本文關(guān)鍵詞： 糖尿病腎病 瘀血阻絡(luò) 化瘀通絡(luò) 足細(xì)胞裂孔膜蛋白 足細(xì)胞骨架蛋白　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)又稱糖尿病(diabetes mellitus,DM)腎小球硬化癥,是DM最常見、最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一,隨著人們生活水平的提高,飲食結(jié)構(gòu)的變化,我國DN的發(fā)病率還在逐年上升,已成為導(dǎo)致終末期腎病的第二位原因,僅次于各種腎小球腎炎。盡管國內(nèi)外腎臟病學(xué)者不斷探索DN的發(fā)病機(jī)制及治療方法,但目前為止,發(fā)病機(jī)制尚未明了,也未找到特效的治療方法。傳統(tǒng)中醫(yī)藥以其多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)效應(yīng)的重要優(yōu)勢(shì),在有效防治DN中凸現(xiàn)出很大潛力。近年來中醫(yī)對(duì)DN病機(jī)有了更深層次的認(rèn)識(shí),認(rèn)為瘀血阻絡(luò)為其關(guān)鍵病機(jī),貫穿于DN始終,并有臨床報(bào)道,100%的DN患者存在瘀血阻絡(luò)的證候特征,因此在眾多治療DN中藥復(fù)方中化瘀通絡(luò)藥的使用頻率最高,一度成為復(fù)方的基礎(chǔ)用藥,并且化瘀藥與通絡(luò)藥多聯(lián)合應(yīng)用,其療效也得到諸多醫(yī)家的廣泛認(rèn)可。但化瘀通絡(luò)中藥具有怎樣的作用機(jī)制,通過何種途徑發(fā)揮作用,化瘀藥、通絡(luò)藥的靶向特點(diǎn)以及二者之間是否具有協(xié)同關(guān)系等均有待進(jìn)一步明確。本研究根據(jù)前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床觀察,選用化瘀通絡(luò)中藥全方川芎、丹參、地龍、水蛭、全蝎并按功效組分進(jìn)行拆方(化瘀藥:川芎、丹參;通絡(luò)藥:地龍、水蛭、全蝎兩類),采用高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射誘導(dǎo)DN大鼠為觀察對(duì)象,以瘀血阻絡(luò)和足細(xì)胞相關(guān)蛋白為主要切入點(diǎn),通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及小鼠條件永生系足細(xì)胞的離體培養(yǎng),從多水平、多靶點(diǎn)等不同層面探討和深化化瘀通絡(luò)中藥延緩DN作用機(jī)制和特點(diǎn),為優(yōu)化中藥配伍,提高臨床療效提供理論依據(jù)。方法:1化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)DN大鼠瘀血阻絡(luò)生物學(xué)指標(biāo)的干預(yù)作用選用清潔級(jí)健康雄性SD大鼠65只,4~5周齡,體重80g~100g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)選取10只大鼠作為正常組(C組),其余55只大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng),4周后按35mg/kg腹腔注射1%STZ復(fù)制DM大鼠模型,72h后通過尾靜脈取血檢測大鼠RBG,連續(xù)三次血糖≥16.7mmol/L為DM造模成功。成模大鼠按體重隨機(jī)分為模型組(M組)12只、化瘀通絡(luò)中藥全方組(Q組)12只、化瘀中藥組(H組)12只、通絡(luò)中藥組(T組)12只。C組大鼠均腹腔注射相應(yīng)體積不含STZ的0.1 mol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液。DM大鼠造模成功1周后,根據(jù)動(dòng)物體表面積比率換算等效計(jì)量法計(jì)算各組大鼠用藥量,Q組:丹參1.35g/(kg?d),川芎1.08g/(kg?d),地龍0.9g/(kg?d),水蛭0.54g/(kg?d),全蝎0.54g/(kg?d);H組:丹參1.35 g/(kg?d),川芎1.08g/(kg?d);T組:地龍0.9g/(kg?d),水蛭0.54g/(kg?d),全蝎0.54g/(kg?d)。各組藥物定容至1ml/100mg體重進(jìn)行灌胃,同時(shí)C組、M組大鼠給以相應(yīng)量的飲用水。每日喂藥1次,連續(xù)用藥16周后,腹腔注射10%水合氯醛(0.35ml/100g)麻醉,腹主動(dòng)脈取血,檢測各組大鼠隨機(jī)血糖、24h尿蛋白定量、血脂、凝血四項(xiàng)、血小板參數(shù)、血小板代謝產(chǎn)物等。剖開腹腔,快速切取部分腎皮質(zhì)保存于4%中性甲醛固定液中,待行后續(xù)免疫組織化學(xué)檢測;切取部分腎皮質(zhì),存放入凍存管內(nèi),迅速投放到液氮中,短暫冷卻后轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱保存,待行后續(xù)分子生物學(xué)指標(biāo)檢測。2化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用清潔級(jí)健康雄性SD大鼠50只,隨機(jī)分為正常組10只和造模大鼠40只,造模方法同第一部分,將36只成模大鼠隨機(jī)分為模型組(M組)12只,化瘀通絡(luò)中藥全方組(Q組)12只,厄貝沙坦組(I組)12只。DM大鼠造模成功1周后,根據(jù)動(dòng)物與人體表面積進(jìn)行換算計(jì)算各組藥物劑量,Q組給藥量同第一部分,I組給藥量:13.5mg/(kg?d),同時(shí)C組、M組大鼠給以相應(yīng)量的飲用水,灌胃方法和時(shí)間同第一部分。