本文關鍵詞：糖尿病大鼠腎組織Nrf2、NQO1的表達及蝦青素對其干預作用的研究

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【摘要】：目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者的主要慢性并發(fā)癥之一,也是導致終末期腎衰竭的重要病因。其主要臨床特點為逐漸出現(xiàn)的蛋白尿及腎功能損害,病理表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚、系膜擴張、間質纖維化等。在糖尿病腎臟損傷的發(fā)生發(fā)展過程中,氧化應激、炎癥反應以及腎臟固有細胞的凋亡發(fā)揮了重要作用。高糖環(huán)境可以導致機體產生過多的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),從而進一步活化相關信號傳導通路,致使細胞因子及生長因子的失調。核因子E2相關因子(Nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)是機體調節(jié)抗氧化反應的重要轉錄因子。Nrf2能夠激活抗氧化反應元件(Anti-oxidative response element,ARE)的基因序列,使下游的抗氧化物質和Ⅱ相解毒酶表達增加,而發(fā)揮抗氧化應激作用。目前Nrf2/ARE通路的研究主要在抗老化、抗凋亡以及抗腫瘤等方面,而關于糖尿病腎病氧化應激的研究甚少。蝦青素屬于類胡蘿卜素的一種,具有很好的抗氧化能力,能更有效的防治各種疾病,如腫瘤、糖尿病、糖尿病腎病和心血管疾病等。蝦青素是否可以通過激活Nrf2/ARE信號通路減輕糖尿病腎病氧化應激反應的國內外研究比較少見。本課題擬通過應用蝦青素對鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)誘導的糖尿病大鼠模型進行干預,應用分子生物學檢測方法,觀察大鼠腎臟組織中Nrf2、NAD(P)H醌氧化還原酶1(Nicotinamide quinone oxidoreductase1,NQO1)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量變化。探討蝦青素是否通過Nrf2/ARE途徑改善大鼠氧化應激狀態(tài),從而延緩腎損傷的發(fā)展,為DN的防治提供理論依據(jù)。方法:選擇36只清潔級雄性健康SD大鼠,體重約180~220g(購于河北醫(yī)科大學實驗動物中心),隨機抽取24只制備糖尿病模型,剩余12只作為正常對照組(NC組,n=12)。1周適應性喂養(yǎng)后,將大鼠禁食12小時,腹腔內一次性注射STZ65mg/kg,72h后用羅氏血糖儀從大鼠尾靜脈采血測血糖≥16.7mmol/L為造模成功。NC組大鼠僅予以同等劑量的枸櫞酸緩沖液腹腔內注射。造模成功后,將糖尿病大鼠隨機分為糖尿病組(DM組,n=12)、蝦青素干預組(ATX組,n=12)。ATX組自第二天起予以蝦青素25mg/kg灌胃,每天1次,NC組與DM組灌以等量植物油。實驗期間大鼠自由攝取食水,不進行任何藥物干預。觀察12周。于干預后8周、12周末從各組隨機抽取6只大鼠,置于代謝籠內收集24h尿液標本,以測定24小時尿蛋白量(24 hours urinary protein,24h UP);稱重后向腹腔內注射10%水合氯醛麻醉,心臟取血,分離血清,用于測定血肌酐、尿素氮和血糖;處死大鼠,雙腎剝除腎臟的包膜后稱重,切取腎臟用于蘇木素伊紅(HE)、糖原染色(PAS),觀察腎組織病理變化;免疫組織化學方法檢測Nrf2、NQO1的表達情況;取部分腎皮質以制備皮質勻漿測定MDA、總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)含量,Real time PCR檢測Nrf2、NQO1m RNA表達。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±S)表示,應用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,不滿足正態(tài)和方差齊性的數(shù)據(jù)用非參數(shù)檢驗方法,以P0.05有統(tǒng)計學意義。結果:NC組大鼠皮毛光滑,體重逐漸增加。DM組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、飲水、進食和尿量增加等癥狀,隨著時間推移,逐漸出現(xiàn)腹瀉、毛色晦暗、體重下降、反應遲鈍等現(xiàn)象。ATX組大鼠上述情況比DM組好。與NC組比,DM組和ATX組24小時尿蛋白量、血糖、血肌酐及尿素氮均增加(P0.05);ATX組24小時尿蛋白、血肌酐及尿素氮比DM組下降(P0.05),兩組間血糖下降無統(tǒng)計學差異(P0.05)。光鏡下觀察各組腎臟組織HE及PAS染色,NC組腎小球、腎小管無明顯的病理改變。DM組腎小球體積增大、系膜基質增生、細胞增多、基底膜增厚,ATX組腎臟的病理改變較DM組輕。8、12周DM組腎皮質勻漿中MDA濃度顯著升高,ATX組明顯低于DM組(P0.05),DM組T-AOC水平較NC組降低,ATX組水平明顯高于DM組(P0.05)。8周、12周末,DM組與NC組比較腎組織中Nrf2、NQO1的表達增多,ATX組高于DM組(P0.05)。PCR表達趨勢與免疫組織化學結果一致。結論:糖尿病狀態(tài)下,大鼠腎臟氧化應激反應增強,同時抗氧化應激產物增加;蝦青素能上調Nrf2的表達,從而激活Ⅱ相解毒酶NQO1的表達,拮抗高糖誘導的氧化應激反應,對STZ誘導的糖尿病腎病大鼠腎臟具有保護作用。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳浩;許浪;;Nrf2/NQO1信號通路在胃癌干細胞氧化應激反應中的作用機制[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年03期

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本文編號：1138477