本文選題：六味地黃丸　切入點(diǎn)：電磁輻射　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:以900MHz手機(jī)頻率電磁輻射為實(shí)驗(yàn)條件,以大鼠睪丸組織為研究對(duì)象,以睪丸組織形態(tài)學(xué)、超微結(jié)構(gòu)、氧化抗氧化、Nrf2蛋白表達(dá)、DNA損傷修復(fù)蛋白γH2AX表達(dá)為主要觀測(cè)指標(biāo),選擇常用補(bǔ)腎中藥六味地黃丸為干預(yù)因素,觀察900MHz手機(jī)頻率電磁輻射對(duì)雄性大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)、氧化應(yīng)激和Nrf2蛋白、γH2AX蛋白表達(dá)的影響,及六味地黃丸對(duì)其可能的作用。方法:50只清潔級(jí)健康SD雄性大鼠隨機(jī)均分為五組,每組10只,分別為:正常組,2h輻射組,4h輻射組,2h給藥組,4h給藥組。正常組不輻射,其余四組每天分別暴露于900MHz電磁輻射(370μW/cm2)輻射2h和4h,連續(xù)輻射30d,2h給藥組和4h給藥組在每次接受規(guī)定時(shí)間輻射后灌胃六味地黃丸混懸液(0.72g/kg.d),其余3組灌胃蒸餾水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各組大鼠禁食不禁水12h,以10%水合氯醛腹腔麻醉處死取材。光鏡、電鏡分別觀察大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)的變化,比色法檢測(cè)睪丸組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽超氧化物酶(GSH-Px)氧化抗氧化指標(biāo)變化,免疫組化和Western blot技術(shù)檢測(cè)核因子相關(guān)因子-2(Nrf2)和DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白(γH2AX)的表達(dá)情況。結(jié)果:1各組大鼠一般情況比較各組大鼠精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、進(jìn)食飲水量、二便排泄、皮毛等情況未見明顯差異。2各組大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)的比較光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)變化:正常組大鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)清晰完整,各級(jí)生精細(xì)胞排列整齊,層次分明,管腔內(nèi)充滿成熟精子;與正常組比較,2h輻射組大鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)清晰完整,小管內(nèi)初級(jí)精母細(xì)胞和次級(jí)精母細(xì)胞層數(shù)未見明顯減少,結(jié)構(gòu)稍松散;與正常組比較,4h輻射組生精小管結(jié)構(gòu)清晰,小管內(nèi)精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞層清楚,次級(jí)精母細(xì)胞層結(jié)構(gòu)稍模糊,管腔內(nèi)成熟精子減少;與2h輻射組比較,2h給藥組大鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)清晰完整,各級(jí)生精細(xì)胞排列整齊,層次分明,管腔內(nèi)充滿成熟精子,組織結(jié)構(gòu)接近正常;與4h輻射組比較,4h給藥組大鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)清晰完整,各層生精細(xì)胞較清楚,管腔內(nèi)成熟精子較多。3各組大鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)的比較透射電子顯微鏡下觀察大鼠睪丸超微結(jié)構(gòu)變化:正常組大鼠睪丸生精小管基膜完整無增厚,細(xì)胞與細(xì)胞間未見明顯間隙,細(xì)胞膜完整,胞質(zhì)飽滿,核清亮,線粒體結(jié)構(gòu)未見明顯損傷;與正常組比較,2h輻射組生精小管基膜腫脹增厚,支持細(xì)胞緊密連接分開,細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隙明顯增大,部分線粒體空泡化,同時(shí)可見線粒體髓樣化;與正常組比較,4h輻射組生精小管基膜明顯腫脹增厚,支持細(xì)胞緊密連接分開,細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隙明顯增大,精原細(xì)胞可見胞膜不完整、胞質(zhì)碎片、胞核固縮,核周隙輕度擴(kuò)張,線粒體畸形、空泡化,線粒體部分嵴融合消失;與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸生精小管基膜基本正常,支持細(xì)胞緊密連接基本正常,細(xì)胞間間隙縮小,接近正常,線粒體偶見空泡;與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸生精小管基膜腫脹明顯減輕,支持細(xì)胞緊密連接基本正常,細(xì)胞間間隙明顯縮小,未見明顯胞膜損傷,胞核較清亮,線粒體結(jié)構(gòu)基本正常。此外,2h輻射組和4h輻射組均可見睪丸生精小管基膜腫脹、支持細(xì)胞緊密鏈接分開、線粒體損傷等超微結(jié)構(gòu)損傷,但4h輻射組損傷程度較2h輻射組為重。4各組大鼠睪丸組織mda、gsh含量和sod、gsh-px活性比較與正常組大鼠比較,2h輻射組和4h輻射組大鼠睪丸組織mda含量均明顯增加(p0.01),gsh含量、sod活性和gsh-px活性顯著降低(p0.01);與2h輻射組比較,2h給藥組大鼠睪丸組織mda含量明顯降低(p0.01),sod活性顯著增加(p0.05),gsh含量和gsh-px活性無明顯變化(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組大鼠睪丸組織mda含量明顯降低(p0.01),sod活性和gsh含量顯著增加(p0.01),gsh-px活性無明顯變化(p0.05)。