本文關(guān)鍵詞： 癲癇 匹羅卡品 阿米洛利 皮層腦電圖 酸感受離子通道　出處：《武漢大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分改良匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型和腦電圖的特點目的：建立有效、穩(wěn)定的顳葉癲癇(TLE)大鼠模型,同時監(jiān)測正常皮層腦電圖和癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)皮層腦電圖,摸索并驗證建模規(guī)律。方法：(1)改良癲癇模型：選用雄性成年SD大鼠22只,將大鼠隨機(jī)分為正常對照組(n=6)和實驗組(n=16)。提前20 h腹腔注射氯化鋰(127mg/kg),給予匹羅卡品30 min前腹腔注射阿托品,以減少外周膽堿能反應(yīng)。腹腔注射首劑匹羅卡品(100mg/kg)誘導(dǎo)癇性發(fā)作,此后每隔30 min注射匹羅卡品(25 mg/kg),直至出現(xiàn)SE。按照Racine分級,將大鼠行為分為Ⅰ～Ⅴ級,若反復(fù)三次給藥后大鼠癇性發(fā)作未到達(dá)Ⅳ級,則視為誘導(dǎo)失敗。被成功誘導(dǎo)出SE的大鼠方可被隨機(jī)分入實驗A組和實驗B組,觀察其行為學(xué)變化,記錄SE潛伏期(即首次Ⅳ級及以上癇性發(fā)作與注射的時間間隔)、建模成功率和死亡率。正常對照組大鼠除用等量磷酸緩沖鹽溶液(PBS)代替匹羅卡品外,其余處理措施均相同.(2)皮層腦電圖監(jiān)測：將實驗組分為實驗A組(n=6)和實驗B組(n=6),分別在大鼠SE15min、30min予以烏拉坦麻醉大鼠,監(jiān)測大鼠皮層腦電圖。結(jié)果：(1)實驗組中,大鼠成功點燃12只,死亡1只,誘導(dǎo)失敗3只,造�？偝晒β蕿�75%,其中匹羅卡品首劑成功率為75%,二劑成功率和三劑成功率分別為16.7%和8.3%,誘導(dǎo)失敗率為18.8%。SE潛伏期(min)為29.7±15.1(13-65),匹羅卡品用量平均為112.5 ± 16.3 mg/kg。正常對照組大鼠均表現(xiàn)正常,為0級發(fā)作。(2)正常對照組中皮層腦電圖正常,類似人類正常腦電圖。實驗A組腦電圖表現(xiàn)為背景活動波幅較正常對照組略增高,可見低于6 Hz的慢活動逐漸增多,持續(xù)監(jiān)測至SE發(fā)作90 min未見明顯尖波、棘波和棘慢波；實驗B組腦電圖表現(xiàn)為爆發(fā)長程出現(xiàn)的尖波、棘波和不規(guī)則的尖慢復(fù)合波,癇性放電持續(xù)、穩(wěn)定達(dá)2h以上。結(jié)論：(1)改良后的氯化鋰-匹羅卡品模型致癇成功率高且動物死亡率低,發(fā)作潛伏期短,易操作,改良的護(hù)理方法可顯著降低大鼠死亡率,有利于動物實驗的開展及推廣。(2)氯化鋰-匹羅卡品大鼠模型腦電圖同人類SE和顳葉癲癇腦電圖改變相似,該模型應(yīng)用于癲癇機(jī)制及藥理學(xué)研究對臨床有指導(dǎo)意義。(3)進(jìn)一步證實神經(jīng)元過度放電與傳播存在時間差異性,SE發(fā)作30 min后再監(jiān)測大鼠皮層腦電圖更有意義。第二部分 阿米洛利/酸性液體對氯化鋰—匹羅卡品致癲癇腦電圖的影響目的：觀察阿米洛利/酸性液體對氯化鋰-匹羅卡品癲癇大鼠的皮層腦電圖癇性放電的影響。方法：(1)誘導(dǎo)改良型匹羅卡品大鼠癲癇模型。選用雄性成年SD大鼠,提前20 h腹腔注射氯化鋰(127mg/kg),在匹羅卡品注射前30 min,予以阿托品腹腔注射。予以首劑100 mg/kg匹羅卡品腹腔注射誘導(dǎo)癇性發(fā)作,此后每間隔30 min,繼續(xù)以25mg/kg匹羅卡品注射,直至出現(xiàn)SE。若反復(fù)三次給藥后大鼠癇性發(fā)作未到達(dá)Ⅳ級,則視為誘導(dǎo)失敗,共誘導(dǎo)成功24只SE大鼠。(2)將24只SE大鼠隨機(jī)分為四組,酸感受離子通道(ASICs)抑制組(阿米洛利)、PBS對照組(PBS)、陽性對照組(左乙拉西坦組)和酸性液體組(酸性PBS, pH= 1.57),每組6只。大鼠SE發(fā)作30 min后,麻醉大鼠,放置皮層電極,監(jiān)測皮層腦電圖30 min后,給予ASICs抑制組腹腔注射阿米洛利溶液,繼續(xù)記錄90 min腦電圖,其余三組操作同ASICs抑制組,分別腹腔注射相對應(yīng)藥物。(3)比較單位時間內(nèi)癇性放電頻率、波幅、放電間期的變化。所有數(shù)據(jù)以30 min為一段,共分4段統(tǒng)計,即給藥前(-30～0 min)、給藥后0～30 min、 30～ 60min和60～90 min。因癲癇大鼠彼此間相關(guān)數(shù)據(jù)變異大,故設(shè)置每只大鼠給藥前30 min的數(shù)值為基線值,即每只大鼠給藥前的數(shù)值為1,給藥后數(shù)值=給藥后數(shù)據(jù)／給藥前數(shù)據(jù)。結(jié)果：(1)皮層腦電圖可監(jiān)測到尖波、棘波,癇性放電持續(xù)、穩(wěn)定。(2)ASICs抑制組與PBS對照組比較,在60-90 min時段的放電頻率(0.69±0.08vs0.89±0.07)、波幅(0.70±0.16 vs0.90±0.08)均明顯下降(P0.05),放電間期(1.46±0.18 vs 1.15±0.10)延長(P0.05)。(3)酸性液體組與PBS對照組比較,在0-30 min時段,癇性放電頻率增高(1.05±0.07 vs0.9±0.07)(P0.05),放電間期無明顯延長(1.00±0.05 vs 1.12±0.09)(P0.05)；在30-90 min時段,放電頻率、波幅逐漸下降,放電間期延長,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(4)與陽性對照組比較,ASICs抑制組在0～90 min時段癇性放電頻率、放電間期和放電波幅無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：(1)阿米洛利能抑制鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)的癇性發(fā)作；(2)酸性液體可短暫性促進(jìn)癇性發(fā)作,其作用機(jī)制可能與激活A(yù)SICs通道有關(guān)。