本文關鍵詞：正畸牙移動過程中骨膜蛋白與高遷移率族蛋白1表達的相關性

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【摘要】：研究背景和目的在口腔正畸臨床工作中,我們通過施加機械應力調整牙齒的位置來實現(xiàn)治療錯頜畸形的目的,而實現(xiàn)這一過程的生物學基礎在于牙周組織的改建。當牙齒受到正畸矯治力作用時,牙槽骨壓力側與張力側分別發(fā)生骨吸收和骨形成,最終實現(xiàn)牙齒移動。多種細胞因子相互作用,參與牙周組織的改建過程。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種非組蛋白染色體結合蛋白,其作為核蛋白調節(jié)基因轉錄的作用已引起人們的廣泛關注,近年來其作為晚期炎癥因子的角色也逐漸引起人們的高度重視。它可以通過主動釋放和被動釋放兩種方式由細胞核釋放到細胞質,進而釋放到細胞外基質中,發(fā)揮免疫介質的作用。有研究表明,HMGB1在牙周膜細胞中有基本表達量,牙周膜細胞將其釋放到細胞外后能與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(Receptor for Advanced Glycation End Products, RAGE)特異性結合來調節(jié)破骨細胞生成因子的表達,參與骨改建過程。本實驗第一部分通過Waldo法建立小鼠正畸牙齒移動模型,研究正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達變化。骨膜蛋白(Periostin, Pn)為一種分子量為90kD的多功能細胞外基質蛋白,主要表達在骨膜與牙周膜中,是參與牙周組織改建的重要蛋白。骨膜蛋白基因敲除小鼠牙齒萌出3個月后,牙周組織開始出現(xiàn)明顯的破壞,附著喪失嚴重且伴有牙槽骨的吸收。在正畸牙齒移動過程中,骨膜蛋白不僅能夠傳導機械應力、維持應力下牙周組織的完整性,而且還與牙周病及牙周組織的改建有著密切的關系。第二部分實驗的研究目的旨在探討正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達的影響,從而將兩種參與牙周組織改建的重要蛋白聯(lián)系起來,分析兩者之間的相關性,為更好的理解正畸牙齒移動的機理奠定基礎。實驗方法第一部分：正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達變化選取8周齡的C57BL/6小鼠為研究對象(每組6只),采用Waldo法建立牙齒正畸移動模型：即在麻醉條件下將一0.5mm×2mm的橡皮條放置在小鼠右側上頜第一、二磨牙之間,以第一磨牙遠中根及周圍牙周組織為感興趣區(qū)(近中為壓力側,遠中為牽張側)；左側上頜骨作為自身對照。施加正畸應力3天后,4%多聚甲醛心臟內灌注法處死動物,小心分離其上頜骨,進行脫水、包埋等一系列步驟后,制作5μm冠根向連續(xù)切片進行組織學觀察。通過HE染色觀察正畸力作用下牙周膜的組織形態(tài)學變化；用免疫組織化學手法檢測HMGB1在每組動物牙周膜中的表達情況。每個標本選取6張切片,每張切片選取三個不相重疊的視野,運用Image-pro-plus 6.2軟件進行牙周膜寬度的測量和免疫組化染色強度分析,并用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。第二部分：正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達的影響取8周齡骨膜蛋白基因敲除小鼠及其同窩出生的野生型小鼠作為研究對象,每組6只。實驗方法及結果分析方法同第一部分。實驗結果第一部分：正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達變化在未施加正畸應力時,小鼠第一磨牙遠中根兩側牙周膜的寬度一致,無明顯差異,牙周纖維排列規(guī)律,可見成纖維細胞與毛細血管分布其中；正畸施力后,牽張側牙周膜寬度增加,明顯大于未施力前的小鼠牙周膜寬度,纖維被拉仲變長,毛細血管管腔擴張,形態(tài)不規(guī)則。壓縮側牙周膜寬度明顯減小且伴有廣泛的玻璃樣變區(qū)域形成,組織學表現(xiàn)為細胞固縮凋亡,纖維排列雜亂無章,毛細血管管腔閉塞。免疫組織化學染色結果顯示：在未施加正畸應力時,小鼠牙周膜中有一定水平的HMGB1表達；施加正畸力后,HMGB1在牽張側的表達明顯增加；壓縮側牙周膜的表達明顯減少。第二部分：正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達的影響在未施加正畸應力時,骨膜蛋白基因敲除小鼠和野生對照小鼠第一磨牙遠中根兩側牙周膜的寬度一致,且兩組間牙周膜寬度無明顯差異；正畸施力后,兩組牽張側牙周膜的寬度較未施力前均明顯增加,但骨膜蛋白敲除組的牙周膜寬度仍小于野生組的牙周膜寬度；而與牽張側的結果相反,兩組壓縮側牙周膜寬度較未施力前則明顯減小,但骨膜蛋白敲除組的牙周膜寬度仍大于野生組的牙周膜寬度。免疫組織化學染色結果顯示：未施力前,HMGB1在骨膜蛋白敲除小鼠牙周膜中的基本表達量要明顯多于在野生對照組小鼠牙周膜中的基本表達量；正畸施力后,骨膜蛋白敲除組和野生組牽張側牙周膜中HMGB1的表達較未施力前均明顯增加,但骨膜蛋白敲除組與野生組HMGB1表達陽性細胞數(shù)量無明顯差異；骨膜蛋白敲除組和野生組壓縮側牙周膜均有廣泛的玻璃樣變區(qū)域形成且HMGB1的表達較未施力前明顯減少,兩組牙周膜HMGB1表達陽性細胞數(shù)量無明顯差異。結論1. HMGB1主要表達于牙周膜成纖維細胞的細胞核中,正畸施力后,牽張側與壓縮側牙周膜中HMGB1的表達發(fā)生變化且在兩側的變化不一致：牽張側牙周膜表達增加,壓縮側牙周膜表達減少。2.在未施加正畸應力時,骨膜蛋白基因敲除小鼠牙周膜中HMGB1的表達要明顯多于野生組；施加正畸應力后,基因敲除組牽張側牙周膜中HMGB1的表達較未施力前明顯增多,但與施力后野生組牽張側牙周膜中HMGB1的表達無明顯差異；壓縮側牙周膜形成玻璃樣變,HMGB1的表達明顯減少。我們可以推測骨膜蛋白對牙周膜中HMGB1的表達有抑制作用,但在正畸牙齒移動過程中,相對于骨膜蛋白,正畸應力仍是影響牙周膜HMGB1表達的主要因素。
【關鍵詞】：正畸力 骨膜蛋白 牙周膜 HMGB1
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 前言14-18
• 第一部分 正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達變化18-32
• 材料與方法19-25
• 結果25-29
• 討論29-32
• 第二部分 正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達的影響32-42
• 材料與方法34
• 結果34-39
• 討論39-42
• 全文結論42-43
• 參考文獻43-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文51-52
• 學位論文評閱及答辯情況表52

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1 毛釗;影響牙周膜細胞生物學功能的相關因素[J];醫(yī)學研究生學報;2003年06期

2 凌均h，

本文編號：1081400