發(fā)布時間：2017-11-07 11:07

  本文關鍵詞：夏荔芪膠囊對大鼠良性前列腺增生的療效及初步機制探討

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【摘要】：研究背景良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)是中老年男性常見泌尿男科疾病,流行病學資料顯示,BPH隨年齡增加發(fā)病率逐漸上升,在50、60及80歲以上老年男性發(fā)病率分別為50%、70%和92%,其中半數(shù)左右患者因膀胱出口梗阻導致下尿路癥狀、急性尿潴留、反復泌尿系感染、腎功能損害等而需要臨床干預。BPH病因學研究是目前BPH防治研究的中心,同時也是泌尿男科學及老年病學研究熱點之一,但具體的病理生理學機制尚未完全闡明。目前認為年齡增長和有功能的睪丸是BPH的主要發(fā)病基礎,同時也是BPH的必備條件。近年來研究認為,代謝機制紊亂、激素紊亂及慢性炎癥與BPH的發(fā)生發(fā)展密切相關。目前,藥物干預已成為防治BPH的一個重要手段,其主要通過調(diào)節(jié)雌雄激素、改善下尿路癥狀、改善微循環(huán)和增強免疫功能而發(fā)揮作用。中藥由于其安全性較好、不良反應小、療效確切、適合長期服用等特點,在BPH治療方面具有一定的優(yōu)勢,有著良好的發(fā)展前景。BPH在中醫(yī)屬“癃閉”、“精濁”、“淋證”范疇。中醫(yī)辯證分析該病病因復雜,主要為濕熱蘊結、肺熱氣壅、脾氣不升、腎元虧虛、肝郁氣滯等。夏荔芪膠囊以補氣、活血、祛濕為組方原則,具有健脾益腎、利水散結的功效,適于臨床脾腎氣虛兼痰瘀證的BPH患者。在現(xiàn)代生物醫(yī)學研究中,采用動物疾病模型,進行藥物干預試驗已成為重要手段,有助于方便有效地認識人類疾病發(fā)展規(guī)律,從而有利于制定相應的防治措施。本課題旨在通過建立雄激素誘導的BPH大鼠模型,同時使用夏荔芪膠囊進行實驗干預,觀察夏荔芪膠囊對實驗性大鼠前列腺增生的抑制作用,并從生殖激素、細胞增殖／凋亡相關蛋白、生長因子、氧化應激損傷、炎癥因子的平衡方面初步探討其作用機制,為夏荔芪膠囊的臨床應用提供實驗依據(jù)。目的1、通過對去勢后SD大鼠皮下注射丙酸睪酮建立BPH模型,使用夏荔芪膠囊進行干預并探討其對BPH大鼠前列腺組織形態(tài)學的影響；2、探討夏荔芪膠囊對BPH大鼠血清及前列腺組織雙氫睪酮(DHT)含量的影響；3、研究夏荔芪膠囊對BPH大鼠前列腺組織中增殖細胞核抗原(PCNA).半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一3(caspase-3)表達水平的影響；4、探究夏荔芪膠囊對BPH大鼠前列腺組織中堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)表達水平的影響；5、探索夏荔芪膠囊對BPH大鼠血清及前列腺組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響；6、研究夏荔芪膠囊對BPH大鼠血清及前列腺組織白介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子.α(TNF-α)表達水平的影響；7、通過以上研究,觀察夏荔芪膠囊治療大鼠BPH模型的療效,并初步探討其作用機制,為臨床上治療BPH奠定實驗基礎及提供理論依據(jù)。方法將雄性SD大鼠隨機分為5組,每組10只。A組：空白對照組(假手術組)；B組：模型對照組；C組：夏荔芪膠囊高劑量組(1.20 g/kg·d,30d)；D組：夏荔芪膠囊低劑量組(0.61 g/kg·d,30 d);E組：陽性對照組(非那雄胺0.8 mg/kg·d,30 d)。將SD大鼠稱重后,麻醉下無菌切除雙側睪丸,A組行假手術。術后第8d開始皮下注射丙酸睪酮5 mg/kg·d,連續(xù)30 d,A組皮下注射等體積生理鹽水。造模期間常規(guī)飼養(yǎng),1個月后麻醉下行前列腺組織活檢以確認造模成功,按前述方法連續(xù)用藥1個月。每組于末次給藥后稱重,麻醉后取血,切開腹部,觀察前列腺組織外觀及周圍粘連情況,完整剝離前列腺,用濾紙吸干后稱重。取部分前列腺組織,用10%甲醛溶液固定后制備前列腺病理組織切片,HE染色后鏡下觀察前列腺組織病理變化情況；使用免疫組化及免疫熒光法檢測各組大鼠前列腺組織PCNA、caspase-3及bFGF的表達情況；使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測各組大鼠血清及前列腺組織中SOD、MDA、DHT、IL-8、TNF-α的表達水平。使用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料以x±SD表示,經(jīng)正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗后,方差齊者組間總體比較使用單因素方差分析(One-Way ANOVA),方差不齊則進行秩和檢驗；有差異者進一步采用最小顯著差異法(LSD-t)做兩兩比較。