本文關(guān)鍵詞： 都梁軟膠囊 偏頭痛 含量檢測 量-效關(guān)系 藥效學(xué) NF-κB　出處：《西南大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景 本文研究內(nèi)容屬于重慶華森制藥有限公司委托項目。該制劑為上市中成藥(國藥準(zhǔn)字：Z20055185),具有活血通絡(luò)、祛風(fēng)散寒之功效,主治頭痛屬風(fēng)寒瘀血阻滯脈絡(luò)癥者。但該藥缺乏藥效成分含量控制標(biāo)準(zhǔn),主治頭痛的范圍缺乏現(xiàn)代疾病的限定范圍,缺乏治療偏頭痛的效果驗證及其作用機(jī)制闡釋。委托單位擬進(jìn)行該制劑治療偏頭痛的藥效及其提取物的量效關(guān)系研究。該課題所屬項目“中藥大品種都梁軟膠囊技術(shù)改造”獲得科技部“重大新藥創(chuàng)制”專項(2010ZX09401-306-3-4)資助。 目的 研究都梁軟膠囊提取物改善偏頭痛模型大鼠的量-效關(guān)系,并在最佳用藥劑量基礎(chǔ)上,觀察都梁軟膠囊對偏頭痛模型大鼠的治療效果,并對其機(jī)制進(jìn)行探討,為臨床用藥提供現(xiàn)代藥理學(xué)實驗依據(jù)和作用機(jī)制闡釋。 方法 1.都梁軟膠囊主要成分的含量檢測：采用高效液相色譜儀對都梁軟膠囊主要成分進(jìn)行含量檢測。其中,歐前胡素和異歐前胡素：色譜柱(ODS C18柱),流動相(乙腈：水=52：48),流速(1mL·min-1),柱溫(30℃),檢測波長(248nm)；阿魏酸：色譜柱(ODS C18柱),流動相(甲醇：0.1%磷酸=35：65),流速(1mL·min-1),柱溫(30℃),檢測波長(321nm)。 2.都梁軟膠囊提取物治療偏頭痛模型大鼠的量-效關(guān)系研究：SD雄性大鼠90只,180～220g,隨機(jī)分成9組,即正常組、模型組、舒馬普坦組、都梁軟膠囊提取物6個不同劑量(0.13g·kg-1、0.39g·kg-1.1.31g·kg-1、3.93g·kg-1、13.13g·kg-1、39.39g·kg-1)組,每組10只。連續(xù)灌胃給藥7天(給藥量為10mL.kg-1),正常組和模型組給予等體積的溶媒。第7天給藥30min后,除正常組外,各組皮下注射硝酸甘油10mg-kg-1造模,模型組給予等體積的生理鹽水。隨后以30min為一個觀察時間段,對大鼠造模后0～180min進(jìn)行行為學(xué)觀察,記錄相關(guān)癥狀結(jié)果。造模4h后,麻醉,取血,分離血清和血漿,放免法測定血漿降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)和內(nèi)皮素(ET)含量,酶免法測定血清一氧化氮(NO)含量。取血后迅速取腦,分離腦干,稱重,熒光分光光度法測定腦干內(nèi)5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量。 3.都梁軟膠囊改善偏頭痛模型大鼠行為學(xué)指標(biāo)觀察：SD雄性大鼠60只,180-220g,隨機(jī)分成6組,即正常組、模型組、舒馬普坦組、都梁軟膠囊低、中、高劑量(0.44g·kg-1、1.31g·kg-1、3.93g·kg-1)組,每組10只。連續(xù)灌胃給藥7天(給藥量為10mL·kg-1),正常組和模型組給予等體積的溶媒。第7天給藥30min后,除正常組外,各組皮下注射硝酸甘油10mg·kg-1造模,模型組給予等體積的生理鹽水。隨后以30min為一個觀察時間段,對大鼠造模后0～180min進(jìn)行行為學(xué)觀察,記錄相關(guān)癥狀結(jié)果。 4.都梁軟膠囊對偏頭痛模型大鼠血液生化指標(biāo)及腦干單胺類遞質(zhì)的影響：SD雄性大鼠60只,180～220g,隨機(jī)分成6組,即正常組、模型組、舒馬普坦組、都梁軟膠囊低、中、高劑量(0.44g·kg-1,1.31g·kg-1,3.93g·kg1)組,每組10只。連續(xù)灌胃給藥7天(給藥量為10mL·kg-1),正常組和模型組給予等體積的溶媒。第7天給藥30min后,除正常組外,各組皮下注射硝酸甘油10mg·kg-1造模,模型組給予等體積的生理鹽水。造模4h后,麻醉,取血,分離血清和血漿,放免法測血漿CGRP、 ET,紫外分光光度法測血清NO含量。取血后迅速取腦,分離腦干,稱重,熒光分光光度法測定腦干內(nèi)5-HT、 NE、 DA含量。 5.都梁軟膠囊對偏頭痛模型大鼠炎癥相關(guān)因子的影響：SD雄性大鼠60只,180～220g,隨機(jī)分成6組,即正常組、模型組、舒馬普坦組、都梁軟膠囊低、中、高劑量(0.44g·kg-1、1.31g·kg-1、3.93g·kg-1)組,每組10只。