本文關(guān)鍵詞：正畸牙移動過程中骨膜蛋白與高遷移率族蛋白1表達(dá)的相關(guān)性

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【摘要】：研究背景和目的在口腔正畸臨床工作中,我們通過施加機(jī)械應(yīng)力調(diào)整牙齒的位置來實(shí)現(xiàn)治療錯頜畸形的目的,而實(shí)現(xiàn)這一過程的生物學(xué)基礎(chǔ)在于牙周組織的改建。當(dāng)牙齒受到正畸矯治力作用時,牙槽骨壓力側(cè)與張力側(cè)分別發(fā)生骨吸收和骨形成,最終實(shí)現(xiàn)牙齒移動。多種細(xì)胞因子相互作用,參與牙周組織的改建過程。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種非組蛋白染色體結(jié)合蛋白,其作為核蛋白調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的作用已引起人們的廣泛關(guān)注,近年來其作為晚期炎癥因子的角色也逐漸引起人們的高度重視。它可以通過主動釋放和被動釋放兩種方式由細(xì)胞核釋放到細(xì)胞質(zhì),進(jìn)而釋放到細(xì)胞外基質(zhì)中,發(fā)揮免疫介質(zhì)的作用。有研究表明,HMGB1在牙周膜細(xì)胞中有基本表達(dá)量,牙周膜細(xì)胞將其釋放到細(xì)胞外后能與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(Receptor for Advanced Glycation End Products, RAGE)特異性結(jié)合來調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞生成因子的表達(dá),參與骨改建過程。本實(shí)驗(yàn)第一部分通過Waldo法建立小鼠正畸牙齒移動模型,研究正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達(dá)變化。骨膜蛋白(Periostin, Pn)為一種分子量為90kD的多功能細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,主要表達(dá)在骨膜與牙周膜中,是參與牙周組織改建的重要蛋白。骨膜蛋白基因敲除小鼠牙齒萌出3個月后,牙周組織開始出現(xiàn)明顯的破壞,附著喪失嚴(yán)重且伴有牙槽骨的吸收。在正畸牙齒移動過程中,骨膜蛋白不僅能夠傳導(dǎo)機(jī)械應(yīng)力、維持應(yīng)力下牙周組織的完整性,而且還與牙周病及牙周組織的改建有著密切的關(guān)系。第二部分實(shí)驗(yàn)的研究目的旨在探討正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達(dá)的影響,從而將兩種參與牙周組織改建的重要蛋白聯(lián)系起來,分析兩者之間的相關(guān)性,為更好的理解正畸牙齒移動的機(jī)理奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法第一部分：正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達(dá)變化選取8周齡的C57BL/6小鼠為研究對象(每組6只),采用Waldo法建立牙齒正畸移動模型：即在麻醉?xiàng)l件下將一0.5mm×2mm的橡皮條放置在小鼠右側(cè)上頜第一、二磨牙之間,以第一磨牙遠(yuǎn)中根及周圍牙周組織為感興趣區(qū)(近中為壓力側(cè),遠(yuǎn)中為牽張側(cè))；左側(cè)上頜骨作為自身對照。施加正畸應(yīng)力3天后,4%多聚甲醛心臟內(nèi)灌注法處死動物,小心分離其上頜骨,進(jìn)行脫水、包埋等一系列步驟后,制作5μm冠根向連續(xù)切片進(jìn)行組織學(xué)觀察。通過HE染色觀察正畸力作用下牙周膜的組織形態(tài)學(xué)變化；用免疫組織化學(xué)手法檢測HMGB1在每組動物牙周膜中的表達(dá)情況。每個標(biāo)本選取6張切片,每張切片選取三個不相重疊的視野,運(yùn)用Image-pro-plus 6.2軟件進(jìn)行牙周膜寬度的測量和免疫組化染色強(qiáng)度分析,并用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。第二部分：正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達(dá)的影響取8周齡骨膜蛋白基因敲除小鼠及其同窩出生的野生型小鼠作為研究對象,每組6只。