本文關(guān)鍵詞：α7nAChR-NMDAR在七氟醚引起的發(fā)育期大鼠海馬記憶損傷中的作用

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【摘要】：吸入麻醉藥包括七氟醚在內(nèi)可能對發(fā)育期大腦的結(jié)構(gòu)和功能有不利影響。本研究探究了七氟醚引起發(fā)育期大鼠記憶損傷可能的分子機制和其海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。目的探究在體和離體情況下七氟醚暴露新生大鼠后引起的樹突棘改變、空間工作記憶障礙及α7nAChR和NMDAR表達(dá)水平在以上變化中的作用,以及探究SFK是否為α7nAChR調(diào)節(jié)NMDA受體的中間媒介。方法1.雄性健康SD大鼠,160只,鼠齡7天,體重10~15 g,隨機分為4組(每組大鼠n=40):對照組(C組),吸入30%氧氣6 h;3%七氟醚麻醉組(S組),吸入3%七氟醚+30%氧氣6 h;α7nAChR激動劑PNU-282987組+3%七氟醚(PS組),腹腔注射PNU-282987(5 mg/kg)后吸入3%七氟醚+30%氧氣6 h;和α7nAChR拮抗劑MLA組(M組),腹腔注射MLA(3 mg/kg)后吸入30%氧氣6 h。各組大鼠飼養(yǎng)至2月鼠齡,采用Western blot檢測大鼠海馬區(qū)α7nACh R表達(dá)水平及膜蛋白和總蛋白含NR1、NR2A和NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平,免疫熒光方法觀察NMDA受體在大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的分布情況。采用Y迷宮實驗測試空間記憶能力,采用高爾基體染色法測定四組大鼠海馬CA1區(qū)輻射層神經(jīng)元樹突棘密度和樹突棘長度。2.健康雄性SD大鼠64只,鼠齡7天,體重10~15 g,隨機分為4組(每組大鼠n=16):對照組(C組),3%七氟醚麻醉組(S組),α7nAChR激動劑PNU-282987組(P組)和α7nAChR拮抗劑MLA組(M組)。麻醉各組大鼠,處死大鼠后立即取大腦,大腦即刻放入0℃腦脊液中冷卻孵育。制備大腦切片(180μm)。C組腦片不作處理,置入人工腦脊液中孵育;S組置入人工腦脊液中孵育同時暴露于3%七氟醚環(huán)境中6 h;P組,腦片置入含有PNU(終濃度為500nmol/L)的人工腦脊液中孵育;M組,將腦片置入含有MLA(終濃度為10nmol/L)的人工腦脊液中孵育。各組腦片孵育6 h后,應(yīng)用western blot檢測各組SFK及膜蛋白和總蛋白含NR1、NR2A和NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平,高爾基體染色法測定各組海馬CA1區(qū)輻射層神經(jīng)元樹突棘密度和樹突棘長度。3.健康雄性SD大鼠24只,鼠齡7天,體重10~15 g,隨機分為3組(每組大鼠n=8):對照組(C組);α7nAChR激動劑PNU-282987組(P組);α7nAChR激動劑PNU-282987+Src家族酪氨酸激酶(SFK)抑制劑PP2組(PP組),腦片置入含有PNU(終濃度為500nmol/L)+PP2(終濃度為104 nmol/L)的人工腦脊液中孵育。各組孵育6 h后,應(yīng)用western blot檢測各組膜蛋白和總蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平。結(jié)果1.在體情況下,與C組比較,S組和M組2月鼠齡大鼠海馬區(qū)CA1區(qū)輻射層樹突棘密度和長度均減少(P0.01);Y迷宮測試中,S組和M組2月鼠齡大鼠自發(fā)交替百分率較對照組降低(P0.01);S組大鼠海馬區(qū)α7nAChR表達(dá)水平及膜蛋白含NR1、NR2A及NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均降低(P0.01);M組α7nAChR表達(dá)水平及膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均減少(P0.01);膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體向膜轉(zhuǎn)運減少(P0.01)。與S組比較,PS組大鼠海馬區(qū)CA1區(qū)輻射層樹突棘密度和長度均增加(P0.01);Y迷宮測試中,PS組2月鼠齡大鼠自發(fā)交替百分率增加(P0.01);Western Blot中,PS組大鼠海馬區(qū)α7nAChR表達(dá)水平及膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均增加(P0.01);免疫熒光染色中,PS組大鼠海馬CA1區(qū)膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體向膜轉(zhuǎn)運增加(P0.01)。2.在離體情況下,與C組比較,S組和M組大鼠海馬區(qū)CA1區(qū)輻射層神經(jīng)元樹突棘密度和長度均減少(P0.01);而P組大鼠海馬區(qū)CA1區(qū)輻射層神經(jīng)元樹突棘密度和長度均增加(P0.01)。Western Blot中,與C組比較,S組大鼠海馬區(qū)SFK表達(dá)水平及膜蛋白含NR1、NR2A及NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均降低(P0.01);而P組大鼠海馬區(qū)SFK及膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均增加(P0.01),M組大鼠海馬區(qū)SFK及膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平均降低(P0.01)。與P組比較,PP組大鼠海馬區(qū)膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體表達(dá)水平降低(P0.01)。結(jié)論七氟醚暴露幼鼠后可引起其海馬區(qū)神經(jīng)元密度和形態(tài)改變,損傷其長期學(xué)習(xí)記憶能力。在體和離體情況下,α7nAChR被激活后可逆轉(zhuǎn)七氟醚暴露幼鼠引起的樹突棘減少和空間記憶損傷,減弱七氟醚對膜蛋白含NR2B亞基的NMDA受體的下調(diào)作用。并且α7nAChR可通過SFK調(diào)控NR2B亞基的NMDA受體的表達(dá),該變化可能參與了七氟醚暴露新生大鼠引起海馬神經(jīng)元樹突棘形態(tài)改變和空間工作記憶損傷的機制。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614

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8 曹t熎，

本文編號：1226134