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果1、各組大鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)改變情況與空白組相比,模型組的前列腺濕重明顯增加[(1326.15±60.20)mg vs.(471.38±17.96)mg,P0.01]；而夏荔芪高、低治療組[(914.33±36.08)mg；(1099.76±46.28)mg]及陽性藥物對照組[(817.25±53.99)mg]的前列腺濕重較模型組則明顯降低(P0.01)；且夏荔芪高劑量組較夏荔芪低劑量組的前列腺濕重降低更明顯(P0.01),而各治療組中陽性對照組前列腺濕重降低最明顯。與空白組相比,模型組的前列腺指數(shù)明顯增加[(1.06±0.06)vs.(2.89±0.18),P0.01]；而與模型組相比,夏荔芪高、低治療組(2.02±0.08；2.39±0.11)及陽性藥物對照組(1.83±0.10)的前列腺指數(shù)則明顯降低(P0.01)；且夏荔芪高劑量組較夏荔芪低劑量組的前列腺指數(shù)下降更顯著(P0.01),而各治療組中陽性對照組前列腺指數(shù)下降最顯著。2、各組大鼠前列腺組織大體情況及病理組織學改變?nèi)庋塾^察,空白組大鼠前列腺色澤淡紅、腺體組織質(zhì)軟,有彈性,表面光滑無結節(jié),與周圍其他組織無粘連,容易分離。模型組大鼠前列腺體積增大,色澤暗紅,欠光澤,質(zhì)地較韌,彈性差,局部與周圍組織無粘連,易剝離。夏荔芪治療組前列腺腺體質(zhì)地較柔軟,有彈性,有光澤,無局部結節(jié),與周圍組織無粘連,以高劑量組改善更明顯；陽性藥物對照組前列腺腺體與周圍組織無粘連,偶可觸及結節(jié),彈性稍差。HE染色光鏡下結果顯示,空白組大鼠前列腺組織結構完整,腺上皮細胞排列整齊,腺腔內(nèi)可見較多染色為粉紅色的分泌物,間質(zhì)未見水腫,有少量纖維組織,偶見極少量炎性細胞浸潤；模型組大鼠前列腺腺腔狹窄,部分腺腔閉塞,腺上皮細胞有不同程度增生,腺腔內(nèi)有少量分泌物,間質(zhì)內(nèi)可見大量纖維結締組織增生,腺泡腔內(nèi)及組織間隙內(nèi)可見少量炎性細胞浸潤；各夏荔芪治療組及陽性藥物治療組大鼠前列腺腺腔結構基本完整,未見基底膜破壞,腺上皮增生不明顯,間質(zhì)內(nèi)纖維組織少量增生,無或可見少量炎性細胞浸潤,其中以高劑量組前列腺組織改善較為明顯；陽性藥物治療組前列腺形態(tài)學改變介于高、低劑量組兩者之間。3、各組大鼠血清及前列腺組織中DHT表達情況檢測結果表明,與空白對照組比較,模型組大鼠血清及前列腺組織中DHT含量[(18.04±0.62)ng/ml及(186.14±6.26)pg/mg vs.(7.51±0.67)ng/ml及(79.32±6.06)pg/mg]均明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。與模型組比較,各治療組大鼠血清及前列腺組織勻漿中的DHT含量均明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),其中,以非那雄胺組[(10.11±0.78)ng/ml及(100.63±5.78)pg/mg]下降最明顯；而夏荔芪高劑量組血清及前列腺組織中DHT含量均較低劑量組下降明顯(P0.01),但夏荔芪高劑量組血清DHT含量與非那雄胺組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),而前列腺組織中DHT含量稍高于非那雄胺組(P0.05)。4、各組大鼠前列腺組織中PCNA及caspase-3表達情況免疫組化結果顯示,與空白組相比,模型組大鼠前列腺組織中PCNA表達明顯增多,各治療組與模型組相比,前列腺組織中PCNA表達均有明顯降低,其中以陽性對照組下降較為明顯。免疫熒光結果顯示,與空白組相比,模型組大鼠前列腺組織中caspase-3表達減少,而各治療組與模型組相比,前列腺組織中caspase-3的表達亦明顯增多,其中以陽性對照組增多較顯著。5、各組大鼠前列腺組織中bFGF表達水平免疫熒光結果顯示,與空白組相比,模型組大鼠前列腺組織bFGF表達明顯增多,各治療組與模型組相比,前列腺組織中bFGF表達均有明顯減少,其中以陽性對照組減少較為明顯。6、各組大鼠血清及前列腺組織中SOD活性及MDA含量改變情況實驗結果顯示,與空白組相比,模型組大鼠血清及前列腺組織中SOD活性[(116.05±6.06)U/L及(0.87±0.03)U/g vs.