本文關(guān)鍵詞： 大鼠 雷帕霉素 氧化應(yīng)激 炎癥反應(yīng) 雷帕霉素靶蛋白 冷缺血再灌注肺損傷　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：探討雷帕霉素對(duì)大鼠肝臟冷缺血再灌注肺損傷的影響及相關(guān)機(jī)制。 方法：健康雄性SD大鼠24只,8-10周齡,體重220～250g,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其隨機(jī)分為3組：假手術(shù)組(S組)大鼠僅接受麻醉后開腹,游離肝葉及相關(guān)血管后關(guān)腹；模型對(duì)照組(C組)大鼠采用肝臟冷缺血再灌注模型,分別采用門靜脈插管和肝下下腔靜脈缺口作為灌注道和流出道,于腸系膜上靜脈上方和右腎靜脈上方阻斷門靜脈及肝下下腔靜脈,同時(shí)阻斷肝上下腔靜脈,用4℃乳酸林格氏液經(jīng)門靜脈插管灌注肝臟,用吸引器及時(shí)吸凈肝下下腔靜脈缺口流出的血和灌注液,灌注過(guò)程中將包有紗布的冰塊置于肝臟表面維持低溫,20min后隨即恢復(fù)肝臟血液灌注,沖洗腹腔后關(guān)腹；雷帕霉素組(R組)大鼠術(shù)前2w連續(xù)給予1mg/kg/d雷帕霉素灌胃,手術(shù)操作同C組。于再灌注12h時(shí)抽取下腔靜脈血樣,采用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)測(cè)定血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)濃度。切取肺,取部分肺制成肺組織勻漿,測(cè)定肺組織內(nèi)丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。一部分肺組織分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA及哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平。另取部分肺組織用10%甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋,切成4μm薄片,行蘇木素-伊紅(HE)染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理學(xué)結(jié)果。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用單因素方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：與S組相比,C、R組血清中TNF-α、IL-6的濃度均升高(P0.05),肺組織勻漿MDA、NO的含量升高及iNOS mRNA的表達(dá)上調(diào),mTOR蛋白量表達(dá)增多,SOD活性降低(P0.05)；與C組相比,R組血清中TNF-α、L-6的濃度均降低(P0.05),肺組織勻漿MDA、NO的含量降低及iNOS mRNA的表達(dá)下調(diào),mTOR蛋白量表達(dá)減少,SOD活性升高(P0.05)。光鏡下S組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變,C組可見(jiàn)大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡大小不一,肺泡間隔增寬,大量紅細(xì)胞滲出,毛細(xì)血管充血；R組損傷較輕,僅見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),部分肺泡間隔增寬。 結(jié)論：1.大鼠肝臟冷缺血再灌注損傷能激活mTOR信號(hào)通路,恢復(fù)血流灌注后損傷明顯,氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)及mTOR信號(hào)通路的激活在肝臟冷缺血再灌注肺損傷的發(fā)生過(guò)程中起著重要作用。 2.預(yù)先給予雷帕霉素能抑制mnTOR信號(hào)通路的異常激活,影響其相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),降低iNOS mRNA的穩(wěn)定性,進(jìn)而減少細(xì)胞內(nèi)NO的生成,減輕缺血再灌注損傷。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of rapamycin on cold ischemia reperfusion lung injury in rats. Methods: 24 healthy male Sprague-Dawley rats (8-10 weeks old, weight 220 ~ 250g) were randomly divided into 3 groups: sham operation group (group S), open abdomen after anesthesia, free liver lobe and related blood vessels. The model control group (group C) was treated with cold ischemia-reperfusion model of liver. Portal vein intubation and subhepatic subhepatic vena cava notch were used as perfusion tract and outflow tract, respectively. The portal vein and the inferior hepatic vena cava were blocked over the superior mesenteric vein and the right renal vein, and the superior and inferior hepatic vena cava were also blocked. The liver was perfused with 4 鈩，

本文編號(hào)：1548341