發(fā)布時(shí)間：2018-03-02 09:05

  本文關(guān)鍵詞： 布比卡因 脂肪乳 腎上腺素 心臟毒性 凋亡 線粒體膜電位　出處：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：布比卡因是臨床上常用的長(zhǎng)效酰胺類局部麻醉藥，當(dāng)血漿藥物濃度迅速上升超過(guò)機(jī)體耐受能力的時(shí)候，就易出現(xiàn)心血管毒性和中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性。實(shí)驗(yàn)研究及臨床個(gè)案報(bào)道已經(jīng)證實(shí)脂肪乳劑（lipid emulsion，LE）具有救治布比卡因心臟毒性的作用。但關(guān)于LE救治布比卡因所致心臟毒性時(shí)聯(lián)合腎上腺素的合適劑量尚存在較大爭(zhēng)議，本實(shí)驗(yàn)第一部分?jǐn)M通過(guò)建立新西蘭大白兔的心臟毒性模型，并比較LE聯(lián)合不同劑量腎上腺素的復(fù)蘇效果，為臨床用藥提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前已經(jīng)證實(shí)布比卡因在體內(nèi)、體外均有促細(xì)胞凋亡作用，本實(shí)驗(yàn)第二部分?jǐn)M從細(xì)胞水平，應(yīng)用H9c2心肌細(xì)胞離體培養(yǎng)，通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，觀察LE與布比卡因處理24h后對(duì)H9c2細(xì)胞的影響，驗(yàn)證LE是否具有心肌細(xì)胞保護(hù)作用，為L(zhǎng)E防治布比卡因心臟毒性提出新的假說(shuō)及其實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分脂肪乳劑救治布比卡因致兔心臟毒性的作用 實(shí)驗(yàn)1持續(xù)泵注布比卡因致新西蘭大白兔心臟毒性模型的制備 目的通過(guò)持續(xù)泵注布比卡因建立新西蘭大白兔心臟毒性模型。 方法健康成年的新西蘭大白兔14只，在耳緣靜脈留置套管針后麻醉行氣管切開(kāi)機(jī)械通氣、頸動(dòng)脈置管術(shù)。數(shù)字表法隨機(jī)分為兩組，每組7只：生理鹽水組（C組）和脂肪乳組（L組）。有創(chuàng)操作完成后，穩(wěn)定30min，并標(biāo)記為T(mén)0時(shí)間點(diǎn)，采動(dòng)脈血行血?dú)夥治龊蟪掷m(xù)泵注鹽酸布比卡因1.5mg·(kg·min)-1直到兔心率60次/min同時(shí)伴平均動(dòng)脈壓20mmHg，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)并維持10s后開(kāi)始行心肺復(fù)蘇。L組給予20%脂肪乳注射液3mL·kg-1，并以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。C組給予生理鹽水3mL·kg-1，后以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。持續(xù)監(jiān)測(cè)ECG和有創(chuàng)動(dòng)脈血壓，并記錄心肺復(fù)蘇開(kāi)始后第5、10、15、20min時(shí)（記為T(mén)1、T2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)）的相應(yīng)數(shù)值。T4時(shí)復(fù)查動(dòng)脈血?dú)夥治觥?結(jié)果兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在T1、T2、T3、T4四個(gè)時(shí)間點(diǎn)上MAP、HR數(shù)值均低于T0基礎(chǔ)值，同時(shí)L組數(shù)值高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。T4時(shí)，C組的pH值、PaO2數(shù)值低于L組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），L組的乳酸值、PaCO2數(shù)值低于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論持續(xù)泵注鹽酸布比卡因制造新西蘭大白兔心臟毒性模型建立成功。在此模型下脂肪乳劑的救治效果要優(yōu)于生理鹽水。 實(shí)驗(yàn)2脂肪乳聯(lián)合不同劑量腎上腺素在救治布比卡因致兔心臟毒性中的作用 目的比較脂肪乳聯(lián)合不同劑量腎上腺素在布比卡因所致兔心臟毒性中的救治效果。 方法健康成年的新西蘭大白兔35只，在耳緣靜脈留置套管針后麻醉行氣管切開(kāi)機(jī)械通氣、頸動(dòng)脈置管術(shù)。采用數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，每組7只：生理鹽水對(duì)照組（C組），脂肪乳組（L組），脂肪乳聯(lián)合腎上腺素5、25、50μg·kg-1組（L5、L25、L50組）。有創(chuàng)操作完成后，穩(wěn)定30min，并標(biāo)記為T(mén)0時(shí)間點(diǎn)，采動(dòng)脈血行血?dú)夥治龊蟪掷m(xù)泵注鹽酸布比卡因1.5mg·(kg·min)-1直到兔心率60次/min同時(shí)伴平均動(dòng)脈壓20mmHg，達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)并維持10s后開(kāi)始行心肺復(fù)蘇。L組給予20%脂肪乳注射液3mL·kg-1，并以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注，在L5、L25、L50組在給予上述劑量脂肪乳后再分別給予腎上腺素5、25、50μg·kg-1單次靜脈注射。C組給予生理鹽水3mL·kg-1，后以0.5mL·(kg·min)-1的速度持續(xù)泵注。持續(xù)監(jiān)測(cè)ECG和有創(chuàng)動(dòng)脈血壓。記錄在心肺復(fù)蘇開(kāi)始后第5、10、15、20min時(shí)（記為T(mén)1、T2、T3、T4時(shí)間點(diǎn)）恢復(fù)自主循環(huán)的動(dòng)物數(shù)量。 結(jié)果T1時(shí)，L5組、L25組、L50組MAP值高于C組和L組（P0.05），L25組、L50組MAP值高于L5組，L50組高于L25組（P均0.05）；T2時(shí)，C組低于其余四組，L25組高于L5組（P均0.05）；T3和T4時(shí)，L組、L5組、L25組MAP值高于C組（P均0.05）；T4時(shí)，L25組高于L50組（P0.05）。T1時(shí)，L25組和L50組HR值高于C組、L組、L5組（P均0.05）；T2時(shí)，，L25組和L50組HR值高于C組（P均0.05）；T3和T4時(shí)，L組、L5組、L25組、L50組HR值高于C組（P均0.05）；T4時(shí)，L25組高于L50組（P0.05）。QRS間期、PR間期在T4時(shí)，C組均高于其他四組（P均0.05）；T4時(shí)的C組、L組、L50組均高于T0基礎(chǔ)值（P均0.05）。4個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組恢復(fù)自主循環(huán)的動(dòng)物數(shù)量分別為：T1時(shí)，C組0只、L組0只、L5組1只、L25組7只、L50組7只；T2時(shí)C組0只、L組1只、L5組0只、L25組3只、L50組2只；T3時(shí)C組0只、L組1只、L5組1只、L25組3只、L50組1只；T4時(shí)，C組0只、L組2只、L5組3只、L25組5只、L50組1只。 