝

本文編號：1701905