本文關(guān)鍵詞：人牙本質(zhì)基質(zhì)材料復合人骨髓間充質(zhì)干細胞用于牙根再生的研究

  更多相關(guān)文章： 人牙本質(zhì)基質(zhì)材料 骨髓間充質(zhì)干細胞 牙組織工程學 生物牙根

【摘要】：研究背景各種原因造成的牙齒缺失是人類的常見疾病,對患者的咀嚼、發(fā)音、美觀甚至心理健康都等有顯著影響。而目前,針對牙齒缺失的修復方法有很多,但最接近真牙,經(jīng)久耐用的方法卻較少。種植牙作為修復牙齒缺失一種良好的方法,可以與牙槽骨較好的結(jié)合(骨結(jié)合),但種植牙缺乏一種重要的天然牙根結(jié)構(gòu),即牙周組織[1]。因此,牙齒再生已成為國際口腔醫(yī)學研究的熱點。然而,要再生一個完整的牙,需要突破很多科學難點,解決很多再生醫(yī)學共同的難題[2-4]。近幾年有學者提出生物牙根的概念,即利用組織工程方法,用自然界存在的或人工合成的、且具有一定空間結(jié)構(gòu)的、有良好生物相容性的材料為載體,將一些具有成牙能力的細胞以特定方式“種植”到這種載體支架上,然后提供這些細胞增殖、生長和分化所需要的的生長因子微環(huán)境。通過細胞相互間的黏附、生長、增殖和分化,在體外或體內(nèi)形成具有一定牙周韌帶結(jié)構(gòu)的牙根[3]。單純的牙根構(gòu)建不涉及調(diào)控牙冠的形態(tài)和大小,在牙齒組織工程研究中具有獨特的優(yōu)勢,如果能再生出一個具有牙周韌帶結(jié)構(gòu)的生物牙根,并在其基礎(chǔ)上進行樁冠修復,將有望成為一種理想的修復牙缺失的再生醫(yī)學治療方法[3-5]。這種具有生物活性的且有一定天然牙根結(jié)構(gòu)的組織工程牙根有很大可能取代目前臨床上使用的種植義齒修復術(shù)。牙根再生是全牙再生的關(guān)鍵科學問題,牙根再生的實現(xiàn)對于臨床應用具有重要的意義,可為牙冠構(gòu)建或全牙構(gòu)建提供新的研究策略。種子細胞、支架材料和誘導微環(huán)境是生物牙根構(gòu)建的核心部分[6]。目前,已有學者利用組織工程技術(shù),使用牙源性間充質(zhì)干細胞和生物支架材料在體內(nèi)或者體外成功的構(gòu)建了具有牙周膜、牙骨質(zhì)和牙槽骨的生物牙根[7]。然而,在此構(gòu)建中應用的種子細胞均為牙源性干細胞[8-9]。雖然牙源性間充質(zhì)干細胞具有良好的成牙分化能力,但實際臨床上該類細胞僅能通過拔除正常牙齒才能獲得,且獲得的數(shù)量有限,因此在臨床上獲取患者自體牙源性間充質(zhì)干細胞受到一定限制[4]。例如,對于無牙頜病人及全口牙缺失或者不愿拔出牙齒的患者,如何獲取到這些牙源性細胞,是一個有可能阻礙今后牙根再生在臨床上應用的問題。在牙源性干細胞來源受到限制的情況下,探索利用人體中已成功分離出的具有轉(zhuǎn)分化能力的多種成體干細胞進行牙齒再生成為必然的選擇。如何誘導非牙源性干細胞牙向分化,建立效果明確且穩(wěn)定的誘導體系,是解決牙齒再生細胞來源問題的關(guān)鍵。來源于骨髓的間充質(zhì)細胞(英文全稱為Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,簡稱BMMSCs)是一種具有較強增殖能力和多向誘導分化潛能的細胞,大量研究表明BMMSCs已被廣泛應用于骨組織工程。除此之外,BMMSC具有分化成其他組織甚至其他胚層細胞的可塑性,而且BMMSCs易于獲取,可以從患者自身獲得,避免了免疫排斥的問題[10]。人牙本質(zhì)基質(zhì)材料(英文全稱為human Treated Dentin Matrix,簡稱h TDM)已有研究證明是理想的牙組織工程的支架材料,人牙本質(zhì)基質(zhì)材料本身是一種細胞外基質(zhì),對細胞沒有毒性,并且具有良好的生物學性能。同時h TDM含有利于成牙的生長因子,這樣為細胞的生長提供了一個良好的微環(huán)境,本研究在以上研究的基礎(chǔ)上,通過h TDM復合BMMSCs的體外及體內(nèi)實驗,探究其BMMSCs的成牙能力。為組織工程方法實現(xiàn)牙根再生的研究提供依據(jù)。目的在以上研究的基礎(chǔ),本實驗利用改良的處理方法處理離體牙,從而得到新型人牙本質(zhì)基質(zhì)生物支架材料;在體外探究人牙本質(zhì)基質(zhì)材料對人骨髓間充質(zhì)干細胞生長、增值分化等生物學特性的影響,并且通過體內(nèi)、體外實驗探究人骨髓間充質(zhì)干細胞在人牙本質(zhì)基質(zhì)生物支架材料作用下,是否能夠進行成牙方面的分化。為以后的牙根再生的研究及臨床應用奠定基礎(chǔ)。材料和方法1.本實驗用骨髓從臨床進行正頜外科手術(shù)修復頜面部畸形的患者取得,經(jīng)過患者同意后,于術(shù)中切取患者上下頜骨時收集剩余的骨組織。