本文選題：六味地黃丸　切入點：電磁輻射　出處：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:以900MHz手機頻率電磁輻射為實驗條件,以大鼠睪丸組織為研究對象,以睪丸組織形態(tài)學、超微結(jié)構、氧化抗氧化、Nrf2蛋白表達、DNA損傷修復蛋白γH2AX表達為主要觀測指標,選擇常用補腎中藥六味地黃丸為干預因素,觀察900MHz手機頻率電磁輻射對雄性大鼠睪丸組織結(jié)構、超微結(jié)構、氧化應激和Nrf2蛋白、γH2AX蛋白表達的影響,及六味地黃丸對其可能的作用。方法:50只清潔級健康SD雄性大鼠隨機均分為五組,每組10只,分別為:正常組,2h輻射組,4h輻射組,2h給藥組,4h給藥組。正常組不輻射,其余四組每天分別暴露于900MHz電磁輻射(370μW/cm2)輻射2h和4h,連續(xù)輻射30d,2h給藥組和4h給藥組在每次接受規(guī)定時間輻射后灌胃六味地黃丸混懸液(0.72g/kg.d),其余3組灌胃蒸餾水。實驗結(jié)束后各組大鼠禁食不禁水12h,以10%水合氯醛腹腔麻醉處死取材。光鏡、電鏡分別觀察大鼠睪丸組織結(jié)構和超微結(jié)構的變化,比色法檢測睪丸組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽超氧化物酶(GSH-Px)氧化抗氧化指標變化,免疫組化和Western blot技術檢測核因子相關因子-2(Nrf2)和DNA損傷修復相關蛋白(γH2AX)的表達情況。結(jié)果:1各組大鼠一般情況比較各組大鼠精神狀態(tài)、行為活動、進食飲水量、二便排泄、皮毛等情況未見明顯差異。2各組大鼠睪丸組織形態(tài)學的比較光學顯微鏡下觀察大鼠睪丸組織形態(tài)學變化:正常組大鼠睪丸生精小管結(jié)構清晰完整,各級生精細胞排列整齊,層次分明,管腔內(nèi)充滿成熟精子;與正常組比較,2h輻射組大鼠睪丸生精小管結(jié)構清晰完整,小管內(nèi)初級精母細胞和次級精母細胞層數(shù)未見明顯減少,結(jié)構稍松散;與正常組比較,4h輻射組生精小管結(jié)構清晰,小管內(nèi)精原細胞和初級精母細胞層清楚,次級精母細胞層結(jié)構稍模糊,管腔內(nèi)成熟精子減少;與2h輻射組比較,2h給藥組大鼠睪丸生精小管結(jié)構清晰完整,各級生精細胞排列整齊,層次分明,管腔內(nèi)充滿成熟精子,組織結(jié)構接近正常;與4h輻射組比較,4h給藥組大鼠睪丸生精小管結(jié)構清晰完整,各層生精細胞較清楚,管腔內(nèi)成熟精子較多。3各組大鼠睪丸超微結(jié)構的比較透射電子顯微鏡下觀察大鼠睪丸超微結(jié)構變化:正常組大鼠睪丸生精小管基膜完整無增厚,細胞與細胞間未見明顯間隙,細胞膜完整,胞質(zhì)飽滿,核清亮,線粒體結(jié)構未見明顯損傷;與正常組比較,2h輻射組生精小管基膜腫脹增厚,支持細胞緊密連接分開,細胞與細胞之間的間隙明顯增大,部分線粒體空泡化,同時可見線粒體髓樣化;與正常組比較,4h輻射組生精小管基膜明顯腫脹增厚,支持細胞緊密連接分開,細胞與細胞之間的間隙明顯增大,精原細胞可見胞膜不完整、胞質(zhì)碎片、胞核固縮,核周隙輕度擴張,線粒體畸形、空泡化,線粒體部分嵴融合消失;與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸生精小管基膜基本正常,支持細胞緊密連接基本正常,細胞間間隙縮小,接近正常,線粒體偶見空泡;與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸生精小管基膜腫脹明顯減輕,支持細胞緊密連接基本正常,細胞間間隙明顯縮小,未見明顯胞膜損傷,胞核較清亮,線粒體結(jié)構基本正常。此外,2h輻射組和4h輻射組均可見睪丸生精小管基膜腫脹、支持細胞緊密鏈接分開、線粒體損傷等超微結(jié)構損傷,但4h輻射組損傷程度較2h輻射組為重。4各組大鼠睪丸組織mda、gsh含量和sod、gsh-px活性比較與正常組大鼠比較,2h輻射組和4h輻射組大鼠睪丸組織mda含量均明顯增加(p0.01),gsh含量、sod活性和gsh-px活性顯著降低(p0.01);與2h輻射組比較,2h給藥組大鼠睪丸組織mda含量明顯降低(p0.01),sod活性顯著增加(p0.05),gsh含量和gsh-px活性無明顯變化(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組大鼠睪丸組織mda含量明顯降低(p0.01),sod活性和gsh含量顯著增加(p0.01),gsh-px活性無明顯變化(p0.05)。此外,與2h輻射組比較,4h輻射組大鼠睪丸mda含量明顯增加(p0.01),sod活性和gsh含量顯著減少(p0.01),gsh-px活性無明顯變化(p0.05)。