連續(xù)灌胃給藥7天(給藥量為10mL·kg-1),正常組和模型組給予等體積的溶媒。第7天給藥30mmin后,除正常組外,各組皮下注射硝酸甘油10mg·kg-1造模,模型組給予等體積的生理鹽水。造模4h麻醉處死實驗動物,在冰上分離腦干,在4-C預(yù)冷的緩沖液中沖冼,并將組織分離成小塊,嚴(yán)格按照RIPA裂解液(強(qiáng))和細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒說明書操作,提取腦干組織總蛋白和胞核蛋白,BCA法測胞漿蛋白和核蛋白的含量。Western Blot法測定腦干胞核中核因子-kappaB p65(NF-κB p65).細(xì)胞癌基因fos(c-fos)蛋白的表達(dá),及總蛋白中一氧化氮合成酶(iNOS).白介素-1β(IL-1β)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)的表達(dá)。 結(jié)果 1.都梁軟膠囊主要成分的含量檢測：歐前胡素含量為1.54mg.g-1,異歐前胡素含量為0.49mg·g1,阿魏酸含量為51.46μg.g-1。 2.都梁軟膠囊提取物治療偏頭痛模型大鼠的量-效關(guān)系研究： 在行為學(xué)方面,與正常組比較,模型組大鼠在整個觀察時間段(0～180min)撓頭、爬籠次數(shù)顯著性升高(P0.01),并出現(xiàn)耳紅癥狀；與模型組比較,都梁軟膠囊提取物0.13g.kg-1、0.39g·kg-1、1.31g·kg-1、3.93g·kg-1、13.13g·kg-1、39.39g·kg-1組大鼠在造模0-60min后撓頭、爬籠次數(shù)無下降趨勢,兩者比較無顯著性差異(P0.05);1.31g·kg-1、3.93g·kg-1、13.13g·kg-1、39.39g·kg-1組大鼠在造模90～180min后撓頭、爬籠次數(shù)顯著性降低(P0.05或P0.01),且耳紅和爬籠消失時間顯著縮短(P0.01)。 在對血液及腦干生化指標(biāo)影響方面,與正常組比較,模型組血漿CGRP和血清NO顯著性升高,血漿ET和腦干5-HT、NE、DA含量均顯著性降低(P0.05或P0.01)；與模型組比較,都梁軟膠囊提取物1.31g·kg-1、3.93g·kg-1、13.13g·kg-1、39.39g.kg-1組血漿CGRP和血清NO含量顯著降低(P0.05或P0.01),3.93g·kg-1、13.13g·kg-1、39.39g·kg-1組血漿ET含量顯著升高(P0.01),1.31、3,93、13.13、39.39g·kg-1組腦干5-HT、NE含量顯著升高(P0.05或P0.01),39.39g·kg-1組腦干DA含量顯著升高(P0.05)。 所有評價指標(biāo)在1.31～39.39g.kg-1范圍內(nèi)存在一定的量效關(guān)系。 3.都梁軟膠囊改善偏頭痛模型大鼠行為學(xué)指標(biāo)觀察：與正常組比較,模型組大鼠在整個觀察時間段(0～180min)撓頭、爬籠次數(shù)顯著性升高(P0.01),并出現(xiàn)耳紅癥狀,顯示模型成功。與模型組比較,都梁軟膠囊0.44g-kg-1、1.31g-kg-1、3.93g·kg-1組大鼠在造模0-60min后撓頭、爬籠次數(shù)無下降趨勢,兩者比較無顯著性差異(P0.05)；1.31g·kg-1、3.93g·k-1組大鼠在造模60～180min后撓頭、爬籠次數(shù)顯著性降低(P0.05或P0.01),且耳紅和爬籠消失時間顯著縮短(P0.01)。提示都梁軟膠囊在1.31g·kg-1至3.93g-kg-1劑量范圍內(nèi),給藥7天,能顯著改善造模60～180min偏頭痛模型大鼠行為學(xué)異常。 4.都梁軟膠囊對偏頭痛模型大鼠血液生化指標(biāo)及腦干單胺類遞質(zhì)的影響：與正常組比較,模型組血漿CGRP和血清NO顯著性升高(P0.01),血漿ET及腦干5-HT、NE和DA含量均顯著性降低(P0.01)。與模型組比較,都梁軟膠囊0.44g·kg-1組腦干5-HT、NE、DA含量顯著升高(P0.01)；1.31g·kg-1組血漿CGRP和血清NO含量顯著降低(P0.01),腦干5-HT、NE、DA含量顯著升高(P0.01)；3.93g·kg-1組血漿CGRP和血清NO含量顯著降低(P0.01),血漿ET、腦干5-HT、NE、DA含量顯著升高(P0.01)。提示都梁軟膠囊在0.44g·kg-1至3.93g·kg-1劑量范圍內(nèi),給藥7天,能顯著改善偏頭痛模型大鼠血液生化指標(biāo)及腦干單胺類遞質(zhì)異常。 