分別于造模前(0周)、造模第4、8、12、16周末,各組大鼠分別放入代謝籠,自由飲食,收集24h尿液并計(jì)算尿蛋白定量,同時(shí)記錄大鼠體重、進(jìn)食量、飲水量,于第16周末腹主動(dòng)脈取血,檢測腎功能;稱量腎重,計(jì)算腎臟指數(shù),留取部分腎皮質(zhì),通過光鏡、透射電鏡檢測各組大鼠腎臟病理表現(xiàn)。3化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞裂孔膜相關(guān)蛋白podocin、CD2AP、ZO-1的干預(yù)作用第一部分實(shí)驗(yàn)取材時(shí),切取部分腎皮質(zhì)保存于4%中性甲醛固定液中,采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)對(duì)足細(xì)胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP定位檢測;切取部分腎皮質(zhì),存放入凍存管內(nèi),迅速投放到液氮中,短暫冷卻后轉(zhuǎn)入-80℃超低溫冰箱保存,通過熒光實(shí)時(shí)定量反應(yīng)(Real-Time PCR)檢測各組大鼠腎組織足細(xì)胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP、ZO-1的基因表達(dá)情況。4化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞骨架蛋白a-actinin-4、Synaptopodin的影響第一部分實(shí)驗(yàn)取材時(shí),快速留取腎組織標(biāo)本,-80℃保存,分別采用蛋白印跡法(Western-blot)、Real-Time PCR檢測各組大鼠腎組織足細(xì)胞骨架蛋白a-actinin-4、Synaptopodin的蛋白及基因表達(dá)情況。5化瘀通絡(luò)中藥對(duì)高糖刺激下足細(xì)胞相關(guān)蛋白的干預(yù)作用采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),將許可條件下培養(yǎng)的條件性永生化小鼠足細(xì)胞分為正常糖組(CG組)、高糖組(HG組)和高糖加藥組(HG+Z)組,干預(yù)24h、48h、72h后,分別采用免疫細(xì)胞化學(xué)法(immunocytochemistry,ICC)、Western-blot、Real-Time PCR檢測足細(xì)胞相關(guān)蛋白podocin、CD2AP的表達(dá)。結(jié)果1化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)DN大鼠瘀血阻絡(luò)生物學(xué)指標(biāo)的干預(yù)作用1.1各組大鼠一般狀況比較C組:大鼠精神狀態(tài)良好,反應(yīng)敏捷,體格健壯,飲食正常,體重穩(wěn)定增加,二便正常,無大鼠死亡。M組:毛色晦暗干枯,弓背凸出聳毛,肌肉瘦削,反應(yīng)呆板,少動(dòng)抱團(tuán),尾部靜脈、舌質(zhì)、爪心顏色紫暗,隨著時(shí)間的延長,癥狀愈加明顯。各中藥組:大鼠上述癥狀均有不同程度減輕。1.2各組大鼠RBG比較16w末,與C組相比,M組及各中藥組RBG均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與M組相比,各中藥組RBG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);中藥各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.3各組大鼠24h UTP比較16w末,與C組相比,M組及各中藥組24h UTP均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與M組相比,各中藥組24h UTP均有明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);中藥各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.4各組大鼠血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的比較16w末,與C組相比,M組及各中藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與M組比較,各中藥組大鼠血清TC、TG、LDL-C明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);各中藥組大鼠血清HDL-C與M組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各中藥組組間血清TG比較,由低到高依次為Q組、H組、T組,且Q組與T組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Q組略低于H組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),H組稍低于T組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各中藥組間大鼠血清LDL-C比較,由低到高依次為Q組、H組、T組,且Q組與T組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Q組與H組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),H組低于T組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各中藥組間大鼠血清TC、HDL-C比