5免疫組化檢測各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達與正常組大鼠比較,2h輻射組和4h輻射組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達平均光度明顯減少(p0.05),與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織nrf2蛋白表達明顯減少(p0.05);與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達明顯增加(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達明顯增加(p0.05)。6westernblot檢測各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達與正常組大鼠比較,各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達平均灰度比值明顯減少(p0.01);與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達顯著增加(p0.01);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達顯著增加(p0.01)。此外,與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織nrf2蛋白表達明顯減少(p0.01)。7免疫組化檢測各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達正常組γh2ax在精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞表達均強,與正常組比較,2h輻射組和4h輻射組γh2ax主要在精原細胞表達,而在初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞表達減弱。與正常組比較,2h輻射組、4h輻射組和4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達平均光度值明顯減少(p0.05)。分別與2h輻射組和4h輻射組比較,2h給藥組和4h給藥組γh2ax在精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞表達增強。與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達明顯增加(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達明顯增加(p0.05)。8westernblot檢測各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達與正常組大鼠比較,各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達平均灰度比值顯著減少(p0.01);與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織γh2ax蛋白表達明顯減少(p0.01)。與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達明顯增加(p0.01);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達明顯增加(p0.01)。結(jié)論:1 900MHz手機頻率電磁輻射致大鼠睪丸組織形態(tài)學變化無顯著異常,但超微結(jié)構中線粒體損傷顯著,大鼠睪丸組織氧化損傷加重,抗氧化酶活性降低,Nrf2和γH2AX蛋白在睪丸組織的表達減弱,輻射4小時較之2小時甚之,說明具有時間效應關系。2六味地黃丸可改善大鼠睪丸組織形態(tài)學及對超微結(jié)構的損傷,其機制可能與增加Nrf2在睪丸組織的表達,降低氧化損傷,增強γH2AX蛋白表達,修復DNA損傷有關,具體機制尚待進一步研究。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 李乃謙;;熟地黃活性成分藥理作用的研究進展[J];中國處方藥;2017年01期

2 Pravin Suryakantrao Deshmukh;Kanu Megha;Namita Nasare;Basu Dev Banerjee;Rafat Sultana Ahmed;Mahesh Pandurang Abegaonkar;Ashok Kumar Tripathi;Pramod Kumari Mediratta;;Effect of Low Level Subchronic Microwave Radiation on Rat Brain[J];Biomedical and Environmental Sciences;2016年12期

3 李e，

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