本文關(guān)鍵詞：生長抑素聯(lián)合清胰湯對腸道白色念珠菌感染小鼠的實(shí)驗(yàn)性研究　出處：《南華大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的 利用生長抑素（Somatostatin，SST）聯(lián)合中藥清胰湯合劑（QingYitang,QYT）干預(yù)腸道白色念珠菌感染的小鼠，觀察腸道組織中HE染色、腸道組織病理學(xué)評分、CFU菌落計(jì)數(shù)、用Tunel法及免疫組化技術(shù)檢測腸道組織凋亡細(xì)胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達(dá)，對比采用單一及聯(lián)合應(yīng)用生長抑素和中藥清胰湯合劑進(jìn)行干預(yù)，研究探討其對其腸粘膜屏障保護(hù)作用的可能機(jī)制。 方法 取健康SPF級（Specefic pathogen Free,無特定病原體）昆明雌性小鼠100只，體重18-20g，4周齡，采用隨機(jī)分組方式抽取20只為空白對照組（N）；80只用于建造腸道白色念珠菌感染造模組，分組后各組小鼠的體重?zé)o明顯差異。兩周后，從正常對照組及造模組中各隨機(jī)抽取5只小鼠，，取其腸道組織行CFU菌落及時、HE染色并光學(xué)顯微鏡下觀察，證實(shí)腸道感染白色念珠菌模型成功。將造模組剩余的64只小鼠（造模期間死亡11只）采用隨機(jī)分組方式分成模型組及實(shí)驗(yàn)組（生長抑素組、清胰湯、聯(lián)合用藥組），分別進(jìn)行藥物干預(yù)治療。生長抑素組小鼠給予濃度為0.08mg/ml生長抑素尾靜脈注射，0.2ml/只，Q6h；清胰湯組小鼠給予清胰湯灌胃0.5ml/只,Q6h；生長抑素+清胰湯聯(lián)合用藥組小鼠按前述方法同時等量給藥；空白對照組及模型組在同一時間給予等量生理鹽水尾靜脈注射或灌胃；藥物等量持續(xù)干預(yù)7天，連續(xù)觀察小鼠一般情況；干預(yù)治療后及空白對照小鼠，采用頸椎脫臼法將其處死，無菌取出小鼠的回腸末端、回盲部及右半結(jié)腸部分的腸道組織進(jìn)行HE鏡下觀、腸道內(nèi)容物的白色念珠菌菌落計(jì)數(shù)、腸道組織病理學(xué)評分、用Tunel法及免疫組化技術(shù)檢測腸道組織凋亡細(xì)胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達(dá)，同時采用圖像分析系統(tǒng)對其結(jié)果進(jìn)行量化分析。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）的方式表示，結(jié)合SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果 1、模型成功率為86.25%。 2、一般情況：大體觀察可見空白對照組小鼠一般情況好，活潑好動、毛發(fā)有光澤；模型組小鼠可見精神差、飲食減少、基本不活動、毛發(fā)散亂、無光澤等；治療組小鼠精神較好，稍有活動，毛發(fā)稍有光澤；麻醉消毒，打開腹腔后，發(fā)現(xiàn)空白對照組小鼠腸道組織無明顯異常，組織紅潤，腸蠕動功能正常；而模型組小鼠出現(xiàn)腸管壁充血及水腫、部分有腸管壞死，腸腔脹氣，腹腔有少量暗紅色積液；治療組小鼠為腸道組織顏色稍紅潤，管壁稍有充血及水腫，腸腔脹氣消失。 3、腸道內(nèi)容物白色念珠菌菌落（CFU）計(jì)數(shù)情況：空白對照組、模型組、生長抑素組、清胰湯組、聯(lián)合用藥組腸道內(nèi)容物均出現(xiàn)不同程度的白色念珠菌生長，在科瑪嘉培養(yǎng)基上呈現(xiàn)翠綠色的光滑菌落；通過菌落培養(yǎng)計(jì)數(shù)，證實(shí)白色念珠菌菌落計(jì)數(shù)與空白對照組相比，模型組明顯增多（P0.05），藥物干預(yù)后，治療組的菌落計(jì)數(shù)均有不同程度下降，有差異性（P0.05），以聯(lián)合用藥組最為顯著（P0.05）。 4、病理學(xué)檢測及病理學(xué)評分：光學(xué)顯微鏡下空白對照組小鼠腸道組織腺體結(jié)構(gòu)排列整齊、完整，粘膜及粘膜下層無毛細(xì)血管淤血、腺體腫脹、炎癥細(xì)胞聚集、彌散分布等特點(diǎn)；模型組小鼠腸道組織可見上皮下間隙增大，粘膜及粘膜下充血腫脹，腺體排列紊亂，毛細(xì)血管及微小靜脈擴(kuò)張充血，腸粘膜細(xì)胞壞死、脫落，可見炎性細(xì)胞聚集、浸潤，病理學(xué)評分結(jié)果證實(shí)，兩組相比有顯著的差異性（P0.05）。藥物干預(yù)后，治療組粘膜層及粘膜下層、固有層間隙變小，腺體排列稍整齊，血管稍有擴(kuò)張，脫落及壞死減輕，可見少量炎性細(xì)胞在腸腔內(nèi)存在，病理學(xué)評分結(jié)果以聯(lián)合用藥組最為顯著（P0.05）。 5、腸道粘膜細(xì)胞的凋亡檢測及凋亡指數(shù)：腸粘膜凋亡檢測細(xì)胞表達(dá)部位在細(xì)胞核處，陽性細(xì)胞表達(dá)�？瞻讓φ战M可見少量凋亡細(xì)胞，模型組小鼠粘膜細(xì)胞可見細(xì)胞體積縮小、變形，與周圍的細(xì)胞間隙增大，胞質(zhì)濃縮、胞膜裂解成塊狀，嚴(yán)重者可見以凋亡小體形成等特點(diǎn)的凋亡細(xì)胞，細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色或黃褐色。藥物干預(yù)后，在腸道組織病理學(xué)評分中凋亡細(xì)胞的表達(dá)有不同的減輕，與模型組相比有顯著差異性（P0.05）；藥物干預(yù)后，凋亡細(xì)胞有不同程度的表達(dá)，以聯(lián)合用藥組差異最為顯著（P0.05）。 6、腸粘膜凋亡基因Bax表達(dá)：Bax表達(dá)部位在包漿處，主要分布于粘膜細(xì)胞層及腺體，呈棕黃色陽性細(xì)胞表達(dá)，有時呈彌散性分布的特點(diǎn)。