本文關鍵詞：梔子苷對甲型H1N1流感病毒抑制效應的實驗研究

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【摘要】：目的：觀察梔子苷對甲型H1N1流感病毒感染馬丁達比犬腎上皮(MDCK)細胞的細胞病變效應(cytopathic effects, CPE)的抑制作用；探討梔子苷對甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎模型肺部炎癥及肺組織內(nèi)病毒復制的影響。方法：體外實驗,采用MTT法判定梔子苷對MDCK細胞的毒性作用,以帕拉米韋為陽性對照藥,根據(jù)MTT比色值(OD),在不同給藥方式(預防給藥、直接滅活及治療給藥)及不同藥物劑量干預下,觀測梔子苷對甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009 (NT0901))感染MDCK細胞的CPE的抑制作用,計算梔子苷對甲型H1N1流感病毒的抑制效率；體內(nèi)實驗,6-8周齡ICR小鼠按照隨機原則分為對照組、病毒感染組、梔子苷低劑量(5mg/kg)治療組、梔子苷中劑量(10mg/kg)治療組、梔子苷高劑量(20mg/kg)治療組、帕拉米韋(30mg/kg)治療組及聯(lián)合治療組(20 mg/kg梔子苷+30mg/kg帕拉米韋),每組10只。第0天,小鼠在乙醚麻醉后予以NT0901病毒滴鼻攻擊建立甲型H1N1流感病毒模型,從病毒攻擊后第1天開始,予以藥物腹腔注射,每天1次,連續(xù)兩周。每日觀察并記錄小鼠一般情況、體重變化率及存活率；第5天取肺組織測定小鼠肺指數(shù)；分別于第3天和第6天取肺組織測定肺內(nèi)病毒滴度的變化；第6天取肺組織進行肺組織病理石蠟切片蘇木精-伊紅(HE)染色,觀察肺組織炎癥浸潤情況,采用免疫組化檢測肺組織內(nèi)甲型H1N1流感病毒核蛋白(nucleoprotein, NP)的表達,并用Image pro plus 6.0軟件就NP陽性染色面積/基底膜長度比值進行比較；運用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測小鼠肺組織勻漿中炎性細胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10的水平。結果：體外實驗結果顯示,梔子苷對MDCK細胞的半數(shù)中毒濃度TD50 (median toxic dose)1040 μmol/L;在預防、直接滅活及治療給藥方式下,梔子苷對NT0901病毒感染MDCK細胞的半數(shù)有效藥物濃度EC50 (concentration for 50% of maximal effect)分別為91.90、96.25、87.68 μmol/L。在不同給藥方式下,梔子昔對CPE有明顯抑制作用(P0.05),且呈劑量依賴性；體內(nèi)實驗結果顯示,成功建立了甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009(NT0901))小鼠肺炎模型,梔子苷各劑量組小鼠肺指數(shù)、肺內(nèi)病毒滴度較病毒組顯著降低(P0.05)。肺組織HE染色結果顯示,病毒感染組小鼠肺臟正常肺組織結構消失,支氣管、細支氣管壁及其周圍組織和小葉間隔等肺間質(zhì)充血水腫,炎性細胞大量浸潤,而梔子苷20 mg/kg治療組炎性浸潤狀況則明顯減輕；免疫組化結果顯示,梔子苷10、20 mg/kg治療組小鼠肺組織NP陽性染色面積／基底膜長度比值與病毒感染組相比顯著減少(P0.05)。肺組織勻漿ELISA法測定結果顯示,梔子苷20 mg/kg治療組TNF-α、IFN-γ、IL-6水平較病毒組顯著降低(P0.05),而IL-4、IL-10較病毒組顯著升高(P0.05)。結論：梔子苷在體外有效抑制甲型H1N1流感病毒(A/Jiangsu/1/2009(NT0901))對MDCK細胞的CPE；梔子苷在體內(nèi)明顯減輕甲型H1N1流感病毒模型小鼠的肺部炎性浸潤,顯著降低肺組織中的病毒滴度,從而有效保護病毒對小鼠肺部的攻擊作用。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5

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