本文關(guān)鍵詞：丙泊酚后處理對氧糖剝奪海馬神經(jīng)元ADAR2-AMPAR受體GluR2通路的影響

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【摘要】：我國現(xiàn)有腦卒中患者700萬,年新增發(fā)病160萬,約60%患者不同程度喪失勞動力,因其高致殘性和致死性,給患者及社會帶來沉重負(fù)擔(dān);與此同時,臨床工作中圍術(shù)期手術(shù)操作如顱內(nèi)動脈瘤夾閉術(shù)等不可避免造成缺血再灌注損傷。作為臨床麻醉醫(yī)師,如何選擇合理有效的麻醉藥物及麻醉方法確保臨床腦缺血高危患者圍術(shù)期生命安全及預(yù)后,是值得慎重考慮的問題。通過長期前期研究,我們實驗課題組發(fā)現(xiàn),丙泊酚后處理神經(jīng)保護(hù)作用通過多種機(jī)制通路發(fā)揮作用,其中興奮性谷氨酸受體α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionic acid,AMPA)受體GluR2亞基在神經(jīng)突觸后膜發(fā)生膜轉(zhuǎn)位是其重要相關(guān)機(jī)制之一,然而如何調(diào)控AMPA受體GluR2亞基的上游機(jī)制卻并非完全清楚。因此,本研究旨在通過建立離體海馬神經(jīng)元氧糖剝奪模型,探討作用于RNA的腺苷脫氨酶2(adenosine deaminase acting on RNA2,ADAR2)-AMPA受體GluR2信號通路在丙泊酚后處理腦保護(hù)作用中的調(diào)控機(jī)制。實驗主要分為兩部分:第一部分,培養(yǎng)大鼠原代海馬神經(jīng)元并構(gòu)建離體海馬神經(jīng)元氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型。第二部分,探討ADAR2-AMPA受體GluR2信號通路在丙泊酚后處理神經(jīng)保護(hù)作用中的作用。課題組通過采用隨機(jī)數(shù)字表格法將原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元依次分為四組(n=6):正常隨機(jī)對照組(Con組),氧糖剝奪組(OGD組),氧糖剝奪+丙泊酚后處理組(Pro組),ADAR2 siRNA干擾組+氧糖剝奪+丙泊酚后處理組(siADAR2組)。24小時后采用普通光鏡照相觀察神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài),分別運(yùn)用乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)法和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法檢測原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞存活率,蛋白免疫技術(shù)(Western Blot,WB)方法檢測AMPA受體GluR2亞單位和ADAR2核蛋白編輯酶蛋白表達(dá),巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和特異性限制性內(nèi)切酶BbV1方法檢測AMPA受體GluR2亞單位mRNA Q/R位點(diǎn)編輯比例,采用細(xì)胞流式檢測技術(shù)檢測原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。實驗結(jié)果表明:第一部分,原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示,原代培養(yǎng)細(xì)胞中絕大部分細(xì)胞為微管結(jié)合蛋白(microtubule associated protein,MAP2)標(biāo)記陽性的神經(jīng)元細(xì)胞,神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)純度達(dá)到95%以上(P0.05),符合實驗條件,可以繼續(xù)用于下一步實驗研究;MTT實驗結(jié)果顯示,與隨機(jī)對照組相比,氧糖剝奪1h、2h和4h發(fā)生時原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞吸光度值下降明顯并具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),提示原代海馬神經(jīng)元氧糖剝奪模型構(gòu)建成功,同時實驗數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)氧糖剝奪1h時原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞吸光度值為正常對照組組52%左右,因此選擇1h作為原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞氧糖剝奪處理時間。第二部分,與正常對照組相比,O組和Pro組原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞凋亡率增加,細(xì)胞存活率下降,AMPA受體GluR2亞單位mRNA Q/R位點(diǎn)編輯比例下降,ADAR2蛋白核轉(zhuǎn)位降低,神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化顯著增加(P0.05);與OGD組相比,Pro組原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞凋亡率降低,細(xì)胞存活率增加,AMPA受體GluR2亞單位mRNA Q/R位點(diǎn)編輯比例提高,ADAR2蛋白發(fā)生核轉(zhuǎn)位并比例增加,神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化顯著降低(P0.05);以上作用均可被ADAR2 siRNA部分阻斷。因此,丙泊酚后處理對原代培養(yǎng)的氧糖剝奪海馬神經(jīng)元具有急性腦保護(hù)作用,其神經(jīng)保護(hù)機(jī)制可能與提高原代培養(yǎng)的氧糖剝奪海馬神經(jīng)元ADAR2蛋白核轉(zhuǎn)位,促進(jìn)AMPA受體GluR2亞單位mRNA Q/R位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄后編輯比例增加,從而穩(wěn)定神經(jīng)元突觸后膜GluR2亞單位膜轉(zhuǎn)位有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：丙泊酚 后處理 神經(jīng)元 氧糖剝奪 腺苷脫氨酶 腦保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 對象和方法14-32
• 對象14
• 材料14-17
• 方法17-32
• 結(jié)果32-40
• 討論40-49
• 結(jié)論49-50
• 創(chuàng)新點(diǎn)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-58
• 綜述58-67
• 綜述參考文獻(xiàn)65-67
• 致謝67

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本文編號：1009057