本文關(guān)鍵詞： 擠壓綜合征 肌紅蛋白 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡　出處：《四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2015年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立擠壓綜合征急性腎損傷(AKI)小鼠模型,探究肌紅蛋白誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及細(xì)胞凋亡在擠壓綜合征中的致病機(jī)制。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將C56BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組8h及模型組24h,每組6只,模型組于小鼠大腿外側(cè)肌注50%甘油生理鹽水溶液(8μL/g)建立擠壓綜合征模型,對(duì)照組注入等量生理鹽水。分別于注射后8、24h麻醉處死動(dòng)物,檢測(cè)血清肌酐(sCr),獲取完整腎臟標(biāo)本進(jìn)行電鏡及TUNEL染色觀察凋亡,采用免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等檢測(cè)凋亡及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn):將人近端腎小管上皮細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、干預(yù)組6h及干預(yù)組12h,對(duì)照組加入標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)液,干預(yù)組加入等量含馬肌紅蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)液,分別于6、12h后收取細(xì)胞進(jìn)行流式分析檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果注射甘油8h后sCr明顯升高,擠壓綜合征模型建立成功。電鏡示與對(duì)照組相比,模型組腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器腫脹較明顯。TUNEL染色提示模型組腎組織凋亡細(xì)胞百分比高于對(duì)照(P0.05)。免疫組化染色和實(shí)時(shí)熒光定量PCR示模型組腎組織凋亡標(biāo)志蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)、caspase12表達(dá)高于對(duì)照組(P0.05)。細(xì)胞流式分析提示馬肌紅蛋白干預(yù)組細(xì)胞凋亡比例較對(duì)照組升高(P0.05)。結(jié)論內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及凋亡參與了擠壓綜合征導(dǎo)致AKI的發(fā)病機(jī)制,肌紅蛋白可能是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要因素。
[Abstract]:Objective to establish a mouse model of acute renal injury induced by squeeze syndrome. To explore the mechanism of endoplasmic reticulum stress and apoptosis of renal tubular epithelial cells induced by myoglobin in squeeze syndrome. Methods: C56BL / 6 mice were randomly divided into control group (8 h) and model group (24 h) with 6 mice in each group. The model group was injected with 50% 渭 L / g glycerol saline solution on the lateral thigh of mice to establish squeeze syndrome model, and the control group was injected with the same amount of saline. The animals were anesthetized and killed at 824 h after injection. The serum creatinine was detected, the intact kidney samples were obtained, the apoptosis was observed by electron microscope and TUNEL staining, and the apoptosis was observed by immunohistochemistry. In vitro, the human proximal tubular epithelial cells were randomly divided into control group, intervention group for 6 hours and intervention group for 12 hours, the control group was supplemented with standard cell culture medium. In the intervention group, the cell culture medium containing equine myoglobin was added, and the cell apoptosis was detected by flow cytometry after 61h. Results the sCr increased significantly after 8 h of glycerol injection. The model of squeeze syndrome was established successfully. Compared with the control group, the model group showed the endoplasmic reticulum of renal tubular epithelial cells. Tunel staining showed that the percentage of apoptotic cells in renal tissue in model group was higher than that in control group P0.05.The immunohistochemical staining and real-time fluorescence quantitative PCR showed the apoptotic marker protein cysteine aspartate in renal tissue of model group. The expression of protease Caspase-3 and endoplasmic reticulum stress marker protein CCAAT enhancer protein homologue protein (CHOPN) caspase12 was higher than that of control group (P 0.05). Cell flow analysis showed that the percentage of apoptosis in equine myoglobin intervention group was higher than that in control group. Conclusion the endoplasmic reticulum should be increased. Shock and apoptosis are involved in the pathogenesis of AKI induced by squeeze syndrome. Myoglobin may be an important factor in inducing apoptosis.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院腎臟內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.81270818)資助
【分類號(hào)】：R685

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本文編號(hào)：1541555