此外,與2h輻射組比較,4h輻射組大鼠睪丸mda含量明顯增加(p0.01),sod活性和gsh含量顯著減少(p0.01),gsh-px活性無明顯變化(p0.05)。5免疫組化檢測(cè)各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)與正常組大鼠比較,2h輻射組和4h輻射組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)平均光度明顯減少(p0.05),與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)明顯減少(p0.05);與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)明顯增加(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)明顯增加(p0.05)。6westernblot檢測(cè)各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)與正常組大鼠比較,各組大鼠睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)平均灰度比值明顯減少(p0.01);與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)顯著增加(p0.01);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)顯著增加(p0.01)。此外,與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織nrf2蛋白表達(dá)明顯減少(p0.01)。7免疫組化檢測(cè)各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)正常組γh2ax在精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和精子細(xì)胞表達(dá)均強(qiáng),與正常組比較,2h輻射組和4h輻射組γh2ax主要在精原細(xì)胞表達(dá),而在初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和精子細(xì)胞表達(dá)減弱。與正常組比較,2h輻射組、4h輻射組和4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)平均光度值明顯減少(p0.05)。分別與2h輻射組和4h輻射組比較,2h給藥組和4h給藥組γh2ax在精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞和精子細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)。與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)明顯增加(p0.05);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)明顯增加(p0.05)。8westernblot檢測(cè)各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)與正常組大鼠比較,各組大鼠睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)平均灰度比值顯著減少(p0.01);與2h輻射組比較,4h輻射組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)明顯減少(p0.01)。與2h輻射組比較,2h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)明顯增加(p0.01);與4h輻射組比較,4h給藥組睪丸組織γh2ax蛋白表達(dá)明顯增加(p0.01)。結(jié)論:1 900MHz手機(jī)頻率電磁輻射致大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)變化無顯著異常,但超微結(jié)構(gòu)中線粒體損傷顯著,大鼠睪丸組織氧化損傷加重,抗氧化酶活性降低,Nrf2和γH2AX蛋白在睪丸組織的表達(dá)減弱,輻射4小時(shí)較之2小時(shí)甚之,說明具有時(shí)間效應(yīng)關(guān)系。2六味地黃丸可改善大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)及對(duì)超微結(jié)構(gòu)的損傷,其機(jī)制可能與增加Nrf2在睪丸組織的表達(dá),降低氧化損傷,增強(qiáng)γH2AX蛋白表達(dá),修復(fù)DNA損傷有關(guān),具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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2 Pravin Suryakantrao Deshmukh;Kanu Megha;Namita Nasare;Basu Dev Banerjee;Rafat Sultana Ahmed;Mahesh Pandurang Abegaonkar;Ashok Kumar Tripathi;Pramod Kumari Mediratta;;Effect of Low Level Subchronic Microwave Radiation on Rat Brain[J];Biomedical and Environmental Sciences;2016年12期

3 李e，

本文編號(hào)：1648277