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.5各組大鼠血凝指標(biāo)(PT、INR、APTT、TT、FIB)的比較16w末,與C組比較,M組及各中藥組大鼠血漿PT明顯縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與M組比較,各中藥組大鼠血漿PT明顯延長,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01);中藥各組間比較,Q組血漿PT較其他兩組延長,與T組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與H組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,M組及各中藥組大鼠血漿INR明顯減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與M組比較,僅Q組INR明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各中藥組間大鼠血漿INR差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,M組及各中藥組大鼠血漿APTT明顯縮短(P0.01);與M組比較,Q組、H組大鼠血漿APTT明顯延長(P0.01),T組沒有明顯變化(P0.05);中藥各組間比較,Q組血漿APTT較其他兩組延長,與T組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與H組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與C組比較,M組及各中藥組大鼠血漿FIB明顯升高(P0.05,P0.01);與M組比較,各中藥組均有不同程度降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);中藥各組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組間大鼠血漿TT比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。1.6各組大鼠血小板參數(shù)(PLT、MPV、PCT%、PDW)的比較16w末,與C組比較,M組及各中藥組大鼠血清PLT、PDW水平均有明顯變化,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。與M組比較,各中藥組大鼠血清PLT、MPV、PCT%均明顯改善,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01),與M組比較,僅Q組的PDW明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各中藥組組間比較各指標(biāo)均無明顯差異(P0.05)。1.7各組大鼠TXB2、6-keto-PGF1a、TXB2/6-keto-PGF1a的水平比較16w末,與C組相比,M組及各中藥組大鼠血清TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a水平明顯升高,6-keto-PGF1a明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。與M組比較,各中藥組大鼠血清TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a水平明顯降低,6-keto-PGF1a明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。各中藥組組間比較,Q組TXB2、TXB2/6-keto-PGF1a明顯低于T組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間兩兩比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠的腎保護(hù)作用2.1各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)體重的比較造模前(0周),各組大鼠體重比較,差異無顯著性(P0.05);此后C組大鼠體重隨時(shí)間穩(wěn)步增加。與C組相比,第4、8、12、16周末,M、Q、I組大鼠體重明顯減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。M、Q、I三組兩兩比較,各時(shí)間點(diǎn)均無顯著性差異(P0.05)。2.2各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)食量的比較造模前(0周),各組大鼠進(jìn)食量比較,差異無顯著性(P0.05);此后,C組大鼠攝食量趨于相對(duì)恒定。與C組相比,第4、8、12、16周末,M、Q、I組大鼠攝食量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。M、Q、I三組兩兩比較,各時(shí)間點(diǎn)差異均無顯著性(P0.05)。2.3各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)飲水量的比較造模前(0周),各組大鼠飲水量比較,差異無顯著性(P0.05);此后,C組大鼠飲水量趨于恒定。與C組相比,第4、8、12、16周末,M、Q、I組大鼠飲水量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。M、Q、I三組兩兩比較,各時(shí)間點(diǎn)差異均無顯著性(P0.05)。2.4各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)尿量的比較造模前(0周),各組大鼠尿量比較,差異無顯著性(P0.05);此后,C組大鼠尿量趨于恒定。