采用組織塊培養(yǎng)的方法,進行骨髓間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)。2.本研究通過改良的梯度脫礦方法對人牙本質(zhì)基質(zhì)進行處理后得到的TDM,掃描電鏡下牙本質(zhì)小管充分暴露,并且管間和管周牙本質(zhì)纖維組織變的十分疏松。3.通過流式細胞術(shù)的方法對對本實驗細胞表面分子進行鑒定。4.利用細胞免疫組化的方法對本實驗的細胞進行來源鑒定。5.通過成脂、成骨實驗,探究本實驗獲取的骨髓間充質(zhì)干細胞的分化能力6.光鏡觀察TDM于骨髓間充后生物學特征的改變。7.采用real time PCR檢測經(jīng)過h TDM浸提液誘導之后的骨髓間充質(zhì)干細胞的成牙基因的表達的情況。8.h TDM復合BMMSCs移植到裸鼠皮下,體內(nèi)實驗探究TDM探究BMMSCs的成牙能力結(jié)果1采用組織塊培養(yǎng)法將頜骨剪碎的骨塊接種培養(yǎng)瓶,96h后首次換液,一周后光學顯微鏡下可見頜骨組織塊周圍有細胞長出,絕大部分為梭形、多邊形。然后細胞逐漸增多。傳代后細胞的形態(tài)變得更加多樣化。2將收到的新鮮的離體牙制作與牙根相似外形的TDM,材料約有1mm厚,表面形態(tài)十分光滑而且規(guī)則。電鏡下可見牙本質(zhì)小管充分暴露,并且管間和管周牙本質(zhì)纖維組織變的十分疏松。3培養(yǎng)細胞制作細胞爬片,固定后采用Vimentin、CK14進行免疫組化染色,確定細胞來源。Vimentin染色成陽性、CK14染色成陰性4網(wǎng),流式細胞儀上機,進行細胞表面CD分子檢測。檢測指標包括:CD105、D31、CD34、CD90、CD73、CD25、CD26、CD146、CD8b等。5人骨髓間充質(zhì)干細胞的成脂、成骨實驗表明人骨髓間充質(zhì)干細胞有較強的成脂成骨能力。6經(jīng)過h TDM作用人骨髓間充質(zhì)干細胞后,TDM有利于細胞的生長,發(fā)現(xiàn)細胞數(shù)目增加,細胞在材料表面有良好的附著。7采用real-time PCR定量檢測TDM的浸提液誘導h BMSCs3、7天后,h BMSCs的成牙相關(guān)基因表達明顯增加。8 h TDM復合BMMSCs移植到裸鼠皮下2個月后,發(fā)現(xiàn)TDM表面出現(xiàn)新生的牙本質(zhì)。結(jié)論1.采用組織塊培養(yǎng)法能夠分離得到人骨髓間充質(zhì)干細胞。2.骨髓間充質(zhì)干細胞來源于不表達上皮源性相關(guān)蛋白,表達間充質(zhì)細胞來源的相關(guān)標志,并且表達干細胞特性。3.h TDM能夠促進h BMSCs的牙向分化。
【關(guān)鍵詞】：人牙本質(zhì)基質(zhì)材料 骨髓間充質(zhì)干細胞 牙組織工程學 生物牙根
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 英語縮略詞索引15-16
• 引言16-19
• 第一部分 人骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定19-28
• 1 前言19
• 2 材料和方法19-24
• 3 結(jié)果24-26
• 4 討論26-27
• 5 結(jié)論27-28
• 第二部分 天然支架材料及誘導微環(huán)境的制備和構(gòu)建28-35
• 1 前言28-29
• 2 材料和方法29-30
• 3 結(jié)果30-31
• 4 討論31-34
• 5 結(jié)論34-35
• 第三部分 人牙本質(zhì)基質(zhì)材料復合人骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)、外實驗的研究35-45
• 1 前言35-36
• 2 材料和方法36-38
• 3 結(jié)果38-42
• 4 討論42-44
• 5 結(jié)論44-45
• 全文總結(jié)45-46
• 參考文獻46-51
• 綜述 利用組織工程技術(shù)構(gòu)建生物牙根的研究進展51-65
• 參考文獻61-65
• 個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術(shù)論文及研究成果65-66
• 致謝66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉冬梅;董福生;王潔;于利潔;;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1基因轉(zhuǎn)染豬體細胞的實驗研究[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2007年04期