5.都梁軟膠囊對偏頭痛模型大鼠的炎癥相關(guān)因子的影響：與正常組比較,模型組大鼠腦干胞核內(nèi)NF-κB p65、 c-fos及總蛋白內(nèi)iNOS、 COX-2、IL-1βp的表達(dá)水平顯著升高(P0.01)。與模型組比較,都梁軟膠囊1.31g·kg-1、3.93g·kg-1組大鼠腦干胞核內(nèi)NF-κB p65、 c-fos及總蛋白內(nèi)iNOS、 COX-2、 IL-1β的表達(dá)水平顯著降低(P0.05或P0.01)。提示都梁軟膠囊在1.31g-kg-1至3.93g·kg-1劑量范圍內(nèi),給藥7天,能顯著改善偏頭痛模型大鼠炎癥相關(guān)因子異常。 結(jié)論 1.建立了都梁軟膠囊主要成分的檢測方法,提高其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 2.成功復(fù)制了硝酸甘油致偏頭痛大鼠模型,并運用于都梁軟膠囊相關(guān)研究中。 3.在對都梁軟膠囊提取物治療偏頭痛的量-效關(guān)系研究中,都梁軟膠囊提取物0.13g·kg-1.0.39g·kg-1組均只有改善相關(guān)指標(biāo)的作用趨勢,但無顯著性差異。其劑量在1.31g·kg-1-39.39g·kg1范圍內(nèi)有明顯改善相關(guān)指標(biāo)的作用,且呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。其中,39.39g·kg-1組對部分指標(biāo)的改善較13.13g·kg-1組反而降低。 4.都梁軟膠囊在1.31g.kg"1至3.93g·kg-1。劑量范圍內(nèi),給藥7天,能顯著改善造模60～180min偏頭痛模型大鼠行為學(xué)異常,改善血液生化指標(biāo)及腦干單胺類遞質(zhì)異常,以及改善炎癥相關(guān)因子異常。 5.都梁軟膠囊可顯著改善偏頭痛模型大鼠的血液和腦組織中,血管舒縮功能和神經(jīng)痛覺增敏相關(guān)指標(biāo)的異常變化,這可能是其治療偏頭痛的重要作用機(jī)制之一。 6.在硝酸甘油致偏頭痛模型大鼠的腦干組織中,NF-κB通路介導(dǎo)的相關(guān)炎癥因子被激活,這證明了硝酸甘油致偏頭痛有可能是由于其引起了腦干的無菌性炎癥。而都梁軟膠囊能明顯降低這些炎癥因子的表達(dá),這也可能是其治療偏頭痛的重要機(jī)制之一。
[Abstract]:Background The research content belongs to the entrustment project of Chongqing Watson Pharmaceutical Co . , Ltd . It has the functions of promoting blood circulation , dredging collaterals , dispelling pathogenic wind and dispelling cold , and has the effects of promoting blood circulation , dredging collaterals , dispelling pathogenic wind and dispelling cold , and can be used for treating migraine . Purpose To study the effect of soft capsule extracts on the dose - effect relationship of migraine model rats , and to observe the effect of soft capsule on migraine model rats on the basis of optimal dosage , and to discuss the mechanism of the soft capsule . method 1 . The content of main components of the soft capsule was detected by HPLC . Among them , imperatorin and imperatorin : chromatographic column ( ODS C18 column ) , mobile phase ( acetonitrile : water = 52 : 48 ) , flow rate ( 1 mL 路 min -1 ) , column temperature ( 30 鈩，

本文編號：1461370