第三部分ASICs和NHE的表達(dá)及阿米洛利的抗癲癇作用機(jī)制研究目的：探討酸感受離子通道(ASICs).鈉氫交換泵(NHE)在癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)時的基因表達(dá)及阿米洛利在癇性發(fā)作中的作用。方法：(1)誘導(dǎo)改良型氯化鋰-匹羅卡品大鼠癲癇模型。選用雄性成年SD大鼠,提前20 h腹腔注射氯化鋰(127 mg/kg),提前30 min予以阿托品腹腔注射。予以首劑100 mg/kg匹羅卡品腹腔注射誘導(dǎo)癇性發(fā)作,此后每間隔30 min,繼續(xù)以25 mg/kg匹羅卡品注射,直至出現(xiàn)SE。若反復(fù)三次給藥后大鼠癇性發(fā)作未到達(dá)Ⅳ級,則視為誘導(dǎo)失敗,共誘導(dǎo)成功18只SE大鼠。(2)選擇正常大鼠為正常對照組(n=6),將誘導(dǎo)成功的SE大鼠隨機(jī)分為3組：SE 1h組(PBS,i.p.).SE 2 h組(PBS,i.p.)和阿米洛利組(阿米洛利,i.p.),分別在入組時即注射相應(yīng)藥物。(3)分別于在SE發(fā)作1h時處死SE 1h組大鼠,SE發(fā)作2h時處死正常對照組、SE2h組和阿米洛利組大鼠,分離大腦皮層。提取總RNA,進(jìn)行RT.PCR檢測4組大鼠大腦皮層ASICla.ASIC3和NHEmRNA的表達(dá)。結(jié)果：(1)正常對照組大鼠大腦皮層幾乎不表達(dá)ASIC3(0.01±0.00)和NHE(0.01±0.00),僅少量表達(dá)ASICla(0.19±0.01).(2)癲癇模型SE 1h組與正常對照組比較,大鼠大腦皮層ASICla(0.89±0.01vs 0.19±0.01).ASIC3(0.29±0.04vs0.01±0.00)及NHE(2.16±0.01vs 0.01 ±0.00)的mRNA表達(dá)均顯著增加(P0.01)。(3)癲癇模型SE 2h組與正常對照組比較,大鼠大腦皮層ASICla(1.24±0.01 vs 0.19±0.01).ASIC3(0.81±0.04 vs 0.01±0.00)及NHE(2.73±0.09 vs 0.01 ±0.00)的mRNA表達(dá)顯著增加(P0.01)；與SE 1h組比較,ASICla(1.24 ±0.01 vs 0.89±0.01).ASIC3(0.81±0.041vs0.29±0.04)及NHE(2.73± 0.09 vs 2.16±0.01)的mRNA表達(dá)顯著增加(P0.01)。(4)與SE 1h和SE2h比較,阿米洛利組大鼠皮層ASICLa(0.44±0.01).ASIC3(0.09±0.01)的mRNA表達(dá)顯著下降(P0.01),NHE的mRNA表達(dá)有所下降,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論：(1)正常大鼠皮層幾乎不表達(dá)ASIC3和NHE,僅少量表達(dá)ASICla;(2)癇性發(fā)作過程中ASICla、ASIC3及NHE的mRNA表達(dá)隨著時間的推移逐漸增多,提示其參與癲癇的發(fā)生；(3)阿米洛利的抗癲癇作用與調(diào)控ASICla和ASIC3的表達(dá)有關(guān),而與NHE無關(guān)。
[Abstract]:To the characteristics of rat model of status epilepticus and EEG part 1model of pilocarpine induced temporal lobe epilepsy: the establishment of an effective, stable (TLE) rat model, monitoring of cortical EEG and normal status epilepticus (SE) and cortical EEG, explore and verify the modeling rules. Methods: (1) improved model of epilepsy: the adult male SD 22 rats, the rats were randomly divided into normal control group (n=6) and experimental group (n=16). Before 20 h intraperitoneal injection of lithium chloride (127mg/kg), 30 min before pilocarpine given intraperitoneal injection of atropine, to reduce the peripheral cholinergic response to intraperitoneal injection of the first dose of pilocarpine. (100mg/kg) induced seizures, since every 30 min injection of pilocarpine (25 mg/kg), until the emergence of SE. according to Racine classification, the behavior of rats were divided into grade I-V, if repeated three times after administration of epileptic rats were not reached IV, is deemed to induce the loss 璐，

本文編號：1511111