本文關(guān)鍵詞： 兩性霉素B脂質(zhì)體 急性毒性 毒代動力學 HPLC-MS 性別差異　出處：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：兩性霉素B(Amphotericin B,AmB)屬多烯類廣譜抗真菌抗生素,適用于敏感真菌所致的深部真菌感染。但是注射用兩性霉素B毒性較大,尤其是腎毒性,長期使用會導致腎及循環(huán)系統(tǒng)損害,極大地限制了它的應(yīng)用,故人們考慮將其制成脂質(zhì)體制劑,以改變其在體內(nèi)的分布來降低毒性。脂質(zhì)體兩性霉素B(Liposomal Amphotericin B,L-AmB)是兩性霉素B的一種獨特的脂質(zhì)制劑,已使用近二十年來治療廣泛的真菌感染。兩性霉素B的抗真菌活性在其摻入脂質(zhì)體雙層后保留,但其毒性顯著降低。在前期的新藥研發(fā)中我們發(fā)現(xiàn),在雌雄大鼠靜脈注射L-AmB引發(fā)的急性毒性存在顯著的性別差異,表現(xiàn)為雌性大鼠的毒性反應(yīng)較雄性明顯嚴重,這種毒性反應(yīng)的性別差異原因不明,迄今未見報道。因此,本實驗選取不同來源的兩性霉素B脂質(zhì)體來驗證雌雄大鼠的急性毒性反應(yīng)的性別差異,并建立在生物樣品中兩性霉素B的HPLC-MS測定方法,研究L-AmB在雌雄大鼠毒代動力學特征,以期闡明急性毒性的性別差異,為兩性霉素B的臨床安全用藥提供重要參考信息。第一部分兩性霉素B脂質(zhì)體在雌雄大鼠的急性毒性實驗?zāi)康?1比較不同來源的兩種兩性霉素B脂質(zhì)體急性毒性反應(yīng)的性別差異。2比較兩性霉素B普通制劑急性毒性反應(yīng)的性別差異。方法:1 L-AmB急性毒性:SD大鼠分為四個劑量組,分別為0.5、1.0、2.0和4.0 mg·kg~(-1),每個劑量組大鼠各30只,雌雄各半。按每1 kg體重給予1毫升由華北制藥廠提供的兩性霉素B脂質(zhì)體(為1號,即L-AmB-1)進行單次尾靜脈注射給藥,尾靜脈注射完成后觀察并記錄大鼠出現(xiàn)的中毒癥狀及死亡情況。SD大鼠24只,隨機分為兩個劑量組2.0和4.0 mg·kg~(-1),每組12只,雌雄各半,按每1 kg體重給予1毫升自上海新先鋒藥業(yè)購買的兩性霉素b脂質(zhì)體(為2號,即l-amb-2)進行單次尾靜脈注射給藥,尾靜脈注射完成后觀察并記錄大鼠出現(xiàn)的中毒癥狀及死亡情況。2amb普通制劑急性毒性:sd大鼠40只,隨機分為四個劑量組0.5、1.0、2.0和4.0mg·kg~(-1),每組各10只,雌雄各半,按每1kg體重給予1mlamb普通制劑單次尾靜脈注射,注射完成后觀察并記錄sd大鼠出現(xiàn)的毒中毒癥狀及死亡情況。結(jié)果:1脂質(zhì)體急性毒性:1.1l-amb-1:大鼠單次靜脈注射l-amb-1葡萄糖注射液后,在0.5mg·kg~(-1)劑量組雌雄大鼠均未出現(xiàn)中毒癥狀;在1mg·kg~(-1)劑量組內(nèi)15只雌性大鼠中有5只出現(xiàn)中毒反應(yīng),15只雄性大鼠有3只出現(xiàn)中毒反應(yīng),且雌性動物的中毒反應(yīng)明顯重于雄性動物,毒性癥狀于給藥后20-30分鐘出現(xiàn),包括輕微的痙攣、俯臥、呼吸困難,在給藥后60分鐘后逐漸減輕直至消失。在2mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng),15只雌性受試動物中3只在給藥后2-4小時死亡,表現(xiàn)為痙攣抽搐、俯臥、呼吸困難、最終因呼吸衰竭而死亡。雄性反應(yīng)癥狀表現(xiàn)為痙攣抽搐、俯臥、呼吸困難,但毒性反應(yīng)程度較雌性動物稍輕,并未出現(xiàn)死亡,其他動物的毒性反應(yīng)癥狀在給藥4小時后逐漸減輕直至消失。在4mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)嚴重的毒性反應(yīng),15只雌性受試動物中11只在給藥后0.5-1小時死亡,15只雄性受試動物中5只在給藥后0.5-2小時死亡,其他動物的毒性反應(yīng)癥狀在給藥4-6小時后逐漸減輕直至消失。每個劑量組中雌雄大鼠各30只,分三批,每一批每個劑量下雌雄各5只動物。對三組動物死亡率進行統(tǒng)計分析,雌雄大鼠死亡率存在顯著差異(p0.05),雌性大鼠死亡率明顯高于雄性。1.2l-amb-2:大鼠單次靜脈注射l-amb-2葡萄糖注射液后,在2mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng),癥狀于給藥后20-30分鐘出現(xiàn),包括痙攣抽搐、俯臥、呼吸困難,雌性動物的中毒反應(yīng)重于雄性。在4mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)嚴重的毒性反應(yīng),6只雌性受試動物中4只在給藥后0.5-1小時死亡,6只雄性受試動物中2只在給藥后0.5-2小時死亡,其他動物的毒性反應(yīng)癥狀在給藥4小時后逐漸減輕直至消失。