本文關鍵詞：番茄紅素對大鼠肝臟缺血再灌注損傷過程中凋亡和自噬的作用

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【摘要】：目的：探討番茄紅素對大鼠肝臟缺血再灌注損傷過程中凋亡和自噬的作用。方法分組：采用80只SPF級SD大鼠,隨機分為假手術組,肝缺血再灌注組、番茄紅素治療組,番茄紅素+3-ma抑制組,每組20只。建立大鼠肝臟部分缺血再灌注模型：通過大鼠腹腔內(nèi)注射2%戊巴比妥鈉麻醉(0.2ml/100g)進行麻醉。取腹部正中縱行切口入腹,充分暴露腹腔內(nèi)臟器后,游離出第一肝門。使用無損顯微血管夾夾閉肝左、中葉脈管的共干40min,使得肝左葉及肝中葉缺血,以實現(xiàn)70%的肝臟組織缺血。腹壁切口覆蓋生理鹽水紗布,達到預定缺血時間后松開血管夾,隨后關腹。樣本的采集和觀察指標的測定：分別在缺血再灌注后1h、6h 12h、24h,予以取材檢測各項生化指標。采用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清中谷氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),運用雙抗體夾心ELISA法定量測定大鼠血清檢測相關細胞炎性因子TNF-a, IL-6, Western免疫印跡方法檢測肝臟組織中Beclin 1, bax;通過蘇木精-尹紅(HE)染色觀察各組肝臟組織病理學改變。兩組計量資料間比較用T檢驗,計數(shù)資料間比較行卡方檢驗。P值0.05認為有統(tǒng)計學差異,所有統(tǒng)計分析均使用正版SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件完成。結果1.血清ALT和AST水平的變化：與假手術組比較缺血再灌注組的血清中ALT和AST水平顯著升高(P0.05),其在再灌注6h后達到頂峰,然后逐漸下降,再灌注12、24h時血清ALT和AST水平逐漸下降。番茄紅素治療組與缺血再灌注組比較,番茄紅素+3-ma抑制組和番茄紅素治療組血血清ALT和AST水平相對升高(P0.05)。2.血清中TNF-a,IL-6炎性因子的水平變化：在肝臟缺血再灌注組大鼠血清中顯著升高,于再灌注后6h達到頂峰,而后在12h,24h逐漸下降,治療組顯著低于缺血再灌注組,且再灌注后6h有顯著差異(P0.01)。而抑制組中TNF-α,IL-6在各時段均高于治療組,于再灌注后6h有顯著差異(P0.01)3.肝臟細胞凋亡蛋白表達水平的變化：肝臟凋亡相關蛋白bax的表達顯示,肝臟缺血再灌注組大鼠再灌注后bax的表達水平上升,而番茄紅素治療組肝臟bax的表達相比降低,僅再灌注1h時兩組間無統(tǒng)計學差異。而抑制組與治療組相比降低了bax的表達,僅再灌注1h時兩組間無統(tǒng)計學差異。4.肝臟細胞自噬蛋白表達水平的變化,通過免疫印跡檢測肝臟自噬相關蛋白Beclin 1、蛋白的表達顯示,Beclin 1在再灌注后6 h時表達達到峰值,在12h和24h逐漸降低,番茄紅素治療組與缺血再灌注對照組相比增加了Beclin 1的表達,而加入自噬抑制劑3-MA,與治療組相比抑制了Beclin 1表達,顯示番茄紅素促進肝臟缺血再灌注肝細胞Beclin 1表達水平,促進了自噬。5.肝組織HE染色觀察：假手術組肝臟細胞形態(tài)正常,肝小葉、中央靜脈、匯管區(qū)結構清晰,肝細胞索排列整齊。肝臟缺血再灌注模型對照組大鼠與番茄紅素治療組各時間點相比,肝組織紋理不清,出現(xiàn)各種程度的水腫、壞死,以再灌注后6h時間點差異最為顯著,肝細胞出現(xiàn)空泡變性和壞死,胞核固縮并深染,而番茄紅素各治療組肝臟組織病理形態(tài)學明顯改善。結論發(fā)現(xiàn)番茄紅素預處理可以通過提高大鼠缺血再灌注肝臟自噬水平,降低血清ALT/AST水平并減輕炎癥反應以及減少肝細胞凋亡從而起到保護缺血再灌肝損傷。進一步通過加入自噬阻斷劑3-甲基腺嘌(3-MA),發(fā)現(xiàn)削弱了番茄紅素這種保護作用。在肝臟缺血再灌注損傷中,說明白噬的出現(xiàn)和作用與組織缺血情況、受損程度和作用時間有關,缺血時間短、對機體的打擊較弱,自噬激活,自噬在一定程度上可以減少細胞凋亡的發(fā)生。本研究表明番茄紅素具有通過促進自噬保護大鼠缺血再灌注肝損傷作用。該結果為番茄紅素保護肝臟缺血再灌注損傷提供了新的理論依據(jù),具有重要的臨床應用價值。
【關鍵詞】：番茄紅素 肝臟缺血再灌注損傷 凋亡 自噬
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R657.3
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-8
• 英文縮略詞表8-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-19
• 實驗結果19-27
• 討論27-31
• 結論31-32
• 參考文獻32-37
• 綜述37-46
• 參考文獻42-46
• 致謝46-47
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章47-48

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4 王s，

本文編號：1036479