本文選題：結(jié)腸癌　切入點(diǎn)：Colon26　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)將對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的C26結(jié)腸癌細(xì)胞通過(guò)脾臟注射方法建立BALB/c小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的模型，觀察結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移形成的時(shí)相及轉(zhuǎn)移程度，并研究不同時(shí)期結(jié)腸癌腫瘤中CD44蛋白的表達(dá)對(duì)肝轉(zhuǎn)移的影響，為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。 方法： 1小鼠結(jié)腸癌（C26）細(xì)胞的培養(yǎng)：將凍存的C26細(xì)胞復(fù)蘇至含有10%的胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)，另加濃度為100U/ml的青霉素及鏈霉素的雙抗，培養(yǎng)于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)。以0.25%胰蛋白酶消化傳代。觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，獲取足量對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期生長(zhǎng)活躍的實(shí)驗(yàn)用結(jié)腸癌細(xì)胞。 2結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型的構(gòu)建方法：將48只小鼠分為對(duì)照組（8組）和實(shí)驗(yàn)組（40只）。對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組在同等條件下飼養(yǎng)，對(duì)照組不予任何處理；將40只實(shí)驗(yàn)小鼠按照下述方法建立模型，小鼠稱(chēng)量后，采用3%戊巴比妥鈉，按照50mg/Kg劑量行腹腔注射麻醉，固定小鼠四肢，皮膚消毒后，在小鼠左上腹行約2cm長(zhǎng)切口，然后逐層進(jìn)腹，無(wú)菌紗布保護(hù)切口，于腹外側(cè)找到柳葉狀脾臟后小心將其托出切口外,用1ml注射器5號(hào)針頭從脾上極平行進(jìn)針約2mm,注意不要將脾臟穿破防止出血，然后向脾臟被膜下注入細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液0.1ml，可見(jiàn)注射部位脾臟被膜發(fā)白腫脹，拔出針頭同時(shí)用棉球壓迫止血5分鐘，仔細(xì)觀察無(wú)出血后，將脾臟回納入腹腔，逐層關(guān)腹。 3實(shí)驗(yàn)小鼠的觀察：在脾臟注射瘤細(xì)胞以后對(duì)40只實(shí)驗(yàn)小鼠再隨機(jī)分為4組，每日觀察各組小鼠的精神狀況及生長(zhǎng)情況，于術(shù)后第3、6、9、12天分別計(jì)算各組小鼠生存率后處死動(dòng)物，脾臟原發(fā)腫瘤及肝臟均送病理檢查，觀察計(jì)算各組實(shí)驗(yàn)小鼠的成瘤率及肝臟轉(zhuǎn)移率。 4不同時(shí)相動(dòng)物腫瘤組織CD44蛋白表達(dá)的檢測(cè)：通過(guò)免疫組織化學(xué)及圖像定量分析軟件檢測(cè)處死后的小鼠脾臟原發(fā)腫瘤組織CD44蛋白表達(dá)情況，推斷CD44蛋白的表達(dá)差異對(duì)肝轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果： 1復(fù)蘇的C26細(xì)胞在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央為卵圓形核，胞質(zhì)不規(guī)則突起，細(xì)胞與細(xì)胞之間彼此緊密相連，伸展有力，未發(fā)現(xiàn)真菌及細(xì)菌感染，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)狀態(tài)良好。 2實(shí)驗(yàn)小鼠脾臟種植腫瘤細(xì)胞后，分別在術(shù)后第2天及術(shù)后第11天各死亡1只，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小鼠無(wú)死亡，因此，本實(shí)驗(yàn)術(shù)后第3天組、術(shù)后第6天組、術(shù)后第9天組及術(shù)后第12天組中實(shí)驗(yàn)小鼠的存活率分別為90%、100%、100%、90%。在術(shù)后第3天組中，對(duì)第2天死亡小鼠進(jìn)行解剖，，肉眼下未觀察到脾臟及肝臟腫瘤的形成、腹腔亦未見(jiàn)明顯出血情況，考慮為實(shí)驗(yàn)小鼠個(gè)體對(duì)麻醉手術(shù)耐受程度或機(jī)體免疫反應(yīng)存在明顯差異所致；其余小鼠處死后解剖發(fā)現(xiàn)脾臟形成大小約0.3至0.5cm大小單發(fā)癌結(jié)節(jié)，鏡下觀察可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞成團(tuán)分布，異型性明顯，與脾臟結(jié)構(gòu)分界清楚；肝臟肉眼下觀察未見(jiàn)腫瘤形成，但在1只小鼠肝臟組織中鏡下觀察卻發(fā)現(xiàn)有微灶轉(zhuǎn)移表現(xiàn)，本組脾臟成瘤率90%，肝臟成瘤率10%。