與空白對照組相比，模型組的Bax表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。治療組與模型組相比，Bax表達(dá)均有不同程度表達(dá)，但它們之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P㧐0.05）。 7、腸粘膜凋亡基因Bcl-2表達(dá)：Bcl-2表達(dá)部位在包漿處，主要分布于粘膜細(xì)胞層及腺體，呈棕黃色陽性細(xì)胞表達(dá)。與空白對照組相比，模型組的Bcl-2表達(dá)增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。治療組與模型組相比，Bcl-2表達(dá)均有不同程度的增加，以聯(lián)合組最為明顯，有顯著差異性（P0.05）。 結(jié)論 1、生長抑素與中藥清胰湯合劑聯(lián)合應(yīng)用能夠減少小鼠腸道內(nèi)白色念珠菌的定植數(shù)目，減少細(xì)胞凋亡，對腸粘膜屏障起到一定的保護(hù)作用。 2、生長抑素聯(lián)合中藥清胰湯合劑的聯(lián)合應(yīng)用對腸粘膜屏障的保護(hù)作用更加明顯。
[Abstract]:Purpose The expression of apoptosis cells and apoptotic genes Bax and Bcl - 2 in intestinal tissue was detected by using somatostatin ( SST ) and Qingyishu decoction mixture ( QY ) . The expression of Bax and Bcl - 2 in intestinal tissue was detected by Tunel method and immunohistochemistry technique , and the possible mechanism for the protective effect of somatostatin and traditional Chinese medicine Qingyi decoction on intestinal mucosal barrier was studied . method Two weeks later , five mice were randomly divided into model group and experimental group ( somatostatin group , Qingyi decoction , combined medication group ) . The results were analyzed by means of the method of cervical dislocation and immunohistochemistry . All the experimental data were analyzed by means of the mean 鹵 standard deviation ( x 鹵 S ) , combined with SPSS 18.0 . Results 1 . The success rate of the model was 86.25 % . 2 . General situation : It is generally observed that the mice in the control group are generally good , active and glossy ; the model group mice have good mental retardation , less diet , no activity , no hair loss , no luster and the like ; the mice in the model group have good mental health , slight activity and little hair luster ; and the mice in the model group have no obvious abnormity in intestinal tissue congestion and edema , and the mice in the model group are slightly red and moist in color of the intestinal canal , and the wall of the model group is slightly red and moist , and the wall of the intestinal cavity is slightly congested and edema , and the intestinal cavity expansion gas disappears . 3 . The colony count of candida albicans in intestinal contents : blank control group , model group , somatostatin group , Qingyi decoction group , and intestinal contents in combination group showed different degrees of Candida albicans growth . The colony count of Candida albicans was significantly increased compared with blank control group ( P0.05 ) . 4 銆

本文編號：1424930