本文選題：結腸癌　切入點：Colon26　出處：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：運用細胞培養(yǎng)技術將對數期生長的C26結腸癌細胞通過脾臟注射方法建立BALB/c小鼠結腸癌肝轉移的模型，觀察結直腸癌肝轉移形成的時相及轉移程度，并研究不同時期結腸癌腫瘤中CD44蛋白的表達對肝轉移的影響，為結腸癌肝轉移的機理提供理論基礎。 方法： 1小鼠結腸癌（C26）細胞的培養(yǎng)：將凍存的C26細胞復蘇至含有10%的胎牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)，另加濃度為100U/ml的青霉素及鏈霉素的雙抗，培養(yǎng)于37℃、5%CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內。以0.25%胰蛋白酶消化傳代。觀察細胞的生長狀況，獲取足量對數生長期生長活躍的實驗用結腸癌細胞。 2結腸癌肝轉移動物模型的構建方法：將48只小鼠分為對照組（8組）和實驗組（40只）。對照組及實驗組在同等條件下飼養(yǎng)，對照組不予任何處理；將40只實驗小鼠按照下述方法建立模型，小鼠稱量后，采用3%戊巴比妥鈉，按照50mg/Kg劑量行腹腔注射麻醉，固定小鼠四肢，皮膚消毒后，在小鼠左上腹行約2cm長切口，然后逐層進腹，無菌紗布保護切口，于腹外側找到柳葉狀脾臟后小心將其托出切口外,用1ml注射器5號針頭從脾上極平行進針約2mm,注意不要將脾臟穿破防止出血，然后向脾臟被膜下注入細胞濃度為1×106個/ml的單細胞懸液0.1ml，可見注射部位脾臟被膜發(fā)白腫脹，拔出針頭同時用棉球壓迫止血5分鐘，仔細觀察無出血后，將脾臟回納入腹腔，逐層關腹。 3實驗小鼠的觀察：在脾臟注射瘤細胞以后對40只實驗小鼠再隨機分為4組，每日觀察各組小鼠的精神狀況及生長情況，于術后第3、6、9、12天分別計算各組小鼠生存率后處死動物，脾臟原發(fā)腫瘤及肝臟均送病理檢查，觀察計算各組實驗小鼠的成瘤率及肝臟轉移率。 4不同時相動物腫瘤組織CD44蛋白表達的檢測：通過免疫組織化學及圖像定量分析軟件檢測處死后的小鼠脾臟原發(fā)腫瘤組織CD44蛋白表達情況，推斷CD44蛋白的表達差異對肝轉移的影響。 結果： 1復蘇的C26細胞在顯微鏡下觀察發(fā)現細胞胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央為卵圓形核，胞質不規(guī)則突起，細胞與細胞之間彼此緊密相連，伸展有力，未發(fā)現真菌及細菌感染，細胞貼壁生長狀態(tài)良好。 2實驗小鼠脾臟種植腫瘤細胞后，分別在術后第2天及術后第11天各死亡1只，對照組實驗小鼠無死亡，因此，本實驗術后第3天組、術后第6天組、術后第9天組及術后第12天組中實驗小鼠的存活率分別為90%、100%、100%、90%。在術后第3天組中，對第2天死亡小鼠進行解剖，，肉眼下未觀察到脾臟及肝臟腫瘤的形成、腹腔亦未見明顯出血情況，考慮為實驗小鼠個體對麻醉手術耐受程度或機體免疫反應存在明顯差異所致；其余小鼠處死后解剖發(fā)現脾臟形成大小約0.3至0.5cm大小單發(fā)癌結節(jié)，鏡下觀察可見腫瘤細胞成團分布，異型性明顯，與脾臟結構分界清楚；肝臟肉眼下觀察未見腫瘤形成，但在1只小鼠肝臟組織中鏡下觀察卻發(fā)現有微灶轉移表現，本組脾臟成瘤率90%，肝臟成瘤率10%。在術后第6天組中，處死小鼠后肉眼觀察可見，脾臟腫瘤明顯增大，最大腫瘤直徑大小約0.8cm,明顯突出脾臟表面，呈黃白色，部分實驗小鼠肝臟肉眼可觀察到多發(fā)散在米粒樣、針尖樣轉移瘤，鏡下發(fā)現脾臟腫瘤細胞無腺管、腺泡結構，呈低分化腺癌表現，鏡下肝臟可見大量腫瘤細胞生長，擠壓周圍肝組織呈萎縮表現，本組脾臟成率100%，肝臟轉移率60%。在術后第9天組中，對實驗小鼠的解剖肉眼下觀察可見脾臟原發(fā)腫瘤繼續(xù)增大，周圍出現衛(wèi)星癌結節(jié)病灶，少數腫瘤表面可見潰爛面形成，脾臟腫瘤與腹腔其他器官、腹膜粘連，鏡下可見大量腫瘤細胞彌漫性生長，肉眼下觀察肝臟表面形成大小不等的轉移瘤，臨近轉移瘤相互融合，鏡下大量腫瘤細胞間尚可見部分正常肝組織，呈島狀分布，本組脾臟轉移率100%，肝臟轉移率100%。在術后第12天組中，第11天死亡小鼠一例，尸體解剖中肉眼下可見脾臟腫瘤與周圍組織粘連緊密，腫瘤壓迫腸腔，腹腔出現大量腹水，考慮為動物死亡為腫瘤的進展及廣泛轉移所致，本組實驗小鼠種植腫瘤較前明顯增大，與腹內其他臟器廣泛粘連，肝臟出現大小不等的彌漫性肝臟轉移瘤，并且有腹腔內廣泛播散的表現，鏡下可見脾臟內大部分為腫瘤細胞，超過脾臟正常細胞比例，分化差，未見脈管瘤栓，肝臟鏡下表現可見腫瘤分布與脾臟大致相同。本組脾臟轉移率100%，肝臟轉移率100%。 3運用免疫組化方法及圖像定量分析軟件檢測實驗組小鼠脾臟腫瘤細胞中CD44蛋白表達并進行統(tǒng)計學分析：術后第3天組脾臟腫瘤細胞中CD44蛋白表達積分光密度值為（102.77±5.51）；術后第6天組脾臟腫瘤細胞中CD44蛋白表達積分光密度值為（132.84±5.11）；術后第9天組脾臟腫瘤細胞中CD44蛋白表達積分光密度值為（164.65±5.50）；術后第12天組CD44蛋白表達積分光密度值為（167.14±6.12），對各組之間CD44蛋白表達的積分光密度值進行兩兩比較，除術后第9天組及術后第12天組比較P0.05無明顯差異外，其余各組兩兩比較P0.05,差異具有明顯的統(tǒng)計學意義。 結論： 1將鼠結腸癌細胞（C26）通過脾臟注射的方法可成功的建立結腸癌肝轉移的動物模型，該模型具有成瘤率及轉移率高，實驗時限短，能較真實模擬結腸癌肝轉移實際過程的特點，為結腸癌肝轉移的研究提供了有用的實驗基礎。 2隨著小鼠結腸癌細胞的不斷增殖，脾臟腫瘤細胞中CD44蛋白的表達的明顯增加，肝臟轉移程度也相應加劇，推測CD44蛋白的表達升高，能夠促進肝臟轉移瘤的形成，與結腸癌肝臟轉移瘤發(fā)展密切相關。 3以小鼠肝轉移模型為載體進行進一步研究，逐步闡明結腸癌肝轉移的機制及篩選有效干預措施，可為結腸癌肝轉移的防治提供理論依據。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R735.35

