本文關(guān)鍵詞： Nrf2 基因敲除 液壓沖擊腦損傷 神經(jīng)功能缺損評(píng)分 腦組織含水量 神經(jīng)細(xì)胞凋亡 Caspase-3 Caspase-12 TUNEL　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：觀察Nrf2基因敲除小鼠液壓沖擊腦損傷后水腫腦組織中凋亡蛋白Casepase-3、Casepase-12表達(dá)變化和神經(jīng)細(xì)胞凋亡改變，探討Nrf2在液壓沖擊腦損傷中所發(fā)揮的抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用。 方法：用雄性Nrf2基因正常和基因敲除小鼠制作液壓沖擊腦損傷模型。選取成年小鼠32只，其中Nrf2+/+、Nrf2-/-各16只，體重約28-32g，隨機(jī)分為4組：Nrf2+/+對(duì)照組（Nrf2+/+NC組，n=8）、Nrf2+/+損傷組（Nrf2+/+TBI組，n=8）和Nrf2-/-對(duì)照組（Nrf2-/-NC組，n=8）、Nrf2-/-損傷組（Nrf2-/-TBI組，n=8）。其中，對(duì)照組僅頭顱開(kāi)窗不進(jìn)行液壓沖擊損傷；損傷組頭顱開(kāi)窗并常規(guī)制作液壓沖擊腦損傷模型。 各實(shí)驗(yàn)組小鼠于24h后采用神經(jīng)功能缺損評(píng)分（NSS）方法進(jìn)行評(píng)分，然后過(guò)度麻醉，斷頭，留取組織標(biāo)本。迅速?gòu)膿p傷區(qū)前緣取重約50mg水腫腦組織，采用干濕重法測(cè)量腦組織含水量；經(jīng)損傷區(qū)切成約4mm薄層冠狀腦組織，用多聚甲醛固定，采用HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化；免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)Caspase-3、Caspase-12的表達(dá)；原位末端熒光標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況；取損傷區(qū)域后緣腦組織采用免疫蛋白印跡法（Western Blot）檢測(cè)Caspase-3、Caspase-12蛋白含量。 結(jié)果： 1神經(jīng)功能缺損評(píng)分 腦損傷后，小鼠出現(xiàn)了神經(jīng)功能缺損癥狀。與對(duì)照組（NC）比較，損傷各組（TBI）在損傷后24h神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；但是Nrf2+/+TBI組（5.25±0.89）與Nrf2-/-TBI組（5.88±1.36）比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 2組織學(xué)觀察 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組肉眼觀察：腦組織軟腦膜完整表面光滑，腦溝及腦回清晰可見(jiàn)，腦表面及顱底無(wú)挫傷、出血、充血等表現(xiàn)。鏡下觀察：腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列有序，核膜完整，核仁藍(lán)色淡染。 Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組肉眼觀察：可見(jiàn)打擊側(cè)皮層局部挫傷，腦溝回存在積血，切面觀察可見(jiàn)皮層下有散在點(diǎn)狀出血，嚴(yán)重者可見(jiàn)腦室內(nèi)出血。鏡下觀察：挫傷灶周?chē)?xì)胞出現(xiàn)水腫且水腫程度明顯，胞漿淡染，部分出現(xiàn)空泡樣變性伴膠質(zhì)細(xì)胞增生。 3腦組織含水量測(cè)定 采用Elliot公式對(duì)小鼠腦組織含水量進(jìn)行測(cè)定。與對(duì)照組相比，損傷各組小鼠腦組織含水量明顯增高；Nrf2+/+NC組（78.37±0.18）與Nrf2-/-NC組（78.32±0.13）比較無(wú)差別（P0.05），Nrf2+/+TBI組（81.55±0.40）與Nrf2-/-TBI組（82.89±0.20）之間有明顯差別（P0.05）。 4免疫組化技術(shù)檢測(cè)Caspase-3和Caspase-12表達(dá) Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組小鼠Caspase-3和Caspase-12陽(yáng)性細(xì)胞很少，Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組小鼠則明顯增多。與Nrf2+/+NC組比較，Nrf2+/+TBI組動(dòng)物挫傷灶周?chē)X組織內(nèi)Caspase-3（28.892±5.865），Caspase-12（28.619±2.547）陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，且染色也較深（P0.05）；與Nrf2-/-NC組比較，Nrf2-/-TBI組動(dòng)物挫傷灶周?chē)X組織內(nèi)Caspase-3（56.884±5.819），Caspase-12（51.196±4.563）陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多，且染色也加深（P0.05）；與Nrf2+/+TBI組相比，Nrf2-/-TBI組動(dòng)物挫傷灶周?chē)X組織Caspase-3，Caspase-12陽(yáng)性細(xì)胞同樣明顯增多（P0.05）。 5TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞很少，Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)均較對(duì)照組明顯增多，且Nrf2-/-TBI組（59.30±9.90）明顯高于Nrf2+/+TBI組（31.11±5.31），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05)。 6Western Blot測(cè)定Caspase-3和Caspase-12蛋白表達(dá)情況 Nrf2+/+NC組和Nrf2-/-NC組小鼠Caspase-3和Caspase-12蛋白表達(dá)較少，但Nrf2+/+TBI組和Nrf2-/-TBI組小鼠表達(dá)明顯增多。與Nrf2+/+NC組比較，Nrf2+/+TBI組動(dòng)物挫傷灶周?chē)X組織內(nèi)Caspase-3（0.8857±0.0226），，Caspase-12（0.6327±0.0080）明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與Nrf2-/-NC組比較，Nrf2-/-TBI組動(dòng)物挫傷灶周?chē)X組織內(nèi)Caspase-3（1.0894±0.2479），Caspase-12（1.0290±0.1421）也明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；與Nrf2+/+TBI組相比，Nrf2-/-TBI組動(dòng)物挫傷灶周腦組織的Caspase-3，Caspase-12蛋白表達(dá)顯著增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1野生型（Nrf2+/+）小鼠液壓沖擊腦損傷后水腫腦組織內(nèi)Caspase-3和Caspase-12表達(dá)增多，神經(jīng)細(xì)胞凋亡加重，提示液壓沖擊腦損傷后Caspase-3和Caspase-12上調(diào)表達(dá)，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 2液壓沖擊傷后Nrf2基因敲除型（Nrf2-/-）小鼠腦損傷后Caspase-3和Caspase-12表達(dá)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯高于野生型（Nrf2+/+）小鼠，表明Nrf2基因可通過(guò)抑制Caspase依賴(lài)凋亡途徑，發(fā)揮抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的神經(jīng)保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R651.15

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1475176