結(jié)論脂肪乳劑聯(lián)合25μg·kg-1腎上腺素在救治布比卡因所致新西蘭大白兔心臟毒性的效果顯著。 第二部分脂肪乳劑及布比卡因?qū)9c2心肌細(xì)胞的作用 目的探討脂肪乳注射液對(duì)H9c2心肌細(xì)胞的影響，研究布比卡因?qū)е录?xì)胞凋亡的作用靶點(diǎn)，并觀察脂肪乳聯(lián)合布比卡因處理下對(duì)H9c2細(xì)胞的作用。 方法H9c2心肌細(xì)胞離體培養(yǎng)，隨機(jī)分為四組：給予完全培養(yǎng)基加細(xì)胞的空白對(duì)照組（Control組）；給予濃度為1.03mmol/L布比卡因處理24h的Bup組；濃度為2%脂肪乳注射液處理24h的LE組；1.03mmol/L布比卡因+2%脂肪乳注射液處理的LE+Bup組。各組細(xì)胞均在給予相應(yīng)藥物后繼續(xù)孵育24h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，F(xiàn)CM檢測(cè)凋亡率，JC-1檢測(cè)線粒體膜電位，Western blot法檢測(cè)Cleaved Caspase-3和Caspase-3蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡率、紅熒光與綠熒光比值及Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平、Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值在不同處理組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=78.460；F=227.108；F=173.471；F=164.346；F=165.463；P均0.01）。細(xì)胞存活率在Bup組低于其余三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；LE+Bup組低于Control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），高于Bup組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。細(xì)胞凋亡率在Bup組高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；LE組與Control組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；LE+Bup組高于Control組、LE組，低于Bup組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。紅熒光與綠熒光比值在Bup組為0.32±0.03，低于Control組（0.96±0.65）（P0.01），而LE+Bup組（0.46±0.04）高于Bup組（P0.01）。Western blot結(jié)果顯示，四個(gè)處理組Caspase-3蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平在Bup組高于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）；LE+Bup組比Control組及LE組高，低于Bup組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 結(jié)論H9c2細(xì)胞在經(jīng)過(guò)布比卡因處理24h后具有明顯的促凋亡作用；2%脂肪乳注射液可以通過(guò)抑制細(xì)胞線粒體膜電位下降，減少Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)水平從而發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)的作用；2%脂肪乳注射液可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)布比卡因所致H9c2細(xì)胞的凋亡從而發(fā)揮心肌保護(hù)效應(yīng)。
[Abstract]:Bupivacaine is clinically used long-acting amide local anesthetics, when the rapid rise in plasma drug concentration exceeds the tolerance ability, it is prone to cardiovascular toxicity and central nervous system toxicity. Experimental study and clinical case reports have confirmed that fat emulsion (lipid emulsion, LE) with the treatment of bupivacaine cardiotoxicity. But there is still large the dispute about the appropriate dose of LE treatment of bupivacaine induced cardiac toxicity when combined with epinephrine, the first part of this experiment intends cardiactoxicity model was established in New Zealand white rabbits, and compared with LE combined with different doses of epinephrine resuscitation, to provide animal experimental basis for clinical application. It has been confirmed that bupivacaine in vivo, in vitro and promoting cell apoptosis. The second part of this experiment plans from the cell level, the application of H9c2 in myocardial cells in vitro, through the cell Biological technology was used to observe the effect of LE and bupivacaine on 24h cells, and to verify whether LE has the protective effect of myocardial cells. It is a new hypothesis and experimental evidence for LE to prevent bupivacaine cardiotoxicity.
The first part of fat emulsion in the treatment of rabbit heart toxicity induced by bupivacaine
Experiment 1 Preparation of cardiac toxicity model of New Zealand white rabbits induced by continuous infusion of bupivacaine
Objective to establish a New Zealand white rabbit heart toxicity model by continuous infusion of bupivacaine.
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本文編號(hào)：1555882