實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果分析方法同第一部分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果第一部分：正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達(dá)變化在未施加正畸應(yīng)力時,小鼠第一磨牙遠(yuǎn)中根兩側(cè)牙周膜的寬度一致,無明顯差異,牙周纖維排列規(guī)律,可見成纖維細(xì)胞與毛細(xì)血管分布其中；正畸施力后,牽張側(cè)牙周膜寬度增加,明顯大于未施力前的小鼠牙周膜寬度,纖維被拉仲變長,毛細(xì)血管管腔擴(kuò)張,形態(tài)不規(guī)則。壓縮側(cè)牙周膜寬度明顯減小且伴有廣泛的玻璃樣變區(qū)域形成,組織學(xué)表現(xiàn)為細(xì)胞固縮凋亡,纖維排列雜亂無章,毛細(xì)血管管腔閉塞。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：在未施加正畸應(yīng)力時,小鼠牙周膜中有一定水平的HMGB1表達(dá)；施加正畸力后,HMGB1在牽張側(cè)的表達(dá)明顯增加；壓縮側(cè)牙周膜的表達(dá)明顯減少。第二部分：正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達(dá)的影響在未施加正畸應(yīng)力時,骨膜蛋白基因敲除小鼠和野生對照小鼠第一磨牙遠(yuǎn)中根兩側(cè)牙周膜的寬度一致,且兩組間牙周膜寬度無明顯差異；正畸施力后,兩組牽張側(cè)牙周膜的寬度較未施力前均明顯增加,但骨膜蛋白敲除組的牙周膜寬度仍小于野生組的牙周膜寬度；而與牽張側(cè)的結(jié)果相反,兩組壓縮側(cè)牙周膜寬度較未施力前則明顯減小,但骨膜蛋白敲除組的牙周膜寬度仍大于野生組的牙周膜寬度。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：未施力前,HMGB1在骨膜蛋白敲除小鼠牙周膜中的基本表達(dá)量要明顯多于在野生對照組小鼠牙周膜中的基本表達(dá)量；正畸施力后,骨膜蛋白敲除組和野生組牽張側(cè)牙周膜中HMGB1的表達(dá)較未施力前均明顯增加,但骨膜蛋白敲除組與野生組HMGB1表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)量無明顯差異；骨膜蛋白敲除組和野生組壓縮側(cè)牙周膜均有廣泛的玻璃樣變區(qū)域形成且HMGB1的表達(dá)較未施力前明顯減少,兩組牙周膜HMGB1表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)量無明顯差異。結(jié)論1. HMGB1主要表達(dá)于牙周膜成纖維細(xì)胞的細(xì)胞核中,正畸施力后,牽張側(cè)與壓縮側(cè)牙周膜中HMGB1的表達(dá)發(fā)生變化且在兩側(cè)的變化不一致：牽張側(cè)牙周膜表達(dá)增加,壓縮側(cè)牙周膜表達(dá)減少。2.在未施加正畸應(yīng)力時,骨膜蛋白基因敲除小鼠牙周膜中HMGB1的表達(dá)要明顯多于野生組；施加正畸應(yīng)力后,基因敲除組牽張側(cè)牙周膜中HMGB1的表達(dá)較未施力前明顯增多,但與施力后野生組牽張側(cè)牙周膜中HMGB1的表達(dá)無明顯差異；壓縮側(cè)牙周膜形成玻璃樣變,HMGB1的表達(dá)明顯減少。我們可以推測骨膜蛋白對牙周膜中HMGB1的表達(dá)有抑制作用,但在正畸牙齒移動過程中,相對于骨膜蛋白,正畸應(yīng)力仍是影響牙周膜HMGB1表達(dá)的主要因素。
【關(guān)鍵詞】：正畸力 骨膜蛋白 牙周膜 HMGB1
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-14
• 前言14-18
• 第一部分 正畸牙齒移動過程中小鼠牙周膜HMGB1的表達(dá)變化18-32
• 材料與方法19-25
• 結(jié)果25-29
• 討論29-32
• 第二部分 正畸牙齒移動過程中骨膜蛋白基因敲除對小鼠牙周膜HMGB1表達(dá)的影響32-42
• 材料與方法34
• 結(jié)果34-39
• 討論39-42
• 全文結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文51-52
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表52

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1 毛釗;影響牙周膜細(xì)胞生物學(xué)功能的相關(guān)因素[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2003年06期

2 凌均h，

本文編號：1081400