本文關(guān)鍵詞：糖尿病大鼠腎組織Nrf2、NQO1的表達(dá)及蝦青素對(duì)其干預(yù)作用的研究

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【摘要】：目的:糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)患者的主要慢性并發(fā)癥之一,也是導(dǎo)致終末期腎衰竭的重要病因。其主要臨床特點(diǎn)為逐漸出現(xiàn)的蛋白尿及腎功能損害,病理表現(xiàn)為腎小球基底膜增厚、系膜擴(kuò)張、間質(zhì)纖維化等。在糖尿病腎臟損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)以及腎臟固有細(xì)胞的凋亡發(fā)揮了重要作用。高糖環(huán)境可以導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生過(guò)多的活性氧(Reactive oxygen species,ROS),從而進(jìn)一步活化相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路,致使細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子的失調(diào)。核因子E2相關(guān)因子(Nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)是機(jī)體調(diào)節(jié)抗氧化反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子。Nrf2能夠激活抗氧化反應(yīng)元件(Anti-oxidative response element,ARE)的基因序列,使下游的抗氧化物質(zhì)和Ⅱ相解毒酶表達(dá)增加,而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激作用。目前Nrf2/ARE通路的研究主要在抗老化、抗凋亡以及抗腫瘤等方面,而關(guān)于糖尿病腎病氧化應(yīng)激的研究甚少。蝦青素屬于類胡蘿卜素的一種,具有很好的抗氧化能力,能更有效的防治各種疾病,如腫瘤、糖尿病、糖尿病腎病和心血管疾病等。蝦青素是否可以通過(guò)激活Nrf2/ARE信號(hào)通路減輕糖尿病腎病氧化應(yīng)激反應(yīng)的國(guó)內(nèi)外研究比較少見。本課題擬通過(guò)應(yīng)用蝦青素對(duì)鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型進(jìn)行干預(yù),應(yīng)用分子生物學(xué)檢測(cè)方法,觀察大鼠腎臟組織中Nrf2、NAD(P)H醌氧化還原酶1(Nicotinamide quinone oxidoreductase1,NQO1)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量變化。探討蝦青素是否通過(guò)Nrf2/ARE途徑改善大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài),從而延緩腎損傷的發(fā)展,為DN的防治提供理論依據(jù)。方法:選擇36只清潔級(jí)雄性健康SD大鼠,體重約180~220g(購(gòu)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),隨機(jī)抽取24只制備糖尿病模型,剩余12只作為正常對(duì)照組(NC組,n=12)。1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后,將大鼠禁食12小時(shí),腹腔內(nèi)一次性注射STZ65mg/kg,72h后用羅氏血糖儀從大鼠尾靜脈采血測(cè)血糖≥16.7mmol/L為造模成功。NC組大鼠僅予以同等劑量的枸櫞酸緩沖液腹腔內(nèi)注射。造模成功后,將糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組,n=12)、蝦青素干預(yù)組(ATX組,n=12)。ATX組自第二天起予以蝦青素25mg/kg灌胃,每天1次,NC組與DM組灌以等量植物油。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由攝取食水,不進(jìn)行任何藥物干預(yù)。觀察12周。于干預(yù)后8周、12周末從各組隨機(jī)抽取6只大鼠,置于代謝籠內(nèi)收集24h尿液標(biāo)本,以測(cè)定24小時(shí)尿蛋白量(24 hours urinary protein,24h UP);稱重后向腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛麻醉,心臟取血,分離血清,用于測(cè)定血肌酐、尿素氮和血糖;處死大鼠,雙腎剝除腎臟的包膜后稱重,切取腎臟用于蘇木素伊紅(HE)、糖原染色(PAS),觀察腎組織病理變化;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Nrf2、NQO1的表達(dá)情況;取部分腎皮質(zhì)以制備皮質(zhì)勻漿測(cè)定MDA、總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)含量,Real time PCR檢測(cè)Nrf2、NQO1m RNA表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,不滿足正態(tài)和方差齊性的數(shù)據(jù)用非參數(shù)檢驗(yàn)方法,以P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:NC組大鼠皮毛光滑,體重逐漸增加。DM組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、飲水、進(jìn)食和尿量增加等癥狀,隨著時(shí)間推移,逐漸出現(xiàn)腹瀉、毛色晦暗、體重下降、反應(yīng)遲鈍等現(xiàn)象。ATX組大鼠上述情況比DM組好。與NC組比,DM組和ATX組24小時(shí)尿蛋白量、血糖、血肌酐及尿素氮均增加(P0.05);ATX組24小時(shí)尿蛋白、血肌酐及尿素氮比DM組下降(P0.05),兩組間血糖下降無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。光鏡下觀察各組腎臟組織HE及PAS染色,NC組腎小球、腎小管無(wú)明顯的病理改變。DM組腎小球體積增大、系膜基質(zhì)增生、細(xì)胞增多、基底膜增厚,ATX組腎臟的病理改變較DM組輕。8、12周DM組腎皮質(zhì)勻漿中MDA濃度顯著升高,ATX組明顯低于DM組(P0.05),DM組T-AOC水平較NC組降低,ATX組水平明顯高于DM組(P0.05)。8周、12周末,DM組與NC組比較腎組織中Nrf2、NQO1的表達(dá)增多,ATX組高于DM組(P0.05)。PCR表達(dá)趨勢(shì)與免疫組織化學(xué)結(jié)果一致。結(jié)論:糖尿病狀態(tài)下,大鼠腎臟氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng),同時(shí)抗氧化應(yīng)激產(chǎn)物增加;蝦青素能上調(diào)Nrf2的表達(dá),從而激活Ⅱ相解毒酶NQO1的表達(dá),拮抗高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng),對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎臟具有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳浩;許浪;;Nrf2/NQO1信號(hào)通路在胃癌干細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用機(jī)制[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

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本文編號(hào)：1138477