本文關(guān)鍵詞：BMP7在異氟醚后處理對(duì)抗大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用

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【摘要】：目的:大腦缺血后90 min在再灌注即刻單次吸入1 MAC或2 MAC或3 MAC的異氟醚60 min,觀察是否產(chǎn)生腦保護(hù)作用。探討B(tài) MP7在異氟醚后處理局灶性腦缺血再灌注損傷中的作用。方法:清潔級(jí)健康S D雄性大鼠70只,2.5月齡,體重230-260 g,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為5組:假手術(shù)組(S組)、單純大腦缺血再灌注組(I/R組)、異氟醚后處理組(1 MAC ISO,ISPOC1組;2 MAC ISO,ISPOC2組;3 MAC ISO,ISPOC3組)、阻斷劑+異氟醚后處理組(LDN+ISO;Noggin+ISO;SB+ISO組)、阻斷劑組(LDN;Noggin;SB組)。采用大腦中動(dòng)脈線栓法阻斷前腦血供90min、再灌注24h制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型。異氟醚后處理組于再灌注即刻經(jīng)緊閉式異氟醚麻醉箱吸入不同濃度異氟醚+空氣,持續(xù)60 min。S組和IR組在假手術(shù)或MCAO模型制備完成后于再灌注即刻在緊閉式麻醉箱內(nèi)吸入空氣。阻斷劑+異氟醚后處理組分別在制備MCAO前30 min腹腔注射相應(yīng)的阻斷劑,余同I SPOC1組。阻斷劑組分別在制備MCAO前30 min腹腔注射相應(yīng)的阻斷劑,余同M CAO組。所有大鼠分別在再灌注24 h后,觀察大鼠神經(jīng)行為學(xué)改變,用Zea Longa評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷評(píng)分。完成神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分后分別進(jìn)行T TC染色測(cè)量大鼠腦梗死體積百分比、H E染色觀察大鼠海馬區(qū)的顯微形態(tài)學(xué)改變、凋亡試劑盒染色檢測(cè)大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況、尼氏染色觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元內(nèi)蛋白合成功能改變情況、免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠海馬組織C A1區(qū)BMP7、P38MAPK蛋白表達(dá)情況、蛋白印記法觀察大鼠海馬組織BMP7、Smad1/5/8、P38MAPK蛋白表達(dá)的變化。所有統(tǒng)計(jì)分析均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。結(jié)果:模型成功率為79.2%。與I/R組相比,再灌注24 h后,ISPOC1組和ISPOC2組均神經(jīng)功能缺陷評(píng)分及腦梗死面積明顯下降(P0.05),ISPOC3組神經(jīng)功能缺陷評(píng)分和腦梗死面積未見明顯改善(P0.05)。通過病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn):1 MAC和2 MAC異氟醚后處理能明顯改善MCAO模型鼠再灌注24 h后海馬組織CA1區(qū)的細(xì)胞損傷情況(P0.05),3 MAC異氟醚后處理組海馬組織細(xì)胞損傷情況和I/R組相比未見明顯改善(P0.05)。而在后處理前120 min給予腹腔注射BMP7抑制劑L DN-193189或Noggin,1 MAC ISPOC的保護(hù)作用明顯減弱(P0.05)。再灌注24 h后,1 MAC ISPOC組海馬CA1區(qū)BMP7表達(dá)明顯增加(P0.05),在后處理前120 min給予腹腔注射BMP7抑制劑N oggin或P38MAPK抑制劑SB203580,CA1區(qū)BMP7表達(dá)明顯下降(P0.05)。Noggin對(duì)I SPOC后海馬CA1區(qū)BMP7表達(dá)的抑制明顯強(qiáng)于LDN-193189(P0.05)。阻斷BMP7信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),磷酸化P38MAPK表達(dá)水平上調(diào),阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),BMP7表達(dá)水平下降(P0.05)。結(jié)論:異氟醚后處理能改善大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的程度,就本研究而言,1MAC異氟醚后處理神經(jīng)保護(hù)作用最強(qiáng);異氟醚后處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的部分保護(hù)作用是由B MP7介導(dǎo)的,阻斷B MP7信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)能明顯減弱此種保護(hù)作用。異氟醚后處理發(fā)揮對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的過程中,B MP7與P38MAPK信號(hào)之間存在交互作用。
【關(guān)鍵詞】：異氟醚后處理 腦缺血再灌注 神經(jīng)功能缺陷評(píng)分 腦梗死容積 尼氏小體
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-9
• 中英文縮略詞對(duì)照表9-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-23
• 1. 材料13-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)措施15-16
• 2.2 大鼠大腦局灶性缺血再灌注損傷模型MCAO的制備16
• 2.3 異氟醚后處理16
• 2.4 神經(jīng)功能功能缺陷評(píng)分16-17
• 2.5 化學(xué)染色腦片測(cè)定腦梗死面積17
• 2.6 實(shí)驗(yàn)取材17-18
• 2.7 石蠟包埋切片18
• 2.8 HE染色18
• 2.9 尼氏染色18
• 2.10 TUNEL凋亡檢測(cè)18-19
• 2.11 海馬組織碘化丙啶（PI）染色細(xì)胞死亡檢測(cè)19
• 2.12 海馬組織石蠟切片免疫組織化學(xué)染色觀察CA1區(qū)P38與BMP表達(dá)變化19-20
• 2.13 蛋白印記法（Western-Blot）觀察海馬組織 P38 與 BMP 表達(dá)變化20-22
• 2.14 病理圖像觀察及分析22
• 2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析22-23
• 結(jié)果23-34
• 1. 實(shí)驗(yàn)MCAO模型制備結(jié)果23
• 2. 不同濃度異氟醚后處理對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況及神經(jīng)功能缺陷評(píng)分的影響23-24
• 3. 不同濃度異氟醚后處理缺血再灌注損傷腦梗死灶面積測(cè)定24-25
• 4. 不同濃度異氟醚后處理腦缺血再灌注損傷后海馬病理形態(tài)學(xué)變化25-27
• 5. 不同濃度異氟醚后處理組TUNEL凋亡情況27-28
• 6. 不同濃度異氟醚后處理組海馬組織CA1區(qū)細(xì)胞死亡情況28-29
• 7. 不同抑制劑對(duì)異氟醚后處理腦缺血再灌注損傷大鼠腦梗塞面積的影響29-30
• 8. 不同抑制劑對(duì)異氟醚后處理腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響30
• 9. 抑制劑對(duì)異氟醚后處理腦缺血再灌注損傷大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡的影響30-31
• 10. 免疫組織化學(xué)染色觀察各不同抑制劑組海馬CA1區(qū)P38與BMP7表達(dá)情況31-33
• 11.Western-Blot 觀察各不同抑制劑組海馬組織 P38 與 BMP7 表達(dá)情況33-34
• 討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-44
• 文獻(xiàn)綜述44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53-54
• 導(dǎo)師評(píng)閱表54

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本文編號(hào)：1001134