在術(shù)后第6天組中，處死小鼠后肉眼觀察可見(jiàn)，脾臟腫瘤明顯增大，最大腫瘤直徑大小約0.8cm,明顯突出脾臟表面，呈黃白色，部分實(shí)驗(yàn)小鼠肝臟肉眼可觀察到多發(fā)散在米粒樣、針尖樣轉(zhuǎn)移瘤，鏡下發(fā)現(xiàn)脾臟腫瘤細(xì)胞無(wú)腺管、腺泡結(jié)構(gòu)，呈低分化腺癌表現(xiàn)，鏡下肝臟可見(jiàn)大量腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，擠壓周?chē)谓M織呈萎縮表現(xiàn)，本組脾臟成率100%，肝臟轉(zhuǎn)移率60%。在術(shù)后第9天組中，對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的解剖肉眼下觀察可見(jiàn)脾臟原發(fā)腫瘤繼續(xù)增大，周?chē)霈F(xiàn)衛(wèi)星癌結(jié)節(jié)病灶，少數(shù)腫瘤表面可見(jiàn)潰爛面形成，脾臟腫瘤與腹腔其他器官、腹膜粘連，鏡下可見(jiàn)大量腫瘤細(xì)胞彌漫性生長(zhǎng)，肉眼下觀察肝臟表面形成大小不等的轉(zhuǎn)移瘤，臨近轉(zhuǎn)移瘤相互融合，鏡下大量腫瘤細(xì)胞間尚可見(jiàn)部分正常肝組織，呈島狀分布，本組脾臟轉(zhuǎn)移率100%，肝臟轉(zhuǎn)移率100%。在術(shù)后第12天組中，第11天死亡小鼠一例，尸體解剖中肉眼下可見(jiàn)脾臟腫瘤與周?chē)M織粘連緊密，腫瘤壓迫腸腔，腹腔出現(xiàn)大量腹水，考慮為動(dòng)物死亡為腫瘤的進(jìn)展及廣泛轉(zhuǎn)移所致，本組實(shí)驗(yàn)小鼠種植腫瘤較前明顯增大，與腹內(nèi)其他臟器廣泛粘連，肝臟出現(xiàn)大小不等的彌漫性肝臟轉(zhuǎn)移瘤，并且有腹腔內(nèi)廣泛播散的表現(xiàn)，鏡下可見(jiàn)脾臟內(nèi)大部分為腫瘤細(xì)胞，超過(guò)脾臟正常細(xì)胞比例，分化差，未見(jiàn)脈管瘤栓，肝臟鏡下表現(xiàn)可見(jiàn)腫瘤分布與脾臟大致相同。本組脾臟轉(zhuǎn)移率100%，肝臟轉(zhuǎn)移率100%。 3運(yùn)用免疫組化方法及圖像定量分析軟件檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組小鼠脾臟腫瘤細(xì)胞中CD44蛋白表達(dá)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：術(shù)后第3天組脾臟腫瘤細(xì)胞中CD44蛋白表達(dá)積分光密度值為（102.77±5.51）；術(shù)后第6天組脾臟腫瘤細(xì)胞中CD44蛋白表達(dá)積分光密度值為（132.84±5.11）；術(shù)后第9天組脾臟腫瘤細(xì)胞中CD44蛋白表達(dá)積分光密度值為（164.65±5.50）；術(shù)后第12天組CD44蛋白表達(dá)積分光密度值為（167.14±6.12），對(duì)各組之間CD44蛋白表達(dá)的積分光密度值進(jìn)行兩兩比較，除術(shù)后第9天組及術(shù)后第12天組比較P0.05無(wú)明顯差異外，其余各組兩兩比較P0.05,差異具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1將鼠結(jié)腸癌細(xì)胞（C26）通過(guò)脾臟注射的方法可成功的建立結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的動(dòng)物模型，該模型具有成瘤率及轉(zhuǎn)移率高，實(shí)驗(yàn)時(shí)限短，能較真實(shí)模擬結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移實(shí)際過(guò)程的特點(diǎn)，為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的研究提供了有用的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2隨著小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的不斷增殖，脾臟腫瘤細(xì)胞中CD44蛋白的表達(dá)的明顯增加，肝臟轉(zhuǎn)移程度也相應(yīng)加劇，推測(cè)CD44蛋白的表達(dá)升高，能夠促進(jìn)肝臟轉(zhuǎn)移瘤的形成，與結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移瘤發(fā)展密切相關(guān)。 3以小鼠肝轉(zhuǎn)移模型為載體進(jìn)行進(jìn)一步研究，逐步闡明結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制及篩選有效干預(yù)措施，可為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的防治提供理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1584920