與C組相比,第4、8、12、16周末,M、Q、I組大鼠尿量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。M、Q、I三組兩兩比較,各時(shí)間點(diǎn)差異均無顯著性(P0.05)。2.5各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)24h UTP的檢測造模前(0周),各組24h UTP無明顯差異(P0.05);與C組比較,第4、8、12、16周末,M、Q、I組大鼠24h UTP均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與M相比,第4、8、12、16周末,Q、I組24h UTP均有明顯減少(P0.05,P0.01)。Q、I組間比較,僅16周末,Q組改善尤為明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余時(shí)間點(diǎn)比較差異無顯著性(P0.05)。2.6各組大鼠KI、Cys-c、Scr、BUN、UA的比較16周末,與C組相比,M、Q、I組大鼠KI、Cys-c、Scr、BUN、UA水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.01)。與M組比較,Q、I組Cys-c、BUN均有顯著改善(P0.05,P0.01),KI、Scr、UA無明顯變化(P0.05)。Q、I組間比較,各指標(biāo)均無顯著性差異(P0.05)。2.7各組大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)的比較光鏡:C組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清晰,毛細(xì)血管腔未見擴(kuò)張,腎小球無肥大或萎縮,基底膜未見增厚,系膜無增生。M組大鼠腎小球體積增大,基底膜彌漫增厚,系膜基質(zhì)增多,系膜區(qū)增寬,腎小囊腔變窄,呈裂隙狀,腎小管上皮細(xì)胞肥大,腎間質(zhì)水腫,部分纖維化。與M組相比,兩治療組病理改變均有一定程度減輕。電鏡:C組大鼠可見腎小球基底膜結(jié)構(gòu)清晰,均勻無增厚,足突排列較整齊,系膜細(xì)胞未見增殖,系膜基質(zhì)未見增生。M組大鼠基底膜結(jié)構(gòu)欠清晰,均勻彌漫增厚,足突增寬或廣泛融合。與M組相比,兩治療組均有不同程度改善,腎小球基底膜節(jié)段性增厚,足突部分融合。3化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP、ZO-1的干預(yù)作用3.1各組大鼠腎皮質(zhì)podocin、CD2AP蛋白表達(dá)的定位分析(見Fig.1、Fig.2)C組大鼠podocin局限性分布于腎小球并呈棕黃色染色,主要沿基底膜呈線狀分布,腎小管和間質(zhì)未見明顯表達(dá);M組大鼠podocin在腎小球的分布欠均勻,且表達(dá)明顯減弱;與M組相比,各中藥組podocin表達(dá)明顯增強(qiáng),沿基底膜線狀分布有所恢復(fù)。C組大鼠CD2AP主要分布在腎小球并呈棕黃色染色,在腎小管和集合管也有少量表達(dá);M組大鼠CD2AP在腎組織表達(dá)明顯減弱;與M組相比,各中藥組CD2AP表達(dá)明顯增強(qiáng)。3.2各組大鼠腎組織podocin m RNA的表達(dá)結(jié)果顯示:與C組相比,其余各組大鼠腎組織中podocin m RNA表達(dá)明顯減少(P0.01);與M組相比,各中藥組腎組織podocin m RNA的表達(dá)明顯增多(P0.01);各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異(P0.05),T組與H組比較無明顯差異(P0.05)。3.3各組大鼠腎組織CD2AP mRNA的表達(dá)結(jié)果顯示:與C組相比,其余各組大鼠腎組織中CD2AP m RNA表達(dá)明顯減少(P0.01);與M組相比,各中藥組腎組織CD2AP m RNA的表達(dá)明顯增多(P0.01);各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q、T兩組與H組比較均有明顯差異(P0.01),T組與Q組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.4各組大鼠腎組織ZO-1 m RNA的表達(dá)結(jié)果顯示:與C組相比,其余各組大鼠腎組織中ZO-1 m RNA表達(dá)明顯減少(P0.01);與M組相比,各中藥組腎組織ZO-1 m RNA的表達(dá)明顯增多(P0.01);各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異(P0.05,P0.01),T組與H組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4化瘀通絡(luò)中藥不同配伍對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞骨架蛋白a-actinin-4、Synaptopodin的影響4.1各組大鼠腎皮質(zhì)a-actinin-4、Synaptopodin蛋白表達(dá)的定量分析結(jié)果顯示:與C組相比,其他各組大鼠腎組織α-actinin-4蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.01)。與M組相比,各中藥組大鼠腎組織α-actinin-4蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P0.01)。