(248.80±6.49)U/L及(2.03±0.11)U/g]均顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與模型組比較,各治療組大鼠血清及前列腺組織中SOD活性明顯增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),其中,以高劑量夏荔芪治療組[(218.52±7.83)U/L及(1.67±0.05)U/g]升高最明顯,低劑量夏荔芪組次之,非那雄胺組升高最不明顯,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.01或P0.05)。與空白組比較,模型組大鼠血清及前列腺組織中MDA含量[(22.62±0.78) nmol/L及(231.08±9.40) pmol/g vs. (6.82±0.60) nmol/L及(99.73±5.97) pmol/g]顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與模型組比較,各治療組血清及前列腺組織中的MDA含量均有明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)；夏荔芪高、低劑量治療組間MDA的表達水平逐漸遞增,其中高劑量夏荔芪治療組MDA[(11.40±0.51)nmol/L及(126.81±7.84)pmol/g]降低最明顯,除低劑量夏荔芪組與非那雄胺組血清MDA含量之間差異無統(tǒng)計學意義外(P0.05),余各組間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01或P0.05)。7、各組大鼠血清及前列腺組織中IL-8、TNF-α含量改變情況ELISA測定結果表明：與空白對照組比較,模型組大鼠血清及前列腺組織中IL-8含量[(17.12±0.73)ng/ml及(174.04±5.24)ng/mg vs.(5.71±0.65)ng/ml及(65.81±3.52)ng/mg]均明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與模型組比較,各治療組大鼠血清及前列腺組織中IL-8含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),其中,以高劑量夏荔芪組[(7.42±0.71)ng/ml及(89.86±6.65)ng/mg]下降最明顯,低劑量組次之,非那雄胺組下降最不明顯,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。與空白對照組比較,模型組大鼠血清及前列腺組織中TNF-α含量[(1.80±0.06)ng/ml及(18.26±0.81)pg/mg vs.(0.55±0.04)ng/ml及(7.74±0.64)pg/mg]均明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)；與模型組比較,各治療組大鼠血清及前列腺組織中TNF-α含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),其中,以高劑量夏荔芪組[(0.84±0.05)ng/ml及(9.91±0.63)pg/mg]下降最明顯,低劑量組次之,非那雄胺組下降最不明顯,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結論1、采用去勢后丙酸睪酮5 mg/kg·d皮下注射,連續(xù)注射4周后可成功誘導BPH大鼠模型；2、夏荔芪膠囊可顯著降低BPH大鼠前列腺濕重及前列腺指數(shù)；3、夏荔芪膠囊能明顯降低BPH大鼠血清及前列腺組織中DHT含量；4、夏荔芪膠囊能抑制前列腺組織中PCNA的表達,提高caspase-3的表達,調(diào)節(jié)體內(nèi)增殖／凋亡水平,改善組織增生狀況；5、夏荔芪膠囊能明顯抑制前列腺組織bFGF的表達,減輕組織的增生情況。6、夏荔芪膠囊能提高大鼠體內(nèi)抗氧化物質(zhì)SOD的活性,降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的水平,提高機體的抗氧化能力；7、夏荔芪膠囊通過降低血清及前列腺組織炎癥因子IL-8、TNF-α的表達,減輕前列腺組織的炎癥反應；綜上所述,夏荔芪膠囊能降低BPH大鼠的前列腺濕重及前列腺指數(shù),通過下調(diào)DHT表達,調(diào)節(jié)組織增殖／凋亡(PCNA/caspase-3)蛋白含量,抑制bFGF的表達,調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化／抗氧化物質(zhì)(MDA/SOD)的平衡,抑制血清及前列腺組織內(nèi)炎癥因子(IL-8、TNF-α)的表達等機制,起到治療大鼠BPH的目的,可作為BPH藥物治療的一個新的選擇。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

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