發(fā)布時間：2017-10-11 02:26

  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對脂多糖攻擊小鼠血管反應(yīng)性的作用與機(jī)制

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【摘要】：多種嚴(yán)重感染因素引起的內(nèi)毒素休克(endotoxic shock,ES)、膿毒癥(sepsis)或膿毒癥休克(sepsis shock,SS)是臨床常見的危重病理過程;大量研究表明,內(nèi)毒素休克晚期出現(xiàn)了血管低反應(yīng)性,是引起微循環(huán)障礙以及組織低灌注的重要因素。白藜蘆醇(resveratrol,Res),具有多種生物活性;近年來的研究也發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇對內(nèi)毒素休克具有良好的干預(yù)作用,表現(xiàn)在減輕重要器官肺、腎、肝的結(jié)構(gòu)損傷與功能障礙,多途徑、多靶點(diǎn)地降低氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng),改善微循環(huán)灌注狀態(tài)。但是,白藜蘆醇對內(nèi)毒素休克血管低反應(yīng)性的作用如何,還未見報(bào)道。為此,本研究建立了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻擊小鼠模型,應(yīng)用微血管張力測定技術(shù),觀察白藜蘆醇對其血管反應(yīng)性的作用。首先,本文觀察了白藜蘆醇對腹腔注射LPS攻擊小鼠的作用。24只BALC/c雄性小鼠隨機(jī)均分為:假手術(shù)組(Sham)、Sham+Res、LPS、LPS+Res組,其中:LPS與LPS+Res組小鼠均腹腔注射LPS(35mg/kg,5 mg/ml),1 h后,LPS+Res組小鼠肌肉注射Res(30 mg/kg,300 mg/ml),LPS組小鼠僅注射等體積的溶媒——二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO);Sham與Sham+Res組首先腹腔注射等體積的生理鹽水,1 h后,Sham+Res組小鼠肌肉注射等體積的Res,Sham組注射等體積的DMSO,記錄存活時間。然后,54只BALC/c雄性小鼠隨機(jī)均分為9組:正常對照組(Control)、Sham 6 h、Sham+Res6 h、LPS 6 h、LPS+Res 6 h、Sham 12 h、Sham+Res 12 h、LPS 12 h、LPS+Res 12 h組,Control組不給予任何處理因素,其它組處理因素同前述。在相應(yīng)時間點(diǎn)的前1 h,小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉全身麻醉(70mg/kg,1%),行股部手術(shù),剝離右股動脈,連接生物信號采集系統(tǒng),記錄MAP;行頸部手術(shù),剝離右側(cè)頸靜脈,用注射器經(jīng)頸靜脈注射去甲腎上腺素(norepinephrine,NE,4.2μg/kg),記錄NE注射后MAP的最大值,以注射前后MAP的差值(△MAP)評價小鼠的整體升壓反應(yīng)。另取24只小鼠,隨機(jī)均分為:sham、sham+res、lps、lps+res組,按上述相同方法進(jìn)行處理,于lps注射6h,麻醉狀態(tài)下,留取小鼠腸系膜二級微動脈血管,制備離體微血管環(huán),應(yīng)用離體血管張力系統(tǒng)檢測微血管對梯度ne收縮反應(yīng)性的變化。結(jié)果顯示,sham與sham+res組小鼠存活時間均超過24h,長期存活;lps+res組小鼠存活時間(17.59±2.24h)顯著長于lps組(14.37±1.96h,p0.05)。sham6h、sham+res6h、sham12h、sham+res12h的map與△map均與control組無顯著差異(p0.05);lps6h、lps+res6h組的map均顯著低于、△map均顯著高于control、sham6h、sham+res6h組(p0.05);lps12h、lps+res12h組的map均顯著低于、△map均顯著高于control、sham12h、sham+res12h組(p0.05);lps6h與lps+res6h、lps12h與lps+res12h組的map和△map均無顯著差異(p0.05)。sham+res組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性在ne濃度為1×10-7,3×10-7mol/l時顯著高于sham組(p0.05);lps組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性顯著低于sham組(1×10-6,3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l,p0.05)、sham+res組(1×10-7,3×10-7,1×10-6,3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l,p0.05);lps+res組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性曲線相對于lps組左移,在3×10-6,1×10-5,3×10-5mol/l時顯著高于lps組(p0.05)。然后,本文觀察了靜脈注射lps后白藜蘆醇的作用及機(jī)制。第一,取24只balb/c雄性小鼠隨機(jī)均分為sham、sham+res、lps、lps+res組,其中:lps與lps+res組行頸部手術(shù),經(jīng)頸靜脈注射lps(5mg/kg,5mg/ml),縫合傷口,1h后,lps+res組小鼠肌肉注射res(30mg/kg,300mg/ml),lps組小鼠僅注射等體積的dmso;sham與sham+res組經(jīng)頸靜脈注射等體積的生理鹽水,1h后,sham+res組小鼠肌肉注射等體積的res,sham組注射等體積的dmso,記錄存活時間。