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王躍;劉為青;陳明清;張楠;田晰晰;;BALB/c小鼠結腸癌肝轉移模型建立[J];西部醫(yī)學;2012年09期

2 金秉巍;徐子平;;結直腸癌組織中CD44v6及nm23的表達與淋巴、肝轉移的關系探討[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2011年05期

3 楊揚;李乃卿;;小鼠結腸癌肝轉移模型的構建[J];中國醫(yī)藥指南;2010年17期

4 趙文娣;吳繼鋒;張紅;秦蓉;沈裕欣;王道斌;;轉錄因子Ets-1與MMP-9在胃癌中的表達及臨床意義[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2010年02期

5 劉寧寧;王炎;劉宣;范忠澤;孫玨;李琦;;COX-2介導幽門螺桿菌誘導的人胃癌細胞VEGF表達[J];中國癌癥雜志;2010年01期

6 何曉燕;何雪云;鄭俊;;結直腸癌中CD44v6和PTEN的表達及相關性研究[J];現代實用醫(yī)學;2009年07期

7 陳潔;蘇長青;李林芳;顧堅忠;;溶瘤腺病毒SG600-p53對裸鼠胃癌移植瘤的抑制作用[J];臨床腫瘤學雜志;2009年03期

8 牛洪欣;何慶泗;冷永德;劉英姿;;人結腸癌SW480裸鼠肝轉移模型的建立[J];中國現代普通外科進展;2007年06期

9 韓斌;;615小鼠結腸癌肝轉移模型的建立[J];醫(yī)藥論壇雜志;2005年23期

10 許勤,吳文溪,馬利民,王學浩;小鼠結腸腺癌肝轉移模型的建立[J];實用癌癥雜志;2000年05期

相關碩士學位論文 前1條

1 齊倩;重組人血管內皮抑制素聯合奧沙利鉑對小鼠胃癌抗腫瘤作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2009年

本文編號：1584920