2 劉冬梅;;作者來信[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學雜志;2007年05期

3 江龍;朱亞琴;;第三期牙本質(zhì)基質(zhì)形成的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2008年03期

4 張杰華;萬乾炳;;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白-1的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年02期

5 薛云鵬;張藝文;余擎;劉智廣;陶睿;;豬牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白提取物的分離純化及其活性檢測[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2009年05期

6 秘雙燕;王豫蓉;;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1在骨和軟骨中的研究進展[J];廣東醫(yī)學;2012年05期

7 占柳;謝淑娟;潘衛(wèi)紅;;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白-1及其相關(guān)蛋白礦化作用的研究進展[J];中華老年口腔醫(yī)學雜志;2012年02期

8 王學政;張更林;崔亞洲;劉建民;柴政斌;韓金祥;;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1功能片段的融合表達及其胞內(nèi)定位[J];中國生物制品學雜志;2013年04期

9 何恩寶;王彥;梁瀾晨;王煙嵐;林雪峰;;聚乙烯磷酸對牙本質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶活性的影響[J];中華口腔醫(yī)學研究雜志(電子版);2013年04期

10 趙大為;牙本質(zhì)基質(zhì)非膠原性蛋白[J];牙體牙髓牙周病學雜志;1995年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳補領(lǐng);逄鍵梁;張亞慶;;轉(zhuǎn)錄生長因子β1對人牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1基因轉(zhuǎn)錄活性的影響[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學學術(shù)會議論文集[C];2007年

2 逄鍵梁;吳補領(lǐng);柯杰;;人牙髓干細胞誘導后人牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1基因轉(zhuǎn)錄活性的變化及意義[A];2007年第七次全國牙體牙髓病學學術(shù)會議論文集[C];2007年

3 楊波;郭維華;田衛(wèi)東;;牙囊細胞膜片與牙本質(zhì)基質(zhì)構(gòu)建生物牙根相關(guān)研究[A];中華口腔醫(yī)學會第14次全國口腔醫(yī)學學術(shù)會議（2012年會）論文匯編[C];2012年

4 王麗珍;張偉國;宗莉娟;;小鼠牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1 cDNA的克隆及其在牙胚、鄰近骨組織中的表達[A];2004年上海市口腔醫(yī)學學術(shù)年會論文匯編[C];2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 逄鍵梁;人牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2006年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 裴飛;人牙本質(zhì)基質(zhì)材料復合人骨髓間充質(zhì)干細胞用于牙根再生的研究[D];鄭州大學;2016年

2 薛云鵬;豬牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白提取物的分離純化及活性檢測[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

3 黃楊;牙本質(zhì)基質(zhì)—富血小板血漿凝膠構(gòu)建牙髓組織工程支架的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2012年

4 劉巍;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白-1仿生多肽誘導Ⅰ型膠原仿生礦化的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2013年

5 那思家;利用三維根端牙乳頭干細胞聚合體和牙本質(zhì)基質(zhì)片段再生復雜牙髓組織的研究[D];佳木斯大學;2011年

6 高杰;大鼠牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1單克隆抗體的制備、鑒定及其組織表達特異性研究[D];第四軍醫(yī)大學;2002年

7 王學政;牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1的礦化功能研究[D];濟南大學;2013年

8 陳海霞;脫礦牙本質(zhì)基質(zhì)三維結(jié)構(gòu)及體外降解率的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

9 楊勝銀;脫礦牙本質(zhì)基質(zhì)骨誘導性及相關(guān)細胞鑒定的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

，

本文編號：712331