第二,取24只balb/c雄性小鼠隨機(jī)均分為sham、sham+res、lps、lps+res組,腹腔注射戊巴比妥鈉全身麻醉(70mg/kg,1%)后,行股部手術(shù),剝離右股動脈,連接生物信號采集系統(tǒng),記錄map;然后按前述方法分別進(jìn)行處理;在lps注射后6h,經(jīng)頸靜脈注射去甲腎上腺素(norepinephrine,ne,4.2μg/kg),按前述方法評價小鼠的整體升壓反應(yīng)。第三,取24只小鼠,隨機(jī)均分為sham、sham+res、lps、lps+res組,按上述相同方法進(jìn)行處理,到相應(yīng)時間點(diǎn)時,留取小鼠腸系膜二級微動脈血管,制備離體微血管環(huán),應(yīng)用離體血管張力系統(tǒng)檢測微血管對梯度ne收縮反應(yīng)性的變化,應(yīng)用rhoa、rock和mlcp的工具藥分別觀察了對sham、sham+res、lps、lps+res組微血管環(huán)反應(yīng)的作用,探討rhoa在白藜蘆醇改善lps攻擊小鼠血管反應(yīng)性中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),sham與sham+res組小鼠存活時間均超過24h,長期存活;lps+res組小鼠存活時間(20.45±2.81h)顯著長于lps組(13.89±2.37h,p0.05)。sham與sham+res組的map與△map無顯著差異(p0.05);lps、lps+res組的map均顯著低于、△map均顯著高于sham、sham+res組(p0.05),兩組間的map與△map無顯著差異(p0.05)。sham與sham+res組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性除10-6mol/l外無顯著差異(p0.05);lps組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性顯著低于sham組(3×10-5,10-5,3×10-6,10-6,3×10-7,10-7mol/l,p0.05)、sham+res組(3×10-5,10-5,3×10-6,10-6mol/l,p0.05);lps+res組小鼠微血管對梯度ne的反應(yīng)性曲線相對于lps組左移,在3×10-5,10-5,3×10-6mol/l時顯著高于lps組(p0.05)。同時,發(fā)現(xiàn)rhoa激動劑u-46619可提高sham與sham+res組、mlcp抑制劑oa提高sham組、rock抑制劑y-27632均降低sham與sham+res組微血管在多個ne濃度點(diǎn)的反應(yīng)性(p0.05);u-46619提高了lps組微血管在多個ne濃度點(diǎn)的反應(yīng)性,該作用被y-27632抑制(p0.05);oa對lps組微血管反應(yīng)性無明顯的作用,但聯(lián)合y-27632能降低lps微血管的反應(yīng)性(p0.05);y-27632均顯著降低了lps+res組微血管在多個ne濃度點(diǎn)的反應(yīng)性,該作用被u-46619所抑制(p0.05)。研究結(jié)果表明,在一定程度上,白藜蘆醇均可抑制腹腔注射和靜脈注射LPS攻擊引起小鼠離體血管的低反應(yīng)性,延長存活時間,但對小鼠的動脈血壓水平、整體升壓反應(yīng)沒有明顯的改善作用;同時,LPS攻擊小鼠后,整體升壓反應(yīng)與離體微血管反應(yīng)性出現(xiàn)了不一致現(xiàn)象,可能與LPS發(fā)揮的擬交感作用有關(guān),相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究;Res提高LPS靜脈攻擊小鼠血管反應(yīng)性的作用與RhoA-ROCK-MLCP有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 內(nèi)毒素休克 升壓反應(yīng) 血管反應(yīng)性 RhoA-ROCK-MLCP信號通路 小鼠
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 英文縮寫14-15
• 前言15-16
• 材料與方法16-23
• 結(jié)果23-27
• 附圖27-36
• 附表36-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述 白藜蘆醇干預(yù)內(nèi)毒素休克的作用與機(jī)制45-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-59
• 個人簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 許書見;黃星星;朱瑞芳;余書勤;;白藜蘆醇對脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷的保護(hù)作用[J];中國生化藥物雜志;2009年06期

2 余應(yīng)喜;范晶;張苜;;白藜蘆醇對膿毒癥大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用及對巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-2、IL-10、IL-18表達(dá)的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年08期

3 舒仕瑜;王興勇;葉茂;王麗佳;李廷玉;;白藜蘆醇苷上調(diào)Clara細(xì)胞分泌蛋白表達(dá)緩解大鼠內(nèi)毒素休克性肺損傷[J];中國新藥與臨床雜志;2009年12期

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本文編號：1009989