2amb普通制劑:大鼠單次靜脈注射amb普通制劑葡萄糖注射液后,在0.5mg·kg~(-1)劑量內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)毒性反應(yīng),癥狀包括痙攣抽搐、俯臥、呼吸困難,雌雄大鼠的毒性反應(yīng)相似,于給藥后20-30分鐘出現(xiàn),給藥后4小時癥狀逐漸減輕直至消失。在1mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),雌雄大鼠均出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng),表現(xiàn)與脂質(zhì)體相似,雌性與雄性各有3只在給藥后2-4小時死亡。在2、4mg·kg~(-1)劑量組內(nèi),實驗動物出現(xiàn)嚴重的毒性反應(yīng),所有受試動物在給藥后0.5-2小時全部死亡。小結(jié):1不同來源的l-amb在單次靜脈注射給藥后其急性毒性均表現(xiàn)出性別差異,即雌性的毒性反應(yīng)明顯重于雄性。急性毒性的主要反應(yīng)表現(xiàn)是神經(jīng)毒性,據(jù)此推測其急性毒性的靶器官是中樞神經(jīng)。2單次尾靜脈注射amb普通制劑在雌雄大鼠體內(nèi)急性毒性反應(yīng)不存在性別差異。第二部分兩性霉素b脂質(zhì)體在雌雄大鼠體內(nèi)的毒代動力學研究目的:建立血液及組織中兩性霉素b的hplc-ms測定方法,應(yīng)用該方法進行毒代動力學研究,測定藥物在血漿和組織中的分布,為動物毒性反應(yīng)的性別差異提供實驗依據(jù)。方法:1分別取相應(yīng)的生物基質(zhì),進行hplc-ms測定兩性霉素b的方法學驗證,包括特異性、檢測限與定量限、基質(zhì)效應(yīng)、精密度與準確度、提取率與回收率。2血漿樣品處理:sd大鼠48只,體重180-220g隨機分為3個劑量組1、2和4mg·kg~(-1),每組16只,雌雄各半。三組大鼠按1ml/1kg分別單次尾靜脈注射給予l-amb-1葡萄糖注射液。分別在給藥后的0.08、0.16、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、24和48小時進行內(nèi)眥取血,分離血漿,-20℃保存?zhèn)溆谩０凑説plc-ms方法測定血漿中兩性霉素b的濃度。3組織樣品處理:sd大鼠,36只,隨機分為3組,每組12只,雌雄各半。三組大鼠均以2mg·kg~(-1)的劑量按1ml/1kg單次尾靜脈注射給予l-amb-1葡萄糖注射液。分別在給藥后的0.5、1.0和2.0小時麻醉動物,取心、肝、腎、腦組織,用生理鹽水洗凈表面血污,濾紙拭干,稱重,-20℃保存?zhèn)溆�。hplc-ms法測定組織中鹽兩性霉素b的濃度。結(jié)果:1 HPLC-MS方法學建立和驗證:成功建立并驗證了兩性霉素B在血漿和組織中的HPLC-MS毒代動力學分析方法。2血藥濃度:靜脈注射L-AmB-1后,擬合的藥-時曲線,1 mg·kg~(-1)劑量組為二房室模型,2和4 mg·kg~(-1)劑量組為非房室模型。毒代動力學參數(shù)中雌性受試動物的AUC、T1/2明顯高于雄性,同時雌性受試動物的CL明顯低于雄性。3組織分布:藥物在肝臟和腎臟的分布最多并且表現(xiàn)出性別差異,雌性的藥物含量明顯高于雄性。藥物在心臟的含量很低且沒有明顯的性別差異。在腦中含量在給藥后隨時間的增加而增加,雌性為10.05、18.43、30.06mg×h×mL~(-1),雄性為9.16、13.96、19.58mg×h×mL~(-1)。小結(jié):毒代動力學結(jié)果顯示,由于雌性動物體內(nèi)兩性霉素B的暴露量更高,半衰期更長以及血漿清除率更低,造成了L-AmB-1的急性毒性表現(xiàn)出明顯的性別差異即雌性的毒性反應(yīng)明顯重于雄性。在組織中的分布情況表明,藥物在肝臟和腎臟分布最多,雌性明顯高于雄性,并且在腦中的含量在一直在隨時間而增加,雌性顯著高于雄性。結(jié)論:兩性霉素B脂質(zhì)體大鼠靜脈單次注射急性毒性存在顯著的性別差異,即雌性動物的中毒反應(yīng)顯著重于雄性動物,毒代動力學結(jié)果表明,這種性別差異是由于雌性大鼠體內(nèi)藥物清除較慢,致體內(nèi)暴露量增大,包括腦在內(nèi)的重要臟器藥物分布顯著高于雄性所致。
[Abstract]:In this study , we found that the acute toxicity induced by intravenous injection of L - AmB in male and female rats was significantly lower than that of male rats . The distribution of drug in liver and kidney was significantly higher than that in males .

【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R965

【參考文獻】

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