中藥各組間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q、T兩組與H組比較均有明顯差異(P0.05,P0.01),T組與Q組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果顯示:與C組相比,其他各組大鼠腎組織Synaptopodin蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.01)。與M組相比,各中藥組大鼠腎組織Synaptopodin蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P0.01)。各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異(P0.05,P0.01),T組與H組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.2各組大鼠腎皮質(zhì)a-actinin-4、Synaptopodin m RNA表達(dá)的相對(duì)定量分析結(jié)果顯示:與C組相比,其余各組大鼠腎組織中a-actinin-4 m RNA表達(dá)明顯減少(P0.01);與M組相比,各中藥組腎組織a-actinin-4 m RNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01);各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異(P0.05,P0.01),T組與H組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果顯示:與C組相比,其余各組大鼠腎組織中Synaptopodin m RNA表達(dá)明顯減少(P0.01);與M組相比,各中藥組腎組織Synaptopodin m RNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P0.01);各中藥組之間比較,Q組改善最為明顯,依次為T組、H組,且Q組與T、H兩組比較均有明顯差異(P0.05),T組與H組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5化瘀通絡(luò)中藥對(duì)高糖刺激下足細(xì)胞相關(guān)蛋白的干預(yù)作用5.1各組小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP免疫組化檢測結(jié)果顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP蛋白的特異性免疫染色在正常組的足細(xì)胞細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核周圍呈細(xì)顆粒狀或線狀的強(qiáng)陽性表達(dá);在高糖組的足細(xì)胞漿及細(xì)胞核周邊呈弱陽性表達(dá);在最佳濃度的高糖加藥組的表達(dá)較高糖組有所增強(qiáng)。5.2各組小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP蛋白定量檢測結(jié)果干預(yù)足細(xì)胞48h后,與CG組比較,HG組、(HG+Z)組podocin、CD2AP蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.05,P0.01);與HG組比較,(HG+Z)組podocin、CD2AP蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.05);而干預(yù)24h、72h后,各組podocin、CD2AP蛋白的表達(dá)均無顯著差異(P0.05)。5.3各組小鼠足細(xì)胞podocin、CD2AP m RNA檢測結(jié)果與同時(shí)間點(diǎn)CG組比較,HG組、HG+Z組podocin、CD2AP mRNA表達(dá)均顯著升高(P0.01);與同時(shí)間點(diǎn)HG組比較,(HG+Z)組48h podocin、CD2AP m RNA表達(dá)量明顯升高(P0.01),24h、72h與同時(shí)間點(diǎn)HG組無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1 DN大鼠存在瘀血阻絡(luò)證的改變,同時(shí)化瘀通絡(luò)中藥對(duì)其表現(xiàn)出一定改善作用,且化瘀藥優(yōu)于通絡(luò)藥,具有協(xié)同作用。2化瘀通絡(luò)中藥能夠顯著減少DN大鼠24小時(shí)尿蛋白,與對(duì)照藥物厄貝沙坦比較作用更穩(wěn)定、更持久。3化瘀通絡(luò)中藥能夠減少DN大鼠血清尿素氮、胱抑素C,減輕腎組織病理形態(tài)學(xué)改變,與對(duì)照藥物厄貝沙坦療效相當(dāng),具有腎保護(hù)作用。4化瘀通絡(luò)中藥、化瘀中藥、通絡(luò)中藥均可上調(diào)足細(xì)胞裂孔膜蛋白(podocin、CD2AP、ZO-1)和骨架蛋白(α-actinin-4、Synaptopodin)的表達(dá),明確其均為該中藥防治DN的作用靶點(diǎn)之一,且部分指標(biāo)通絡(luò)中藥優(yōu)于化瘀中藥,兩者具有協(xié)同作用。5高糖刺激可抑制足細(xì)胞相關(guān)蛋白podocin、CD2AP的表達(dá),化瘀通絡(luò)中藥對(duì)高糖刺激下調(diào)podocin、CD2AP的效應(yīng)有顯著拮抗作用。對(duì)于本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還有待增加樣本量,避免實(shí)驗(yàn)干擾因素,改善實(shí)驗(yàn)條件等進(jìn)一步探討。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1486674